AACR 2025，TCR相关细胞治疗摘要汇集

AACR 2025，TCR相关细胞治疗摘要汇集

#3188

使用便捷的Beacon Discovery光流系统对人T细胞进行功能分析--Bruker Cellular Analysis

过继性细胞疗法（ACT），例如CAR-T疗法和TCR-T疗法，涉及活体T细胞的提取、体外研究、基因工程改造及再植入。这些疗法在对抗癌症的持续斗争中已被证明具有不可估量的价值，目前有超过1500项活跃的临床试验正在进行。尽管前景广阔，基于细胞的疗法在发现、验证和转化过程中面临独特的挑战，相比小分子或其他疗法需要更深入的特性分析。研究人员在每个阶段的成功依赖于能够测量成千上万个单细胞活力、变异性、持久性和功能性的可用工具。为此，已在全新的Beacon Discovery系统上实施了Bruker的Opto® T细胞特征分析流程，并对单个人MART-1 T细胞与T细胞激活微珠（TABs）及APCs相互作用后产生的细胞毒性、细胞因子分泌及表面标志物表达进行了仪器内研究。

Beacon™ 光流体单细胞分析系统通过光电子定位（OEP）技术将活细胞分类至纳米笔中，提供活细胞的多维度特征分析与回收。该平台应用于免疫细胞特征分析（如T细胞特征分析）、抗体发现和细胞系开发，被顶级制药公司采用，并得到30多项已发表研究的支持。这些功能同样在更易获取的Beacon Discovery系统中得以实现。Beacon Discovery集成了流体处理、单细胞分类、培养和细胞孵育、荧光显微镜以及免疫分析功能，全部整合在一个台式自动化、用户友好的平台上。在Beacon Discovery上的平行实验中，单个人T细胞与TABs或APCs配对，在2天内进行培养和检测。当与APCs配对时，通过持续灌注caspase-3底物并进行延时荧光成像，进行目标细胞细胞毒性的测量，从而区分快速杀伤和缓慢杀伤的T细胞。还通过在每个纳米笔中共加载3个可定制的细胞因子捕获珠来评估激活后的细胞因子分泌情况。比较与TABs或APCs配对的T细胞，观察到TNF-α、IL-2和IFN-γ表达水平的不同。还利用Beacon Discovery在与TABs或APCs共培养期间检测T细胞表面标志物（CD4/CD8）的存在。这些功能性测量结合细胞回收用于测序，非常适合加速ACT的开发。总之，Beacon Discovery光流体系统是一种易于使用、界面直观的仪器，配备了强大的数据分析和可视化软件，使各种规模的实验室都能革新其单细胞功能分析。

#3192

GT316：通过全基因组CRISPR筛选发现的下一代TIL疗法，在晚期实体瘤中显示出有希望的疗效--沙砾生物

使用TILs的过继细胞疗法在晚期黑色素瘤患者中显示出治疗效果。然而，将其适用性扩展到其他实体肿瘤并改善临床结果仍然是重大挑战。为解决这些局限性，开发了ImmuTFinder，这是一种全基因组CRISPR/Cas9筛选平台，旨在识别增强TIL功能并拓宽其治疗潜力的关键免疫调节靶点。对超过120个顶级候选靶点在TCR-T细胞中进行了高通量96孔阵列的功能验证。有希望的靶点进一步通过体外实验和体内模型测试其在TIL中的组合效应。GT304和GT312的双重敲除，称为GT316，成为最有效的组合，显著提高TIL增殖、细胞因子产生、CDX和PDX小鼠模型中的肿瘤清除能力，并减少对IL-2的依赖，同时增强长期存续能力。针对这些靶点选择了特异性和高效率的sgRNAs，并开发了一种可扩展的GT316 TIL生产流程，命名为KOReTIL。GT316的人体首次试验显示，在晚期实体瘤患者中具有良好的耐受性和令人鼓舞的初步抗肿瘤活性。值得注意的是，一名治疗抵抗型宫颈癌患者在输注后4周达到确认的CR，并且截至目前反应已持续50周（RECIST 1.1）。另一名接受过九线系统治疗的卵巢癌患者在输注后6周达到确认的PR，反应持续超过50周（RECIST 1.1）。正在收集更多患者的反应数据。总之，这些发现突显了ImmuTFinder平台在发现新型免疫调节靶点方面的实用性，并展示了GT316作为下一代TIL疗法在晚期实体瘤治疗中的潜力。

