2024 SITC，TCR-T细胞疗法最新内容精选(中)

癌症免疫治疗学会（SITC）第39届年会于2024年11月6日-10日在美国休斯顿召开。SITC年会是世界上最大的专注于癌症免疫治疗的国际盛会，SITC的愿景是通过促进科学交流与合作教育计划，旨在让癌症患者被"治愈"在某一天能够成为现实。这里TCRshows整理了在2024 SITC中关于TCR-T细胞疗法的一些更新，分为【上中下】三篇，欢迎在评论区继续补充！

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UniTope和TraCR：一种用于TCR-T细胞的直接整合到重组TCR中的通用标记和追踪系统

德国Medigene AG【同2024 ESMO，1044P】

背景：通常用于鉴定TCR-T细胞群中重组TCR（rTCR）表达的三种方法存在若干缺点：①基因标记序列可能无法与rTCR 100%共表达；② 针对rTCR Vβ链的特异性抗体也会检测到内源性TCR；③ rTCR与p-HLA多聚体的结合可能较低、非特异或试剂昂贵。为克服这些缺陷，开发了UniTope标签，该标签无缝整合到rTCRs中，并且可以通过特异性TraCR抗体精确识别，该抗体仅与UniTope标记的rTCRs结合。

方法：UniTope是一种新型合成表位，设计为与人类蛋白质序列密切相关但不完全相同，以减少免疫原性。通过生物信息学和三维建模，确定了在rTCR中插入UniTope的位置。标记的rTCR表达、功能性和特异性方面与未标记的rTCR进行了评估。还评估了TraCR抗体与UniTope序列长度变体的结合情况。

结果：识别出一种独特的合成UniTope序列及其在rTCR中的最佳插入位点，使得TraCR抗体能够高度特异性地结合。UniTope与TraCR的组合明确地区分了rTCR与PBL中所有内源性TCR。UniTope的整合不影响Vβ链特异性抗体或p-HLA多聚体的结合。这种TraCR抗体的专一结合使得从混合细胞群中富集rTCR-T细胞变得容易。标记UniTope不会影响任何评估的rTCR的功能性、已建立的安全性谱型或表达水平。

结论：UniTope & TraCR是一种适用于rTCRs的通用检测系统，易于适应多参数流式细胞术。UniTope无缝集成到任何rTCR结构中，绕过了共表达单独基因序列以普遍标记TCR-T细胞的需要。UniTope不会显著增加载体大小，也不会影响转导效率。UniTope & TraCR允许使用一个简单的验证系统，用于覆盖所有rTCRs的TCR-T疗法的质量控制试验，提供精确的药物产品剂量信息。它允许轻松可视化、分离和富集TCR-T细胞以进行直接研究。GMP级TraCR可用于药物产品的富集，也可能用于追踪TCR-T细胞在体内的定位和持续存在，支持患者的免疫监测。UniTope & TraCR系统是一种高精度技术，有助于优化TCR-T疗法的开发。

2024年5月28日，Medigene AG 通过向欧洲专利局提交三项专利来扩展其端到端平台。第一项专利申请涵盖了公司创新的IFNγ生物传感器，该技术能够实时监测和量化分泌细胞因子的IFNγ释放。专有技术通过利用简化且高效的细胞术检测方法更好地了解免疫反应动力学。IFNγ生物传感器技术克服了当前可用商业工具的局限性，这些工具通常成本高昂、耗时，并且由于复杂的程序而容易出错，从而降低了可重复性。此外，传统方法通常只允许终点测量，不支持长时间实时监测IFNγ，而使用该IFNγ生物传感器可以实现。第二项和第三项专利是高精度TCR跟踪（UniTope和TraCR)，为其新型TCR特异性抗原-抗体组合技术UniTope和TraCR申请了两项专利。该技术结合了一对工具，旨在唯一标记TCR并准确跟踪其位置。这反过来又允许精确评估TCR指导的细胞疗法的增殖、持久性和定位，无论是在体外还是体内研究，从而为细胞疗法的疗效和机制提供关键见解。

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肿瘤广泛的RNA剪接异常在多种癌症类型中产生免疫原性公共新抗原

加利福尼亚大学旧金山分校

背景：高肿瘤异质性和低突变负荷在癌症中对免疫治疗提出了重大挑战。为了解决这一问题，开发了一种新的计算机方法，用于表征在10种癌症类型中普遍表达的癌症特异性剪接。该方法成功地识别了在多种癌症中引发CD8+ T细胞介导的细胞毒性的全肿瘤、公共、可替代剪接的新抗原（ASNs）。

