高效抗体纯化：重组蛋白A、G、A/G、L填料技术剖析

1. 背景介绍

在生物技术和免疫学领域，抗体亲和配基是纯化和检测抗体的关键工具。这些配基是天然存在或经过基因工程改造的蛋白质，能够特异性地与抗体（免疫球蛋白）结合。其中，蛋白A、蛋白G、蛋白A/G和蛋白L是最常用和最重要的四种。它们各自具有独特的结合特性，适用于不同来源、不同类型的抗体。

蛋白A (Protein A)

蛋白A是来源于金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 细胞壁的一种蛋白质。它是最早被发现和商业化应用的抗体亲和配基之一。

蛋白G (Protein G)

蛋白G来源于G族和C族链球菌 (Streptococcus sp.)，为了提高其特异性，商业化的重组蛋白G通常会去除其白蛋白结合域，避免在从血清样品中纯化抗体时造成污染。

蛋白A/G (Protein A/G)

蛋白A/G是通过基因工程技术，将蛋白A和蛋白G的IgG结合域融合在一起而创造出的重组蛋白。它旨在结合二者的优点，提供最广泛的抗体结合能力。

蛋白L发现于消化链球菌 (Peptostreptococcus magnus) 的表面，其结合机制与前三者完全不同，这使其具有独特的应用价值。

图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域

表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析

表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和⼒

注：- 表示不包含；+ 表示中标组合；+++ 表示错误组合；NA 表示不适用或数据不可用。

2. 抗体亲和纯化填料参数：

注：

a：90%体积以上的微球在此粒径范围；

b：DBC10%测试条件为：10%流穿，6 min 停留时间；

c：推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下 2~6 min 停留时间的使用条件，并非只能在该流速范围内工作；

d：10 cm 柱高下的最大测试流速。

3. 应用数据：

图2 工艺溶剂稳定性

图3 不同蛋⽩A填料对NaOH的耐受性

图4 不同蛋⽩G填料的洗脱曲线，样品为h-IgG

图5

填料：重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF（中压预装柱）；

样品：牛血清，相对于填料约20 mg IgG/mL填料；

上样、结合缓冲液： 20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4, 10 CV；

洗脱缓冲液：100mM甘氨酸，pH 3.0，14 CV；

在位清洗（CIP）：100mM NaOH，10 CV

参考文献：

[1] Arora S, Saxena V, Ayyar BV. Affinity chromatography: A versatile technique for antibody purification. Methods. 2017 Mar 1;116:84-94. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.12.010. Epub 2016 Dec 22. PMID: 28012937.