THP-1极化实操：从M0到M1/M2，手把手教你避坑！

1.背景介绍

在免疫学、炎症机制研究及药物筛选中，巨噬细胞的功能状态是研究热点之一。人THP-1细胞系因其来源稳定、遗传背景一致，被广泛应用于单核-巨噬细胞极化的体外研究。然而，如何高效、稳定地将THP-1诱导为M1型（经典活化）或M2型（替代活化）巨噬细胞，仍是实验成功的关键。

DOI:10.3390/biomedicines11020608

2.实验方案

极化前准备：

用于诱导极化的细胞代数不宜过高，诱导极化前使用流式细胞术检测THP-1细胞的CD14和CD11b表达，两者不表达或低表达的THP-1细胞才可用于后续实验。

M1/M2诱导

1.M1诱导：

用M0诱导培养基（1640完全培养基，含100 ng/mL PMA），将THP-1（状态良好，活率>95%，<20代）以 5×10⁵ cells/mL 密度接种于10 cm 培养皿（10 mL），培养24h，构建为巨噬细胞M0（细胞贴壁，伪足延伸）。预温PBS轻柔洗涤1-2次，去除PMA。更换为M1诱导培养基（1640完全培养基，含100 ng/mL LPS、20 ng/mL IFN-γ），培养48h。

阴性对照：用M0诱导培养基（1640完全培养基，含100 ng/mL PMA），将THP-1（状态良好，活率>95%，<20代）以 5×10⁵ cells/mL 密度接种于10 cm 培养皿（10 mL），培养24h，构建为巨噬细胞M0（细胞贴壁，伪足延伸）。预温PBS轻柔洗涤1-2次，去除PMA。更换为完全培养基，培养48h。建议用Accutase收样送检。

2.M2诱导：

用M0诱导培养基（1640完全培养基，含100 ng/mL PMA），将THP-1（状态良好，活率>95%，<20代）以 5×10⁵ cells/mL 密度接种于10 cm 培养皿（10 mL），培养24h，构建为巨噬细胞M0（细胞贴壁，伪足延伸）。预温PBS轻柔洗涤1-2次，去除PMA，更换为完全培养基，静息24h。然后更换为M2诱导培养基（1640完全培养基，含20 ng/mL IL-4、20 ng/mL IL-13），培养24h。

阴性对照：用M0诱导培养基（1640完全培养基，含100 ng/mL PMA），将THP-1（状态良好，活率>95%，<20代）以 5×10⁵ cells/mL 密度接种于10 cm 培养皿（10 mL），培养24h，构建为巨噬细胞M0（细胞贴壁，伪足延伸）。预温PBS轻柔洗涤1-2次，去除PMA，更换为完全培养基，静息24h。建议用Accutase收样送检。

3.应用场景

• 炎症与自身免疫病：模拟M1介导的炎症反应，用于抗炎药物筛选及炎症小体机制研究。

• 肿瘤免疫：构建M2型肿瘤相关巨噬细胞模型，研究免疫逃逸机制及重极化药物。

• 感染免疫：建立病原体-巨噬细胞互作模型，评估杀伤功能与免疫逃逸策略。

• 药物筛选：以M1/M2标志物为指标，定量评价候选化合物的免疫调节活性。

• 组织修复：模拟M2介导的组织重塑过程，评估促愈合材料及纤维化机制研究。