方法：SSNIP方法在TCGA RNA-seq数据10种癌症类型中识别出反复出现的公共新抗原（阳性样本率(PSR)>10%），但在GTEx正常组织RNA-seq数据中未发现（PSR<1%）。利用多中心RNA-seq数据来表征肿瘤内保守的新抗原。胶质瘤数据集包括56名患者，每名患者大约有10个空间不同的肿瘤内活检位点（n=535）。两种独立算法预测了ASN候选物的肽加工可能性和HLA结合亲和力。对健康供者的CD8+ T细胞进行高可信度ASN候选物的体外致敏（IVS），随后进行10x VDJ单细胞RNA-seq，鉴定出ASN特异性TCR序列。这些TCR被转导到三重报告基因Jurkat76细胞中，并与表达ASN和HLA的COS7细胞及胶质瘤细胞系共培养，以评估TCR功能。TCR转导的供源CD8+ T细胞与表达新抗原的胶质瘤和黑色素瘤细胞系共培养，以评估肿瘤特异性杀伤能力。

结果：该方法鉴定出789个公共新抗原，其中32个新抗原在转录组和蛋白质组数据中同时被识别，并且预测能够由HLA-A*02:01高置信度地呈递。捕获了针对RPL22（n=7）和GNAS（n=1）新抗原反应的TCR克隆型，后者在肿瘤内高度保守（在17/56例患者中>90%的空间定位活检中检测到）。通过IVS可以从胶质瘤患者的PBMC中检测到突变GNAS衍生的ASN特异性CD8+ T细胞克隆。TCR转导的T细胞展示了对内源性处理和呈递的ASNs的识别和肿瘤特异性杀伤作用，这在多种胶质母细胞瘤和黑色素瘤细胞系中得到证实。此外，IDH1突变型少突胶质细胞瘤样本中新抗原的表达显著高于IDH1突变型星形细胞瘤和IDH1野生型。差异基因表达（DESeq2）分析发现，由于少突胶质瘤特有的1p/19q染色体共缺失，剪接因子的表达量降低。在IDH1野生型胶质瘤细胞中敲低这些剪接因子（如SF3A3、SNRPD2）导致相应新抗原的表达显著增加。对剩余癌症类型进行DESeq2分析揭示了肝细胞癌和肺腺癌iCluster亚型中类似的剪接基因集相关的新抗原表达差异。

结论：SSNIP鉴定了新型公共肿瘤广泛剪接衍生新抗原候选物和ASN特异性TCR，为多种癌症类型提供了一种有前景的现成免疫治疗策略。表征瘤内保守的新抗原解决了免疫治疗耐药性中关键的瘤内异质性挑战。

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多抗原靶向与CAR和TCR共表达在异基因细胞治疗实体瘤中的应用

Poseida Therapeutics, Inc.

背景：肿瘤异质性和特异性抗原的稀缺性对CAR-T技术在实体瘤中的疗效构成了重大挑战。一种潜在的解决方案是生成能够通过CARs和αβTCRs或γδTCRs（CAR+TCR）识别多种肿瘤特异性抗原的工程T细胞。与CARs不同，TCRs可以检测来自细胞内蛋白质或应激细胞状态的肿瘤特异性抗原，大大扩展了潜在肿瘤特异性抗原的范围。此外，通过CAR+TCR和T细胞衔接器（TCEs）的组合疗法同时靶向第3个肿瘤抗原，为累加或协同效应提供了潜在机会，并为应对实体瘤靶点异质性提供了一种强有力的机制。

方法：这里开发了一种多顺反子DNA转基因，编码CAR和TCRβ-TCRα或TCRδ-TCRγ基因，所有基因均由T2A连接子分隔，并使用非病毒转座子基因除递送平台稳定整合到健康供体αβT细胞的基因组中。通过Cas-CLOVER™基因编辑技术破坏内源性TCR和b2M生成异基因T细胞。这些异基因CAR+TCR-T细胞在制造过程中通过专有的增强分子进行选择和扩增，该分子增强了基因编辑细胞的增殖和早期记忆表型。

结果：建立了一个异体工程T细胞平台，表达双特异性CAR+αβTCR或CAR+γδTCR。这些工程T细胞主要由TSCM和TCM细胞组成，能够识别并杀伤单抗原和双抗原阳性靶细胞。同时刺激CAR和TCR显示出协同效应，增强了工程T细胞的抗肿瘤效力。CAR+TCR-T细胞表现出增强的多功能细胞因子、较低的活化水平和与CAR-T细胞相当的代谢适应性。值得注意的是，通过精细调节激活诱导的信号，双靶向CAR+TCR-T细胞在体内的细胞毒性得到改善。此外，具有减弱信号基序的替代CAR设计进一步增强了肿瘤负荷免疫缺陷小鼠体内T细胞的功能。重要的是，体内给药TCEs可以重新激活和重定向已植入的CAR+TCR-T细胞，以控制和消除二次肿瘤挑战中双CAR-TCR-抗原阴性的细胞系。