#3198

包含高亲和力TCR、激活型CD8共受体和基于Fas的开关受体的超级增强型PRAME TCR-T细胞疗法TK-6302，可驱动持续的抗肿瘤反应--T-knife Therapeutics

背景：针对PRAME的TCR-T细胞疗法在黑色素瘤和肉瘤中可介导持久的反应，但在其他实体瘤中的疗效有限。T细胞植入不足和适应性差以及TME的免疫抑制是疗效有限的主要原因。开发了TK-6302，这是一种具有同类最佳潜力的针对PRAME的TCR-T细胞疗法，采用非病毒基因编辑工艺生产，并整合了高亲和力TCR、一种嵌合CD8共受体，该共受体在TCR结合时激活CD4 T细胞并提供共刺激信号（共刺激CD8共受体），以及一种Fas开关受体（SwR），它能增强外周适应性并防止肿瘤中的细胞凋亡。

方法：利用T-knife的MyTTM平台识别出高亲和力的PRAME TCR。通过TempusTM数据库对4622个III/IV期肿瘤进行转录组分析，发现FasL在PRAME高表达的癌症类型中一致表达。采用非病毒基因编辑技术将所有元件插入TRAC位点，生成超级增强型PRAME TCR-T细胞，并通过流式细胞术基于dexamer结合能力、记忆表型和活化/耗竭表型与基准产品进行比较；利用LEGENDplexTM检测细胞因子分泌情况；并通过Incucyte评估在慢性或重复抗原刺激下的细胞毒性作用。

结果：超级增强型PRAME TCR-T细胞整合了三个功能性元件：①EC50为4.73x10^-10 M的高亲和力TCR，②共刺激CD8共受体，一种带有TRAF结合共刺激基序的单链CD8共受体，以及③基于PRAME表达指示的抑制性配体筛选并设计的Fas-CD40/OX40（Fas-TNFR）开关受体，相比常用的Fas-4-1BB开关受体，该受体对FasL诱导的凋亡具有更高的抵抗力。超级增强型PRAME TCR-T在体外展示了比已知PRAME TCR-T方法（包括临床候选物）更高的抗肿瘤活性，针对低PRAME表达的癌细胞，至少多出两轮连续杀伤能力，并释放更高水平的促炎性细胞因子。在连续杀伤过程中，超级增强型PRAME TCR-T保持早期记忆表型，优于基准方法。当在类似于PRAME表达指示的肿瘤微环境的多细胞模型中测试PRAME TCR-T产品时，超级增强型PRAME TCR-T细胞受到保护，免受抑制信号的影响，表现为细胞数量增加、更高的细胞毒性和细胞因子产生，而基准PRAME TCR-T细胞未能控制癌细胞的长期生长。

结论：超级增强型PRAME TCR-T疗法与目前临床阶段的PRAME TCR-T方法相比，展示了同类最佳的临床前抗肿瘤功效和T细胞适应性，为难治性适应症提供了深度且持久的应答潜力。

#3434

评估由HLA-A*02:01呈递的KRAS G12V突变肽的TCR基因编辑T细胞--Affini-T Therapeutics

ACT在实体瘤治疗中的成功有限。TIL和TCR-T疗法的获批标志着自体T细胞策略的潜力。然而，现有的治疗方法面临诸多挑战，例如对免疫原性肿瘤已存在的T细胞反应（TILs），或依赖于非肿瘤特异性靶点（TCR-T）。利用针对公共致癌驱动突变的TCR的工程化T细胞疗法有望克服这些障碍，并实现强大且持久的应答。KRAS中的单氨基酸改变是实体瘤中最常见的致癌驱动突变，其中G12V突变出现在PDAC、CRC和NSCLC等具有高度未满足医疗需求的适应症中。HLA-A*02:01是在北美和西欧人群中最常见的I类HLA等位基因，因此，针对由HLA-A*02:01呈递的突变KRAS G12V肽段进行靶向治疗，为大量患者群体提供了治疗机会。然而，目前设计用于激发对HLA-A*02:01呈递的KRAS G12V肽段免疫原性反应的治疗手段仍具挑战性，并且关于HLA-A*02:01呈递G12V肽段的物理证据也十分有限。在此研究中，采用了一种非病毒敲入系统，通过将包含以下成分的转基因盒递送至人原代T细胞的TRAC位点：①转基因TCR，②嵌合细胞因子受体，③CD8αβ共受体。展示了由加载到HLA-A*02:01中的KRAS G12V外源性肽段引发的特异性TCR-T活化。此外，还证明了工程化T细胞对内源性HLA-A*02:01癌症细胞系的功能反应，这些细胞系1）被改造以表达编码KRAS G12V肽段的TMGs，以及2）瞬时转染mRNA以表达全长KRAS G12V蛋白。这些数据证实了内源性HLA-A*02:01对KRAS G12V肽段的加工和呈递，并展示了其免疫原性。这一发现进一步得到了X-Scan分析评估的支持，即工程化T细胞能够识别内源性携带KRAS G12V突变的HLA-A*02:01细胞系，并表现出特异性。研究为HLA-A*02:01背景下KRAS G12V突变肽段的加工和呈递提供了证据，并证明了在具有高未满足医疗需求的适应症中广泛靶向这一公共肿瘤特异性新抗原的可行性。

