LNP递送mRNA，转染So easy！

背景介绍

裸露的RNA是带负电荷的亲水性大分子，因为细胞膜的静电排斥，难以进入细胞，且易被无处不在的RNA酶快速降解，所以需要保护性外壳才能进入细胞。细胞膜的组成主要是脂质，利用脂质囊泡包封RNA穿过细胞膜并将RNA释放到细胞质中。囊泡应该是一种带正电的脂质，才能够结合带负电的RNA。

然而，由永久性阳离子脂质组成的囊泡由于能与带负电的细胞膜发生静电作用而引起细胞毒性，脂质结构才能够对内体酸性环境响应而带正电荷的分子。

脂质纳米粒结构

LNP通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）(PL)、胆固醇和PEG化脂质。

脂质纳米粒递送机制

脂质纳米粒(LNP)作为mRNA的传递系统，其作用机制涉及多个步骤，确保mRNA安全有效地递送到目标细胞并表达蛋白。在LNP中，可电离的阳离子脂质发挥着重要作用，因为它可以带正电荷低于其Ka以介导在自组装成LNP期间负载带负电荷的RNA，在中性pH下不带电以最大限度地减少毒性，并在细胞吸收后再次带正电荷以促进内体逃逸随着内体pH降低。胆固醇和PEG脂质的变体已被证明可以调节LNP物理性质、纳米结构和最终功效。两性离子磷脂通常被称为"辅助脂质"。LNPs在保护mRNA、促进细胞内传递、以及激活免疫反应方面发挥关键作用。

LNP转染实验步骤

下述转染步骤中为6孔板单孔参考条件。对于其他培养形式，请参考表1。

1、mRNA 预混液制备

将2.5ug mRNA（浓度为1ug/uL）与60uL Buffer混合。

2、mRNA-easyLNP复合物

将62.5uL mRNA预混液与62.5uL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3s，混匀。

3、加入细胞

将125uL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻晃动使均匀分散。

4、分析时间

培养24-48h后分析。

表1 根据每孔使用的细胞培养容器的mRNA转染指南

实验示意图：