实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的建立与评估

EAE模型

一、实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）概述

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是一种以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的自身免疫性疾病，其病理变化与多发性硬化（MS）类似。EAE模型是研究MS病理过程和发病机制的重要工具，在临床神经免疫学研究中具有重要意义。

二、动物选择

多种动物可用于EAE模型的建立，包括鸡、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬和猴等。不同种属或品系的动物对EAE的敏感性存在显著差异。常用的敏感动物包括Lewis和DA大鼠、PL/J和SJL/J小鼠以及Hartley和Strain13豚鼠等。小鼠和大鼠的EAE模型在临床表现、病理和免疫等方面与人类脱髓鞘疾病较为相似，因此应用最为广泛。

三、建模方法

（一）主动诱导法

主动诱导法是通过将抗原与佐剂混合后注射到动物体内，经过一定时间的潜伏期诱导EAE的产生。常用的致敏抗原有髓鞘碱性蛋白（MBP）、蛋白脂（PLP）、髓寡树突细胞糖蛋白（MOG）等。

• 抗原与佐剂的混合：抗原需与佐剂（如完全弗氏佐剂，CFA）混合制成乳剂。CFA能提高抗原的免疫反应强度并延长免疫时间，而百日咳毒素（PTX）可增加血管通透性，促进T细胞通过血脑屏障。

• 注射途径：常用的注射途径包括皮下、腹腔和尾静脉等，其中皮下多点注射和脚垫注射的发病率较高。

（二）被动转移实验

被动转移实验通过将EAE抗原特异反应性T细胞转输给同一品系的健康动物，使其发病。这是研究EAE发病机制的直接证据，也是研究治疗和预防措施的良好模型。

四、模型判定标准

（一）神经功能评分

根据Kono等提出的标准，神经功能评分分为5级：1级为尾部无力，2级为尾部无力加肢体无力，3级为肢体轻度麻痹，4级为肢体严重麻痹，5级为濒死状态。

（二）病理检测结果

通过HE染色等方法检查中枢神经系统的炎症和脱髓鞘情况。EAE模型组小鼠脊髓中可见大量炎性细胞聚集，髓鞘结构松散、崩解，密度降低。

（三）免疫荧光双染结果

EAE模型组小鼠脊髓中活化的小胶质细胞数量增多，而活化星形胶质细胞数量减少。

（四）细胞流式分析

EAE模型小鼠中致炎细胞Th17数量显著增加，抑炎细胞Treg和Breg数量显著降低。

五、以小鼠为例的MOG诱导EAE模型建立

前期准备

• 完全弗氏佐剂（CFA）的配制：将结核分枝杆菌加入弗氏不完全佐剂（IFA）中，充分混匀后置于4℃冰箱备用。

• 百日咳毒素储存液（PTX）的配制：将百日咳毒素溶解于PBS中，储存于4℃冰箱。

• 抗原佐剂乳化物的制备：将MOG 35-55多肽与CFA混合乳化，形成油包水混合物。

模型制备

• 动物选择：选择6-8周龄、18-25克的雌性C57BL/6小鼠，确保品系纯正和SPF级饲养环境。

• 注射与处理：

• 麻醉小鼠，对注射部位进行消毒。

• 每侧皮下注射抗原佐剂乳化物100μl，随后腹腔注射PTX。

• 48小时后再次腹腔注射PTX，第七天加强免疫。

• 观察与记录：观察小鼠体重和临床神经功能分级，直至MOG免疫后30天。

六、结语

EAE模型是研究MS病理机制和治疗方法的重要工具。通过优化建模方法和评估标准，EAE模型为揭示MS的发病机制和开发新的治疗策略提供了有力支持。

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