#3478

AZD0240的临床前特征，一种经过CRISPR基因编辑的自体TCR-T细胞产品，针对KRAS-G12D/HLA-A*11:01，具有多臂增强设计以提高表位敏感性--Neogene Therapeutics / 阿斯利康

KRAS是人类癌症中最常发生突变的基因之一，其中G12D突变的发生频率最高，分别在33%和28%的CRC和PDAC中出现。含有KRAS G12D的肽段由常见的HLA等位基因HLA-A*11:01提呈，这使得该癌症新抗原成为开发过继TCR-T细胞治疗的极具吸引力的目标。然而，癌症新抗原的提呈水平通常较低，并且结合免疫抑制性的肿瘤微环境，这会削弱TCR工程化T细胞的活化和反应性，成为这些细胞清除肿瘤病灶的主要障碍。为了建立一种临床用于治疗实体瘤（包括CRC和PDAC）的TCR-T细胞疗法，开发了AZD0240，这是一种针对KRAS-G12D/HLA-A*11:01的CRISPR工程自体TCR-T细胞产品。为提高AZD0240对KRAS-G12D新抗原的反应性，开发了一种新型的多臂增强策略，包括同时破坏T细胞功能的关键负调控因子并引入TCR信号传导的正向增强机制。采用这种多臂增强策略后，观察到在外源性加载低浓度KRAS-G12D肽段以及表达KRAS-G12D突变的HLA-A*11:01+肿瘤细胞刺激下，细胞能够产生增强的细胞因子。此外，对体外和体内增殖及细胞毒能力的评估显示，AZD0240的多臂增强策略可以显著提升TCR编辑T细胞的增殖能力和抗肿瘤功效。值得注意的是，经过多臂增强的AZD0240T细胞无法响应KRAS G12野生型表位，并且未检测到TCR交叉反应性或异体反应性增加，也未发现恶性转化迹象，从而降低了这种增强策略临床应用的风险。综上所述，AZD0240是一种针对KRAS-G12D/HLA-A*11:01的TCR-T细胞疗法，采用了一种新型的多臂增强策略，目前正准备进入临床试验阶段，显示出令人鼓舞的临床前有效性和安全性迹象。

