TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)是一种结合了荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)的生物物理技术......
TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)是一种结合了荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨荧光(TRF)的生物物理技术。
● 荧光共振能量转移(FRET):当一个荧光分子(供体)吸收光能后,可以将激发能量非放射性地传递给另一个分子(受体),条件是受体在空间上足够接近供体(通常在1-10纳米范围内),且供体的发射光谱与受体的激发光谱有重叠。
● 时间分辨荧光(TRF):通过在停止激发光源后测量荧光衰减,区分短寿命的背景荧光和长寿命的信号荧光。TR-FRET通常使用镧系元素(如铕或铽)的螯合物作为长寿命的供体荧光团。
● 能量转移过程:在TR-FRET中,供体被激发后,如果与受体足够接近,能量会转移到受体并使其发射荧光。通过在激发后延迟一段时间再检测荧光,可以有效减少背景干扰。
数据示例
* 以上数据不能代替实验中获得的数据,只作为示例,结果可能因TR-FRET兼容仪器而异。
均相发光(HICA)
均相发光技术(HICA)是一种基于纳米微球的化学发光技术,利用两种微球(供体微球和受体微球)之间的能量传递来检测生物分子之间的相互作用。具体原理如下:
供体微球:表面包被有光敏剂(如酞菁染料),在680nm的红光激发下,将周围环境中的氧分子转化为高能态的单线态氧;
受体微球:表面包被有发光剂(如二甲噻吩衍生物)和稀土螯合物(如铕)。当单线态氧扩散到受体微球时,会激发发光剂产生610nm左右的荧光;
能量传递:当两种微球因生物分子相互作用(如抗原-抗体结合)而靠近至200nm以内时,单线态氧能够从供体微球传递到受体微球,从而产生发光信号。
数据示例
空白限:不同基质0.2-3pg/mL
动态范围:0~100000pg/mL
线性范围:0.39~10000pg/mL
高浓度CV值:1.5-5%
回收率:90%-110%
交叉干扰率:五种测试样本均为0%
生物发光
生物发光是一种化学发光现象,即在生物体内通过化学反应产生光信号,而不需要外部光源激发。这种发光过程通常涉及一种酶(发光酶)和其底物之间的反应。
以萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)为例,其发光过程如下:
底物和酶的结合:萤火虫荧光素酶的底物是荧光素(luciferin)。
荧光素酶结合ATP(三磷酸腺苷)和荧光素,形成一个酶-底物复合物。
氧化反应:在荧光素酶的催化下,荧光素与氧气发生氧化反应,生成氧化荧光素(oxyluciferin)。反应过程中,化学能被转化为光能,释放出一个光子。
光的产生:释放的光子产生可见光,通常为黄绿色光,波长约为560nm。
这种光信号可以被检测设备(如荧光光度计、发光成像系统)检测到。
数据示例
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