文献分享：临床前FLT3L中和抗体AMG329开发参考

背景

受体酪氨酸蛋白激酶FLT3和FLT3配体的信号通路调节树突状细胞（DC）和其他髓系细胞（包括单核细胞）的发展和活性。FLT3/FLT3L信号传导的增加和循环FLT3L水平的升高与多种自身免疫性和炎症性疾病有关，包括类风湿性关节炎、干燥综合征和系统性红斑狼疮。

2025年7月7日安进公司Annie Lau-Kilby团队在MAbs上发表了一篇名为"Development and preclinical characterization of AMG 329: a human antibody neutralizing FLT3 ligand"的文章，该文章描述了一种针对人FLT3的IgG1单克隆抗体AMG 329的推导和体外表征，以及AMG 329对cynomolgus猴中循环DCs的药效动力学影响。

FLT3的表达分布和功能

FLT3在骨髓多能祖细胞上持续表达，但在pDCs、DC1s和一部分DC2s上维持；这些细胞依赖FLT3L来发育和存活。

（数据来源 uniprot）

DCs在激活先天免疫和适应性免疫中发挥重要作用，通过与T细胞相互作用启动免疫反应，并调节免疫激活与耐受之间的平衡；DCs已被认为是多种病理条件的潜在治疗靶点，包括自身免疫性疾病。pDCs尤其引起了关注，作为潜在的治疗靶点，因为它们涉及多种炎症和自身免疫性疾病，并且能够产生大量的I型干扰素和促炎细胞因子/趋化因子。

FLT3在单核细胞、B细胞和T细胞上被激活表达，而FLT3L似乎促进这些细胞的增殖和存活，在患有自身免疫或炎症性疾病患者中，抑制FLT3/FLT3L信号通路可能会减少pDCs、cDCs和单核细胞的促炎作用，从而减缓疾病进展。

（数据来源 Swiecki M, et al. Nat Rev Immunol. 2015）

AMG 329的制备优化和体外表征

AMG 329的亲本克隆5D9源于人类naïve噬菌体展示库；经三轮溶液相筛选富集到可结合人及食蟹猴（而非小鼠）FLT3L的抗体，并转化为ScFv-Fc或单链Fab。随后用人FLT3/FLT3L竞争HTRF高通量筛选阻断活性，阳性克隆再格式化为人IgG（含Fc沉默三重突变L234F/L235E/P331S）。经两轮亲和力成熟获得高亲和力变体AM40，与IgG-TM骨架组合后命名为 AMG 329（旧称MED1116/VIB-1116/HZN-1116）。BLI证实其直接阻断FLT3L-FLT3相互作用。

物种交叉反应性

FLT3L细胞外结构域在人类和食蟹猴之间的序列同源性为95%，在人类和小鼠之间为73%。AMG 329的亲本抗体5D9能够结合人类和食蟹猴的FLT3L，但不能结合小鼠的FLT3L。

FTL3L的中和作用

AMG 329特异性地中和了可溶性和细胞结合型的人类FLT3L，并且AMG 329既未中和小鼠也未中和大鼠的FLT3L，这表明中和FLT3L是物种特异性的。

AMG 329特异性地结合到FLT3L，而不结合或中和其他III类酪氨酸激酶受体配体（SCF、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）或血小板衍生生长因子（PDGF））。

FcR结合、抗体依赖性细胞毒性（ADCC）和C1q结合

在有异体外周血单个核细胞存在的情况下，AMG 329未诱导CD4+T细胞（用IL-7处理以上调FLT3L表达）中的细胞死亡，说明AMG 329没有抗体依赖性的细胞毒性。与Fc新生儿受体（FcRn）的结合不受AMG 329 Fc的三重突变的影响。通过ELISA分析发现AMG 329在体外未与人类C1q结合。

AMG 329不会诱导ADCC，并且不太可能诱导补体依赖的细胞毒性，这表明Fc相关的脱靶效应的可能性较低。

药理动力学和药代动力学分析

通过为期5周5次给药和27周14次给药的毒性研究中，发现AMG 329的给药以非剂量依赖性方式减少了pDC、cDC1、cDC2和经典单核细胞的相对比例。pDCs、cDC1s和cDC2s的相对比例在恢复期有所维持。恢复期结束时一般恢复到基线水平。这些结果说明在食蟹猴中，AMG 329相关的外周血pDCs、cDC1s、cDC2s和经典单核细胞的减少与AMG 329预期的药理学一致，许多这些亚群在恢复阶段观察到持久的反应；给药后224天恢复到对照值表明其可逆性。

对KLH的T细胞依赖性抗体反应（TDAR）

在用KLH处理的恒河猴中，未观察到与AMG 329相关的抗KLH IgM或IgG滴度差异；与载体对照组相比，各剂量组的KLH反应强度和持续时间相似。

尽管pDCs、cDCs和经典单核细胞大幅减少，但食蟹猴对KLH的TDAR反应表明免疫功能完好无损。总的来说，这些发现支持将AMG 329推进临床开发，用于治疗炎症或自身免疫性疾病。

总结

FTL3主要表达在DC细胞中，通过药物或基因抑制FLT3/FLT3L信号传导可以减少DC（树突状细胞）数量，通过对AMG 329的体外表征，药理动力学，药代动力学分析发现该抗体不会诱导ADCC，Fc相关的脱靶效应的可能性较低。给药后pDC、cDC1、cDC2和经典单核细胞的比例在减少。AMG 329作为多种自身免疫或炎症性疾病的潜在治疗候选药物，目前AMG 329正在第2阶段临床试验中进行研究（NCT06312020）。