#3482

使用装甲有HPV E7特异性TCR的γδ1 T细胞增强对HPV阳性癌症的靶向：一种克服HLA下调的新方法--Baylor College of Medicine

TCR工程T细胞已成为一种有前景的癌症治疗方法。尽管针对HPV E7蛋白的αβ T细胞临床试验显示出潜力，但也突显了一个令人担忧的问题：由于肽-HLA提呈缺陷导致的肿瘤逃逸。作为一种替代细胞平台，γδ1 T细胞（DOT）相比α/β T细胞具有多项优势。这些优势包括其组织归巢能力、可作为无移植物抗宿主病风险的异体细胞，以及通过TCR和NK样受体双重靶向细胞的能力（能够杀伤HLA I类缺失的细胞）。本研究的总体目标是建立DOT作为TCR-T疗法的有效平台，用于靶向实体瘤，并展示通过克服抗原加工机制（APM）突变引起的肿瘤逃逸而增强的治疗效果。开发了一种新方法，使用δ1 TCR特异性抗体和EasySep阳性选择从外周血中分离和扩增DOT。在第4天时，DOT的富集率达到37.3%，到培养结束时增加到91.85%。从转导日开始，细胞在第15天时扩增超过100倍，展示了其用于治疗的可扩展性。高效地将一种专门设计以减少错配（使用小鼠恒定α和β链）的E7特异性TCR转导到DOT中，其转导水平与α/β T细胞相当。DOT表达高水平的NK样受体，包括NKG2D（94.85%）、DNAM-1（99.1%）和NKp30（76%），这对靶向HLA阴性肿瘤至关重要。使用表达不同NKG2D配体的HPV+E7+ SCC90和CaSki细胞系，并通过CRISPR/Cas9介导的B2M敲除生成HLA I类缺失变异体。通过体外Cr释放（短期）和IncuCyte（长期）实验评估细胞毒性，结果表明DOT在杀伤HLA异质性肿瘤方面始终优于α/β T细胞。DOT TCR-T细胞对HLA-A*02:01+E7+目标表现出与α/β TCR-T细胞相当的细胞毒性，而在对抗HLA阴性变异体时表现更佳。这些发现确立了DOT作为TCR工程疗法的强大平台，能够在多样化的HLA环境中克服肿瘤免疫逃逸。目前正在使用小鼠模型进行体内验证。总之，DOT为TCR工程疗法提供了一个有前景的平台，通过其双重识别机制在靶向HLA异质性肿瘤群体方面表现出色。这项工作强调了其在开发现成TCR-T疗法方面的潜力，可用于克服实体瘤中的HLA下调和肿瘤异质性。

#3483

MyTTM平台识别出的用于T细胞治疗的PRAME TCR，在疗效上优于临床基准，并展现出同类最佳的潜力--T-Knife GmbH

前言：PRAME是一种经过临床验证的TCR-T治疗靶点，在多种实体瘤适应症中具有高发性。T-knife的MyTTM平台生成了同类最佳、高亲和力和高特异性的针对PRAME的TCR，用于下一代TCR-T治疗。

方法：使用基于转基因小鼠的MyT平台识别了针对PRAME的TCR，该平台表达人类TCR库并能够克服中枢耐受。通过指示细胞系的快速通量筛选确定反应性TCR候选物。随后，将选定的TCR候选物与CD8αβ共受体一起通过逆转录病毒表达在原代T细胞中，并对其肽剂量反应、细胞因子释放和细胞毒性进行表征。通过单HLA转染细胞的快速异源反应性筛选以及深度突变交叉反应性扫描（X扫描）对TCR进行深入的安全性分析。最后，通过CRISPR-Cas9基因编辑结合内源性TCR的敲除，共同表达一个具有内置共刺激功能的激活型CD8共受体和一个FAS-CD40/OX40开关受体，从而增强TCR修饰的T细胞功能。

结果：PRAME具有高度免疫原性，免疫后小鼠的应答率为100%。鉴定出85种针对优势HLA-A*02:01 PRAME表位SLLQHLIGL的反应性TCR。肽剂量反应实验以及与多种表达PRAME的癌症细胞系共培养实验表明，表达MyT TCR的T细胞具有高亲和力、高细胞因子分泌和高细胞毒性。选择了三个先导TCR候选物，这些候选物对覆盖98% I类HLA等位基因的149种测试HLA亚型均无异源反应性。此外，在X扫描中对超过300种通过计算机预测或实验确定的潜在脱靶肽进行测试，结果显示MyT TCR无脱靶识别。重要的是，基准测试表明，所选的先导TCR候选物在体外显示出比已公开的临床阶段TCR更高的疗效，尤其是在低效靶比（E:T）下更为明显，并且在多轮肿瘤细胞再刺激过程中得以保持。最后，作为开发增强型PRAME TCR-T产品的一部分，通过双重T细胞强化以及结合基因编辑和内源性TCR敲除的方法进一步增强了TCR的表达和功能，同时未影响安全性。

结论：数据表明，MyT平台能够提供同类最佳、高亲和力/高特异性的PRAME TCR。在非病毒工艺中，使用包含这些MyT TCR、单链共刺激CD8共受体和开关受体的增强型PRAME-TCR-T细胞进行治疗，有望在难治性实体瘤中诱导深度且持久的反应。

#3494

在反复暴露于CDR404的情况下，T细胞表现出持久且强劲的体外活性，这是一种潜在的同类最佳的靶向MAGE-A4的T细胞激活剂--CDR-Life Inc.

