Caco-2细胞培养攻略

Caco-2细胞分离自一名72岁男性的直肠原位癌细胞，当长到满时表现出特征性的肠上皮细胞分化。因此，Caco-2细胞模型是十几年来国外广泛采用的一种研究药物小肠吸收的体外模型，具有相对简单、重复性较好、应用范围较广的特点。

Caco-2细胞基本信息:

名称：Caco-2（人结直肠腺癌细胞）

形态：上皮样

生长特性：贴壁

营养体系：79%MEM基础培养基+20%胎牛血清优级+ 1%双抗

图1 Caco-2（人结直肠腺癌细胞）

首先，我们要讨论的第一个问题是如何判断细胞状态好不好？为了更直观地了解细胞状态，我们可以看一下如下图2和图3。正常的Caco-2细胞呈岛状生长，细胞间连接紧密，细胞群的边界光滑，细胞群中常常含有巨大的空泡（属于正常现象）。

图2 Caco-2正常形态

图3 Caco-2正常形态

接下来，我们讨论第二个问题是该细胞消化难问题。该类细胞间连接紧密，细胞难以消化解离，并且培养时间越久，细胞间连接越紧密越难消化。所以，消化时要注意以下几点：

1、消化前用PBS清洗细胞两遍；2、消化时间控制在5-10分钟，当细胞能够被吹散为小的细胞团块时，即可终止消化；3、消化吹打成单个细胞再进行传代。

最后，我们要讨论的是细胞贴壁和增殖缓慢问题。尤其刚复苏时细胞贴壁特别慢，一般2到3天贴壁展开（还可能会有空泡）；有少量发亮的细胞漂浮或黏附在细胞克隆上是正常的，随后会进入克隆并正常生长；为避免在细胞附着初期干扰细胞，建议到第三天再换液。

同时该细胞增殖缓慢，倍增时间约为72小时，按1:3传代的情况下，约一周传代一次。由于该细胞对营养需求高，建议使用20%的优级胎牛血清。如果细胞随着培养过程，漂浮得越来越严重，甚至大块儿飘起，就要检查培养基成分和培养环境是否出现异常。