嘿！关于DSP空间组学的FAQ来喽~ （干货分享）

上期我们分享了"空间组学样本制备指南 | 打造完美切片：DSP技术样本处理全攻略"

本期我们将大家常见的问题以及项目经验为大家整理成了FAQ，趁热打铁与您分享！

1、DSP（Digital Spatial Profiling）是一个空间多组学技术，这些组学可以同时检测吗？具体包含哪些组学呢？

答：可以在一张切片同时检测转录组和蛋白组。包含哪些具体组学产品见下图1。

2、ROI和AOI有什么区别呢？

答：在 Digital Spatial Profiling (DSP) 技术中，ROI（Region of Interest）是指在组织切片上由研究者根据形态学特征或标记物选择的感兴趣区域，是进行空间分子分析的总体框架。

AOI（Area of Illumination/Analysis）则是 ROI 内部进一步定义的分析单元，代表实际进行荧光照射、寡核苷酸释放及分子信息采集的空间范围。

换言之，ROI 是"宏观选区"，决定研究的整体区域；AOI 是"微观划分"，决定数据获取的精细尺度。二者的合理结合可实现从组织结构层面到分子分辨层面的空间多组学解析。（具体可全选圈选模式见下图2）

3、DSP成像marker可以自由选择吗？

答：不完全自由，主要受荧光通道的限制。DSP主要包含以下四种荧光通道：

通道名称

典型代表荧光染料或用途

激发波长（峰值 ± 带宽）

发射波长（峰值 ± 带宽）

说明

FITC / 525 nm

Alexa Fluor 488, SYTO 13（DNA 染色）

480 ± 28 nm

516 ± 23 nm

常用于 DNA 染色（如 SYTO 13），无需用 DAPI，否则会损坏条码

Cy3 / 568 nm

AF532, Cy3, PE, TRITC

538 ± 19 nm

564 ± 15 nm

可用于细胞标记与结构识别

Texas Red / 615 nm

AF594, Texas Red, DyLight594

588 ± 19 nm

623 ± 30 nm

用于中红光区染色标记

Cy5 / 666 nm

AF647, Cy5, DyLight650

645 ± 19 nm

683 ± 30 nm

信噪比高，适合低丰度靶点检测

4、DSP实际圈选的界面怎么操作？

答：

（1）ROI/AOI圈选主界面。

（2）ROI圈选模式-多种可选

（3）ROI菜单（根据形状）

ROI菜单内容：①ROI名称、坐标及尺寸；②圈选面积&包含核数；③备注等其他信息（可选）；④AOI信息（可选）；⑤不超过660×770μm

（4）AOI菜单（根据颜色）

AOI定义：通道之间的逻辑运算；

通道阈值是所有ROI通用

（5）渲染设置内容：①Min&Max：明暗度和对比度；②不同样本或ROI可灵活调整

"空间维度+多组学"-高分中标公式!

本期分享挑选了top问题进行解答，若您对DSP有其他疑问，请随时联系小备~

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