针对MAGE-A4的T细胞激活剂（TCEs）已进入针对表达MAGE-A4的实体瘤且HLA-A*02:01阳性的患者的首次人体试验。CDR404是一种双特异性抗体形式的TCE，能够二价结合至HLA-A*02:01上的MAGE-A4 230-239肽段，并单价结合至CD3。目前正在进行一项剂量探索的1期临床试验，评估CDR404在包括NSCLC在内的多种实体瘤中的安全性、耐受性及初步治疗效果（NCT06402201）。当前唯一另一项处于临床试验阶段的靶向MAGE-A4的TCE是一种带有Fc区域的低亲和力T细胞招募型TCR基础TCE（TCR-TCE-Fc）。因此，这两种TCE分子在结构、功能及药理学方面存在根本差异。本项临床前研究提供了关于CDR404在多次给药后维持杀伤癌细胞持久性的新机制见解，并将其与TCR-TCE-Fc分子进行了比较。由于PD-1的上调是T细胞活化过程中不可避免的免疫抑制刹车，进一步研究了CDR404联合Pembrolizumab与单独使用CDR404在体外杀伤活性上的差异。在MAGE-A4+/HLA-A*02:01+ NSCLC细胞（NCI-H1755）与人PBMCs的共培养实验中，CDR404引发了更高水平的T细胞活化，表现为活化标志物（CD69、CD25）和增殖标志物（Ki67）的显著提升，并表现出比TCR-TCE-Fc更强的肿瘤细胞杀伤能力。CDR404在来自不同癌症类型的多种MAGE-A4+细胞系上也显示出更高的效力。此外，在低效应细胞与靶细胞比例（E:T，低至1:1）条件下，CDR404显示出比TCR-TCE-Fc更高效的癌细胞杀伤能力，表明其可能在T细胞浸润较低的"冷肿瘤"中实现更高的疗效。值得注意的是，在多轮连续杀伤NSCLC细胞（NCI-H1755）的过程中，CDR404的效力得以高效维持，而TCR-TCE-Fc则未能做到这一点。在该实验中，CDR404引发的T细胞耗竭标志物上调显著低于TCR-TCE-Fc。这些结果突显了CDR404在实体瘤中实现更持久反应的潜力。鉴于T细胞激活剂治疗伴随PD-1/PD-L1通路的上调，评估了CDR404联合抗PD-1治疗药物Pembrolizumab的效果，结果显示在PD-L1过表达的NSCLC细胞系中，相较于单独使用CDR404，联合治疗增强了对耗竭T细胞的体外效力。总之，这些结果表明CDR404具有为HLA-A*02:01+且MAGE-A4+肿瘤患者提供更高疗效和更持久反应的潜力。与抗PD-1治疗的联合应用可能在患者中产生协同抗肿瘤活性，并有望使包含抗PD-1/PD-L1的早期治疗方案适用于包括NSCLC在内的多种实体瘤，从而惠及更多患者群体。

#3768

开发新型MHC-II限制性TCR-STEM CD4+ T细胞免疫疗法用于实体瘤--南加州大学

尽管ICI在治疗实体瘤方面取得了最近的进展，但大多数患者对ICI疗法没有反应，最终复发并死亡，且没有进一步的治疗选择。因此，迫切需要开发新型免疫疗法。虽然大多数研究集中于MHC-I限制性TCR改造的CD8+ T细胞免疫疗法，但最近开发了一种新型MHC-II限制性TCR改造的CD4+ T细胞免疫疗法。由于CT83（KK-LC-1），一种癌症-睾丸抗原，在40-60%的肺癌和乳腺癌中高度表达，但在正常组织中除睾丸外不表达，通过单细胞测序鉴定出一种新型HLA-DR13限制性CT83特异性TCR用于肿瘤识别。为了提高CD4+ TCR-T细胞的治疗潜力，进一步利用几种新技术对TCR进行了工程改造，包括记忆T细胞合成TCR信号增强（STEM），从而显著提高了T细胞的持久性。证明了CD4+ TCR-STEM T细胞能够特异性识别并杀死乳腺癌和肺癌细胞，而对一系列HLA-DR13+ CT83-肿瘤细胞无T细胞反应性。令人惊讶的是，发现CD4+ TCR-STEM T细胞能够在动物模型中清除乳腺癌和肺癌细胞。相比之下，TCR改造的CD8+ T细胞只能在动物模型中清除肺癌细胞，而不能清除乳腺癌细胞。值得注意的是，通过流式细胞术和免疫组化检测到肿瘤中有显著高比例（30-40%）的CD4+ TCR-STEM T细胞浸润。成像质谱流式细胞术进一步揭示了肿瘤部位存在大量Th1细胞和M1巨噬细胞，表明CD4+ TCR-STEM T细胞通过直接杀伤肿瘤和间接通过招募其他免疫细胞发挥双重作用机制。确实，证明了CD4+ TCR-STEM T细胞能够在抗原阳性和阴性肿瘤细胞混合物中杀伤抗原阴性肿瘤细胞。总之，已经开发出一种新型MHC-II限制性CT83特异性CD4+ TCR-STEM T细胞免疫疗法，显示出对实体瘤的强大和治疗性抗肿瘤免疫作用。鉴于不同种族群体中HLA-DR13表达的高频率（20-30%），特别是在非裔美国人（29.7%）中，CD4+ TCR-STEM T细胞代表了一种全新的方法，用于开发针对实体瘤的治疗性T细胞免疫疗法药物，并解决癌症差异问题。

