FOLR1在乳腺癌中的表达、预后价值及对细胞增殖的影响研究

本研究旨在探讨叶酸受体1（Folate-receptor 1, FOLR1）在乳腺癌患者中的表达情况及其预后价值，并检测FOLR1表达对乳腺癌细胞系增殖的影响。通过收集乳腺癌及癌旁正常组织样本进行qRT-PCR和免疫组化检测，分析FOLR1表达与临床病理特征及预后的关系，并利用siRNA技术敲低乳腺癌细胞MCF7中FOLR1的表达，进一步研究其对细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响。结果显示，FOLR1在乳腺癌组织中高表达，与肿瘤大小、Ki-67表达及TNM分期相关，且其高表达与患者低生存率相关。敲低FOLR1可抑制细胞增殖并降低PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。本研究揭示了FOLR1在乳腺癌中的重要作用，为乳腺癌的诊断和治疗提供了新的靶点。

一、引言

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均居高不下。尽管近年来乳腺癌的诊断和治疗技术取得了显著进展，但其预后仍不理想，尤其是在晚期和复发性病例中。因此，寻找新的生物标志物和治疗靶点对于改善乳腺癌患者的预后具有重要意义。

叶酸受体1（Folate-receptor 1, FOLR1）是一种高亲和力的叶酸结合蛋白，广泛存在于多种恶性肿瘤中，包括卵巢癌、肺癌和结直肠癌等。FOLR1在肿瘤细胞中的高表达与细胞增殖、侵袭和耐药性相关。然而，FOLR1在乳腺癌中的表达情况及其临床意义尚未完全明确。本研究通过检测乳腺癌组织中FOLR1的表达，分析其与临床病理特征及预后的关系，并探讨其对乳腺癌细胞增殖的影响，以期为乳腺癌的诊断和治疗提供新的思路。

二、材料与方法

（一）样本收集

本研究共收集了10例新鲜乳腺癌组织及其癌旁正常组织样本，用于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测FOLR1的表达差异。同时，收集了80例乳腺癌患者的临床病理学资料及预后信息，包括年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、TNM分期、Ki-67表达等。所有患者均在手术后接受了标准化的治疗方案，包括手术、化疗、放疗和内分泌治疗等。

（二）免疫组化检测

对80例乳腺癌组织及其癌旁正常组织蜡块进行免疫组化检测，使用针对FOLR1的特异性抗体进行染色。根据染色强度和阳性细胞比例对FOLR1的表达进行评分，分为低表达组和高表达组。评分标准如下：染色强度分为0 - 3分，阳性细胞比例分为0 - 4分，总分≥4分为高表达，<4分为低表达。

（三）qRT-PCR检测

提取10例新鲜乳腺癌组织及其癌旁正常组织的总RNA，逆转录为cDNA后，使用特异性引物进行qRT-PCR检测FOLR1的表达水平。以GAPDH为内参基因，采用2⁻▵▵Ct法计算相对表达量。

（四）siRNA转染及细胞实验

1. 细胞培养：选取人乳腺癌细胞系MCF7，培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于37℃、5% CO₂的培养箱中。2. siRNA转染：设计并合成针对FOLR1的特异性siRNA，使用Lipofectamine 2000转染试剂将siRNA转染至MCF7细胞中。转染48小时后，通过qRT-PCR检测FOLR1的mRNA表达水平，验证转染效率。3. CCK8实验：转染后48小时，将细胞接种于96孔板，每孔1000个细胞。使用CCK8试剂盒检测细胞增殖情况，每隔24小时测量一次吸光度值（OD值），连续检测5天。4. Western blot检测：提取转染后细胞的总蛋白，通过Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白（p-PI3K、p-Akt、PI3K、Akt）的表达水平。

三、结果

（一）FOLR1在乳腺癌组织中的表达

qRT-PCR结果显示，与癌旁正常组织相比，乳腺癌组织中FOLR1的表达水平显著升高（P<0.05）。免疫组化检测进一步证实了这一结果，FOLR1在乳腺癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织（P<0.05）。

（二）FOLR1表达与临床病理特征及预后的相关性

对80例乳腺癌患者的临床病理学资料进行分析，发现FOLR1的表达水平与肿瘤大小（P=0.027）、Ki-67表达（P=0.031）及TNM分期（P=0.041）显著相关。此外，Kaplan-Meier生存分析显示，FOLR1高表达组患者的总生存率显著低于低表达组（P<0.05），表明FOLR1的高表达与不良预后相关。

（三）FOLR1对乳腺癌细胞增殖的影响

通过siRNA技术成功敲低MCF7细胞中FOLR1的表达后，CCK8实验结果显示，敲低FOLR1显著抑制了MCF7细胞的增殖能力（P<0.05）。Western blot检测发现，敲低FOLR1后，细胞中p-PI3K和p-Akt的表达水平显著降低（P<0.05），而PI3K和Akt的总蛋白表达水平无明显变化。这表明FOLR1可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响乳腺癌细胞的增殖。

四、讨论

本研究通过qRT-PCR和免疫组化检测发现，FOLR1在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁正常组织，且其高表达与肿瘤的侵袭性特征（如肿瘤大小、Ki-67表达及TNM分期）密切相关。此外，FOLR1的高表达与患者的低生存率相关，提示其可能作为乳腺癌预后评估的生物标志物。在细胞水平上，敲低FOLR1的表达可显著抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖，并降低PI3K/Akt信号通路相关蛋白的磷酸化水平。这些结果表明，FOLR1可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进乳腺癌细胞的增殖。

PI3K/Akt信号通路在多种肿瘤中发挥重要作用，其异常激活与细胞增殖、存活和耐药性相关。本研究中，FOLR1的表达与p-PI3K和p-Akt的表达水平呈正相关，表明FOLR1可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为。然而，FOLR1的具体作用机制仍需进一步研究，例如其是否通过与叶酸或其他配体结合激活下游信号通路，以及是否存在其他信号通路的交叉调控等。

此外，本研究的样本量相对有限，尤其是在新鲜组织样本的qRT-PCR检测中，仅收集了10例样本。未来的研究应扩大样本量，进一步验证FOLR1在乳腺癌中的表达情况及其临床意义。同时，结合多中心的研究数据，将有助于更全面地评估FOLR1作为预后标志物的潜力。

综上所述，本研究揭示了FOLR1在乳腺癌中的高表达及其与不良预后的相关性，并通过体外细胞实验初步探讨了其对细胞增殖的影响机制。这些发现为乳腺癌的诊断和治疗提供了新的靶点，未来的研究将进一步探索FOLR1在乳腺癌中的作用机制及其临床应用价值。

打赏