抗体亲和纯化填料解决方案

一、背景介绍

◆ 蛋白A是⾦⻩⾊葡萄球菌的细胞壁中的表⾯蛋⽩，它由折叠成三螺旋束的五个同源Ig结合域组成；

◆ 蛋白G是G、C型链球菌细胞壁中的⼀种蛋⽩质；

◆ 蛋白A/G是重组蛋⽩A蛋⽩G融合蛋⽩，融合了来⾃蛋⽩A的5个Fc结合域和蛋⽩G的3个Fc结合域；

◆ 蛋白L来源于⼤消化链球菌，并通过L链相互作⽤与免疫球蛋⽩结合。

图1 抗体与抗体亲和配基的作用区域

表1 蛋白A、G、L的抗体亲和性差异分析

表2 抗体亲和配基与不同来源及亚型抗体之间的亲和⼒

注：- 表示不包含；+ 表示中标组合；+++ 表示错误组合；NA 表示不适用或数据不可用。

二、抗体亲和纯化填料参数

注：

a：90%体积以上的微球在此粒径范围；

b：DBC10%测试条件为：10%流穿，6min停留时间；

c：推荐流速是指该流速可满足大部分柱高下2-6min停留时间的使用条件，并非只能在该流速范围内工作；

d：10cm柱高下的最大测试流速。

三、应用数据

图2 工艺溶剂稳定性

图3 不同蛋⽩A填料对NaOH的耐受性

图4 不同蛋⽩G填料的洗脱曲线，样品为h-IgG

图5

填料：重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF(中压预装柱)；

样品：牛血清，相对于填料约20mg IgG/mL填料；

上样、结合缓冲液： 20mM PB, 150mM NaCl, pH7.4, 10CV；

洗脱缓冲液：100mM甘氨酸，pH3.0，14CV；

在位清洗(CIP)：100mM NaOH，10CV