#4868

通过添加同类最佳的单链CD8核心受体来优化实体瘤中TCR-T细胞的活化，可导致CD4结合以及T细胞功能状态和持续性的改善--T-knife Therapeutics

背景：通过在TCR-T细胞治疗结构中加入CD8α或野生型CD8αβ共受体（CoR），实体瘤的临床应答率得到了提高和/或扩展，从而实现CD4 T细胞的结合。设计了一种小型、嵌合的单链CD8共受体，保留了CD8αβ共受体的所有功能元件，并将其作为支架添加了胞内共刺激信号基序（共刺激CD8 CoR）。通过在TCR结合的同时提供激活信号，共刺激CD8 CoR可以防止因肿瘤中缺乏共刺激分子表达而导致的TCR-T细胞耗竭。表达共刺激CD8 CoR的TCR-T细胞完全结合了CD4 T细胞，并介导了更强且持久的TCR-T抗肿瘤反应，优于常用的野生型CD8共受体。

方法：ActiviT平台由不同的单链CD8共受体组成，这些共受体通过组合CD8αβ和CD4共受体的构建模块设计而成。使用Rosetta软件套件进行的计算机3D建模用于模拟TCR-CD8共受体与HLA-I-肽复合物之间的相互作用。测试了针对HLA-A*02:01限制的PRAME或MAGE-A1的TCR-T细胞（无论是否具有不同的CD8共受体）在细胞因子产生（LEGENDplex）以及长期和连续细胞毒性的表现（Incucyte）。流式细胞术用于分析表型、活化标志物和耗竭标志物。

结果：通过计算机3D建模进行的结构评估显示，单链CD8共受体支架保留了与野生型CD8共受体相同的HLA-I结合界面。通过添加肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）结合基序生成了共刺激CD8共受体。细胞毒性和细胞因子分泌的评估表明，与野生型CD8共受体相比，共刺激CD8共受体赋予了包含HLA I类限制性TCR的CD4 T细胞更高的功能。为了评估共刺激CD8共受体对TCR T疗法抗肿瘤活性的影响，对共表达不同CD8共受体的CD4/CD8 PRAME TCR-T细胞进行了功能比较，其中包括目前正在临床试验中的版本。表达共刺激CD8共受体的PRAME TCR-T细胞改善了T细胞的适应性，导致耗竭较少、早期记忆表型更强，并在低效应细胞与靶细胞比例的连续杀伤实验中表现出增强的功能。值得注意的是，在重现难治性疾病的三维肿瘤球模型中证明了共刺激CD8共受体的增强活性。

结论：共刺激CD8共受体是一种具有内置共刺激功能的嵌合CD8共受体。将共刺激CD8共受体与PRAME TCR结合，相比常见的PRAME TCR-T方法（包括当前处于临床开发阶段的候选药物）提高了T细胞适应性并增强了功能性活性。在TCR-T构建物中加入共刺激CD8共受体有望进一步加深和扩大对难治性实体瘤的治疗反应。

