参照胃黏膜HE切片图，分享HE染色的6个翻车现场及解决方案

如果你做的胃黏膜HE切片达到了这个标准，导师肯定就不会问你了。

那么一张好看的HE切片有哪些判断标准呢？

我们常常说，HE切片要做到完整、清晰、干净，膜就是膜，核就是核，细胞的组织结构要清晰可辨，有明显的边界。切片染色要均匀，表面没有污渍，干净透亮。

说的更详细一些就是：

HE染色后细胞核呈现深蓝色或蓝紫色，我们在看结果时要观察核的颜色深浅、形态大小、核质比等特征。这些是判断细胞活性和肿瘤良恶性的重要指标。肿瘤细胞会细胞核增大、颜色变深，同时核质比增大。

细胞质在HE染色中呈现粉红色至红色，我们需要观察细胞质的丰富程度、染色深浅来进行病理判断。不同的细胞类型细胞质染色深浅会有差异，嗜酸性颗粒染色较深。

除了细胞核和细胞质，组织中的其它成分在HE染色结果中颜色和形态大小也会存在差异，详细内容可以查看以下表格。

在了解了好的HE切片样子后，我们再来看看那些异常的实验结果吧！

接下来我们就详细的讲一讲这些翻车现场。

1整体偏蓝

HE切片整体偏蓝，细胞核甚至被染成黑色，背景深，看不清结构。

出现这种结果的原因可能是切片在苏木精中泡的太久或者染液太浓，当然，也可能是分化时间短或切片有点厚。

针对这种情况，我们可以缩短苏木精的染色时间1-2min，适当延长1%盐酸酒精分化的时间5-10s。建议分化在显微镜下操作，当核质染色分明后再进行下一步。伊红染液也有使用时长，建议超过两周的直接扔。新鲜的伊红染液浸泡1-2min足矣。

2整体偏红

切片整体偏红，细胞核颜色浅，细胞质也谈，核质对比度差。

原因无外乎：苏木精染色不足、分化超时、伊红染过了。面对这种结果，我们首先核查一下苏木精的使用记录，建议2-4周更换一次。苏木精的染色时间可以延长2-4min看看结果。分化的时间一定要严格控制，别超过15s。伊红染色后快速用水冲洗，防止染色过度。

3核非蓝色

细胞核可能是棕红、苍白或颜色太深。

有时候我们会将细胞核染成棕红色，究其原因是苏木精氧化失效或返蓝不够。建议我们在染色之前看看苏木精液面有没有氧化膜。氧化膜是有明显金属光泽的蓝紫色（或紫红色）薄膜，也常被称做“金属膜”或“彩虹膜”。如果有氧化膜建议使用前进行过滤。

苏木精失效或分化超时可能会造成细胞核苍白。旧液和洗液不能混合使用，换液就要整瓶换。分化不足会造成细胞核颜色过深，甚至将胞浆染成蓝色。建议重新进行一次分化，增加10s，并在显微镜下观察直至胞浆脱色。

4染色不均

切片出现花斑、边缘中心深浅不一结果。

HE切片染色不均可能是由多个原因造成的，比如切片脱蜡不彻底、片子薄厚不均等操作细节。切片机使用新的刀片，确保切片厚度维持在3-5μm。每次二甲苯的脱蜡时间在15min。染色过程中可以轻微晃动切片，确保试剂均匀染色。

5切片脱落

切片脱落、污染、有气泡等问题。

淋巴结、脾、骨髓等含血较多的组织容易脱片。这些组织在制备切片时，脱水透明要做透，切片厚度确保3-5μm。

有个偏方，据说对发脆发硬的组织有用，大家不妨试一下：棉签蘸5%氨水或2%冰醋酸，擦组织表面10到15秒，丢进冰水混合物泡1分钟再切。钙化、骨组织这类硬骨头，能明显改善。

6切片雾化

HE切片雾化会造成切片整体或局部呈现出半透明的“朦胧感”，组织结构和细胞细节模糊不清。肉眼可见切片表面有一层白色或灰白色薄雾，仿佛是隔着一层磨砂玻璃看东西。显微镜下，整个视野模糊不清，无法区分细胞核和细胞质。

切片雾化的主要原因是脱水不彻底。我们在实验过程中，要确保乙醇处理的顺序和时间完全正确。可以参考这样的操作流程：70%乙醇10-20s，80%乙醇10-20s，95%乙醇1-2min，无水乙醇2-3min。

脱蜡不彻底，切片会形成白色斑点。所以我们一直强调，脱蜡要彻底，严格按照流程操作。我们经过多年实践，形成了一套成熟的步骤，大家可以尝试一下：两次二甲苯，每次15min，无水乙醇2min，95%酒精2min，80%酒精2min，70%酒精2min。

总结一下

控制染色时间、分化时间，使用新鲜染液，并结合显微镜观察，是避免HE染色翻车的核心技巧。真正的技术，不是我们背下的实验参数，而是对变量的敏感度。

当我们能够从一张“蓝的发紫”的片子里，瞬间找到是分化时间的问题还是染液失效时，我们就真正的熟练掌握HE染色技术了，再也不怕导师半夜的微信问询了。