固体制剂中低含量API晶型鉴别

大多数情况下，原研药企业会使用API最稳定的晶型以避免在生产储存过程中发生晶型转变。为保险起见，仿制药企业通常会选择与参比制剂（RLD）或原研制剂相同的API晶型，以保证相似的稳定性和溶出特性。CDE发布的《化学仿制药晶型研究技术指导原则》中明确无论选择何种晶型，均应对所选择晶型进行充分的理化性质和稳定性研究。因此，确定原研/参比制剂及自制制剂中API晶型是仿制药研发的关键步骤。

晶型检测有着一系列可选择的分析方法，如X射线粉末衍射、差示扫描量热、热重分析、振动光谱（远红外光谱，红外光谱及拉曼光谱），以及相对较新的方法，如太赫兹光谱（Terahertz spectroscopy）、CARS、同步辐射X射线高分辨衍射（Synchroton PXRD）、核磁共振成像（NMR imaging）等。然而，对于制剂中无定形或低含量API的晶型鉴别，可用的方法就相对较为局限。

值得一提的是，通常辅料拉曼信号很弱，低于API信号，故拉曼技术用于不同厂家不同辅料的相同制剂时，可以在某些情况下完全排除辅料对API的干扰。该特性极利于制剂中低含量API的晶型鉴别，即使API的含量较低，其在制剂中的信号仍然有可能被检测到，这对于制剂中API的晶型鉴别尤为重要。

某原研片中API含量较低，仅为0.5%。文献报道，该API有A、B这2种晶型。比较原研片与文献中2种晶型的X射线粉末衍射图，未找到与2种晶型相对应的衍射峰，再将原研片与片剂中主要辅料一水乳糖的X射线粉末衍射图比较，发现其X射线粉末衍射图与一水乳糖几乎一致（见图1）；辅料一水乳糖严重干扰了制剂中API的衍射信号。

图1：原研片与一水乳糖X射线衍射图

图2：API晶型A、B的X射线衍射图

应用拉曼技术采集原研制剂的单点拉曼光谱，因单次采集样品信号面积小，可相对有效避开大量辅料的影响，采集到较强的API信号。如图3所示，若实验中使用的是反射模式，所采集到的样品信号主要来源于图中含有波浪线的矩形方框。

图3：拉曼信号采集示意图

将已采集到的原研制剂中的拉曼图谱与不同晶型的拉曼图谱相比较，即可鉴别制剂中的API晶型。如图4所示，该原研片采集到的单点拉曼光谱为较纯的API光谱，不受一水乳糖的干扰，且晶型A、B有不同的拉曼特征峰，比对原研片与晶型A、B的拉曼光谱（见图5中虚线框），可明显看出，原研片中的API为晶型B。

图4：原研片中活性成分信号和一水乳糖的拉曼光谱

图5：原研片与API晶型A和B的拉曼光谱比较

由于拉曼在检测时使用的是采点扫描，可以排除辅料干扰。另外不同晶型的拉曼特征峰是有差别的，利用这一点，可以很清晰的判断出制剂中API的晶型，在低含量API制剂中这样的准确度是PXRD无法实现的。应用拉曼技术，即使API含量低，也可以采集到API信号，并与原料药的拉曼信号做对比来判断晶型。

将拉曼显微光谱作为固体制剂无损分析手段应用于药学领域最早起源于20世纪90年代。与传统技术相比，拉曼显微光谱的最大优势在于它可以做到不破坏固体制剂的空间结构，无需研磨或前处理，“无损性”地分析样品化学成分或晶型，还能通过对不同横截面的表征，分析不同规格、形状样品的内部信息，得到API及辅料在制剂不同区域的分布。它所带来的分析信息有时可以起到其他技术所不能取代的功效，是常规的破坏性溶液分析技术如高效液相色谱（HPLC）、薄层色谱（TLC）、分子排阻色谱所无法实现或替代的。

参考文献：

[1]田芳, ZIMMERMANN Anne, MCGOVERIN Cushla,等. 拉曼技术在药物逆向工程中的应用[J]. 药学进展, 2016, 40(12):9.

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