#4869

靶向ICAM1的嵌合共刺激受体增强抗肿瘤T细胞的功能效力--AffyImmune Therapeutics

背景：过继性T细胞疗法随着创新不断发展，例如靶向肿瘤表面抗原或肿瘤相关抗原的CAR和工程化TCR T细胞疗法。尽管工程化T细胞疗法已显示出显著的抗肿瘤效果，但由于肿瘤抗原逃逸，肿瘤复发仍时有发生。内源性T细胞受体对肿瘤抗原的低亲和力一直是TCR疗法成功的障碍。假设，在免疫抑制的肿瘤微环境中，表达ICAM1特异性嵌合共刺激受体可增强肿瘤特异性T细胞的功能。ICAM1在许多实体瘤细胞膜上过表达，并且可被T细胞因子大幅诱导，这可能有助于提高与靶肿瘤抗原结合的那些TCR的特异性和有效性。

方法：用一个由单链可变片段序列与共刺激分子CD137融合而成的嵌合共刺激受体基因改造了原代T细胞。首先在与A375-MA2黑色素瘤细胞的共培养中测试了该嵌合共刺激受体与CTL16的联合作用，CTL16是一种受HLA-A2限制、针对MAGE-C2的TCR。测量了在抗原密度低或高时的细胞毒性和细胞因子分泌水平。接下来，用嵌合共刺激受体基因修饰了异体和自体T细胞，并在间变性甲状腺癌的异种移植模型中测试了它们的功能效力。最后，进行了TCR测序、信号报告分析和基因表达分析，以深入了解嵌合共刺激受体的活性。

结果：与仅表达CTL16的细胞相比，同时表达ICCR和CTL16的Jurkat T细胞系在TCR激活后显示出更高的NFκB和NFAT活性。ICCR/CTL16原代T细胞诱导的细胞毒性对靶肿瘤细胞具有特异性，即使抗原呈递处于亚阈值水平时，其功能效力也有所增强。ICCR的表达增加了异体TCR的活性，从而改善了对间变性甲状腺癌生长的控制。当自体外周T细胞被基因改造以表达ICCR时，PD1+ T细胞在控制间变性甲状腺癌患者来源肿瘤的生长方面表现出更优的反应。ICCR的表达促进了选择性克隆扩增，使得能够分离出肿瘤特异性TCRs。

结论：ICCR提高了亚阈值水平激活的TCR的功能效力，促进多克隆肿瘤特异性T细胞的强烈活化，这些T细胞可能在免疫抑制的肿瘤微环境中受到限制。

#5446

开发一种新的基于TCR的双特异性癌症治疗平台--上海岸迈生物

TCR-T疗法作为一种新一代的治疗方法，以高度特异性靶向实体瘤，但并非"现成可用"。基于TCR的T细胞衔接子遵循相同的概念，然而生成包含TCR的此类分子仍然具有挑战性，通常需要大量的工程设计和优化以实现良好的溶解性和功能。为了解决这一问题，开发了一种"即插即用"技术，即串联TCR-Fab融合蛋白（T-FIT），用于生成现成可用的基于TCR的治疗药物。通过比较不同格式、不同间隔序列、结合价态以及TCR-Fab几何结构下的重组生产产量和纯度，对T-FIT的设计进行了优化。所选的T-FIT格式在不同TCR和Fab的情况下表现出类似IgG的生产特性。基于T-FIT格式和专有的CD3抗体，生成了三种基于TCR的T细胞衔接子，分别靶向NY-ESO-1、MAGE-A3和Survivin，并在临床前功能试验中验证了T-FIT平台。所有三种T-FIT分子在体外均显示出对靶标阳性细胞的强大重定向T细胞裂解活性。靶向MAGE-A3和Survivin的T-FIT分子在异种移植模型中还表现出完全的肿瘤抑制效果。

#6034

开发一种针对AFP的泛HLA-A02限制性TCR，用于TCR-T和TCR双特异性治疗--恒瑞源正

背景：AFP是一种已确立的肿瘤相关抗原，尤其在HCC中。尽管针对AFP的TCR-T细胞疗法在HCC中显示出令人鼓舞的临床疗效，但HLA限制性缩小了适用的患者群体。之前鉴定出一种针对HLA-A*02:03限制性AFP 158-166抗原表位的TCR序列。为了扩大其治疗潜力，对该TCR的CDR区域序列进行了突变，以使其能够识别多种主要的HLA-A*02亚型。

方法：开发了一种基于人T细胞的功能展示平台，以优化原始的AFP特异性TCR序列。该平台有助于鉴定出能够识别更多HLA-A*02亚型的TCR变体。优化后的TCR被导入TCR-T细胞中，并在体外和体内模型中测试其识别和杀伤肿瘤细胞的能力。同时进行了全面的安全性评估以检测脱靶效应。此外，该平台还能将TCR的亲和力提升至pM水平，从而开发出一种TCR双特异性蛋白。

结果：原始TCR仅能识别并杀伤由HLA-A*02:03呈递的AFP 158-166抗原。相比之下，优化后的TCR转导的T细胞表现出对泛HLA-A*02分子（包括A*02:01、A*02:03、A*02:06和A*02:07）呈递的相同表位的识别能力，显著拓宽了其适用范围。泛HLA-A*02限制性的TCR转导T细胞展现出更强的抗肿瘤活性，体外实验显示其产生更强的细胞因子并具有更高的肿瘤细胞杀伤能力，而在小鼠体内模型中则表现出完全清除肿瘤的能力。毒理学研究未发现对非特异性HLA或其他抗原的脱靶识别，表明其安全性良好。此外，高亲和力TCR（-11M）与抗CD3单链抗体片段连接形成TCR双特异性蛋白，在临床前模型中显示出显著的抗肿瘤效果。

结论：为此，序列优化的AFP特异性TCR-T细胞展现了强大的治疗效果和良好的安全性，为超过60%的泛HLA-A*02患者拓展了潜在治疗选择。此外，TCR双特异性抗体的成功开发凸显了其作为创新现成疗法的前景，提供了更好的临床可及性和灵活性，以满足更广泛患者群体的需求。

#6109

通过结合FAP-CAR和PRAME TCR对癌细胞和基质细胞进行双重靶向，可增强T细胞的浸润，并有效清除广泛范围内的难治实体瘤--T-knife Therapeutics

背景：免疫抑制性的TME是提高TCR-T细胞疗法在实体瘤中临床疗效的重大障碍。TME主要由支持肿瘤生长的基质细胞组成，例如癌症相关成纤维细胞（CAF），它们通过形成物理屏障阻止T细胞浸润并发挥免疫抑制作用，从而阻碍免疫反应。CAF常见的细胞表面抗原是在健康组织中表达有限的成纤维细胞活化蛋白（FAP）。使用非病毒基因编辑生成了同时表达抗FAP CAR和PRAME特异性TCR及CD8共受体的双重靶向T细胞。该构建体能够耗尽CAF，破坏肿瘤的支持性基质和免疫屏障，从而增强TCR-T细胞的浸润和肿瘤清除。

方法：针对FAP的10个单链抗体片段被设计为第二代4-1BB CAR，并通过逆转录病毒转导入PMBCs中。利用流式细胞术根据CAR表达情况筛选FAP-CAR T细胞，并检测其对FAP阳性靶细胞的细胞毒性。将选定的FAP-CAR与HLA-A*02限制性的PRAME特异性TCR及CD8共受体结合，通过非病毒基因编辑技术导入T细胞。在表达生理水平FAP和PRAME的二维和三维体外癌症模型中，通过重复抗原刺激测试其功能。

结果：基于T细胞表面表达和对FAP过表达的BT-549癌细胞的功能活性，筛选了携带不同单链抗体片段的10种抗FAP CAR。开发了一种体外多细胞模型，由表达生理水平PRAME并标记GFP的癌细胞以及表达生理水平FAP并永生化的RFP阳性成纤维细胞组成。生成并测试了共表达PRAME TCR、CD8共受体和4种选定FAP-CAR的T细胞在重复刺激下的细胞毒性。两种候选细胞实现了多轮杀伤。随后，开发了一种NSCLC的多组分3D球体模型，结合癌细胞、单核细胞、CAF和细胞外基质，模拟TME的双重作用，形成对T细胞浸润的物理屏障并介导免疫抑制。含有抗FAP-CAR的构建体与无CAR增强的TCR-T细胞相比，表现出更优的浸润能力、细胞毒性和细胞因子分泌特性。

结论：同时整合FAP-CAR和PRAME TCR的双靶向T细胞在自主研发的、模拟严苛NSCLC肿瘤微环境的多组分3D球体模型中，成功实现了对癌细胞和基质细胞的浸润与有效清除。这种方法有望解决实体瘤治疗中的一个主要难题，即增强T细胞浸润并激发强大且持久的抗肿瘤反应。