结论：TSCM/TCM富集的异体CAR+TCR-T细胞表现出单一和双重特异性，使其能够靶向异质性肿瘤。共刺激信号和 CAR 相关信号的精细调节对于增强CAR+TCR-T细胞的效力至关重要。异体CAR+TCR T细胞与TCE的给药兼容，后者可以召回并重新激活持久存在的CAR+TCR T细胞，以独立于TCR/CAR抗原的方式识别和控制肿瘤。综上所述，数据支持CAR+TCR平台，包括TCE联合应用，作为针对异质性和快速演化的实体瘤的多功能替代方案。

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膜限制性IL-12-TCR T细胞促进抗原扩散和消除抗原阴性肿瘤变体

NIH；NCI

背景：过继T细胞疗法在B细胞恶性肿瘤中显示出有希望的结果，具有高反应率和频繁的完全缓解，为广泛癌症的应用带来了希望。然而，相当一部分实体瘤患者对这种治疗方式表现出原发性或继发性耐药。靶抗原丢失是已知的一种耐药机制，可能是由于抗原表达不均匀或抗原处理和呈递机制缺陷所致。持续表达的膜锚定IL-12（caIL-12）在多种预临床过继T细胞治疗模型中展示了抗肿瘤活性增强和低系统暴露。在这项研究中，评估了caIL-12在同基因小鼠模型中对靶抗原阴性变体的治疗影响。

方法：通过将表达OVA抗原SIINFEKL并标记泛素的构建体转导到B16F10黑色素瘤细胞（B16）或Lewis肺腺癌细胞（LLC）中，生成了靶抗原阳性肿瘤细胞（B16-U-OVA，LLC-U-OVA），而B16或LLC肿瘤作为抗原阴性变体。C57BL/6J小鼠皮下注射由80% B16-U-OVA和20% B16组成的异质肿瘤。通过在左侧腹股沟注射B16-U-OVA或LLC-U-OVA肿瘤，在右侧腹股沟注射B16或LLC肿瘤，建立了双侧肿瘤。荷瘤小鼠随后接受5.5Gy全身照射，然后进行携带或不携带caIL-12的OT-I TCR-T细胞的过继转移。

结果：TCR-T细胞（OT-I）将caIL-12递送至B16-U-OVA肿瘤部位，并在携带OVA阴性变体的异质肿瘤的小鼠中诱导了强大的肿瘤控制和生存获益。caIL-12主要通过抗原扩散激活内源性抗肿瘤CD8 T细胞，从而对OVA阴性的B16变体发挥作用。此外，由OT-I-caIL-12诱导的抗原扩散还控制了远端植入的OVA阴性肿瘤。这种治疗效果需要抗原特异性TCR-T细胞和caIL-12在肿瘤部位共定位，同时还需要能够识别共享肿瘤抗原的内源性 CD8 T细胞。

结论：表达caIL-12的肿瘤靶向T细胞对靶抗原阴性的肿瘤变体表现出治疗效果。这些发现突显了caIL-12在应对抗原逃逸和肿瘤异质性挑战方面的潜力，这些挑战可能限制T细胞疗法对实体瘤的疗效。

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膜结合型IL-15 "武装" TCR-T细胞表现出增强的持久性和连续杀伤能力

Immatics

背景：有效的靶向和消除肿瘤需要TCR-T产生抗原特异性和持久的抗肿瘤免疫反应。尽管在实体瘤中使用第一代TCR-T方法已经观察到了客观的反应，但目前正在开发下一代方法以进一步增强抗肿瘤活性并提高T细胞对抗耗竭的能力。在这里，展示了目前正在开发的下一代ACTengine® TCR-T候选产品的细胞因子工程方法的临床前数据。评估了通过膜结合IL-15（mbIL15）装甲TCR-T细胞对T细胞持久性和抗肿瘤反应持久性的影响，特别关注其在不耗竭的情况下连续杀伤肿瘤细胞的能力。

方法：使用了几种共表达针对PRAME的TCR和膜结合IL-15的不同跨膜和连接序列的慢病毒构建体，生成TCR.mbIL15 T细胞，并与单独的TCR在可制造性、表型和功能方面进行了比较。通过连续杀伤共培养实验和转录组分析，全面评估了mbIL-15表达对肿瘤反应持久性的影响。

结果：成功制备了表达针对PRAME和mbIL-15的TCR-T产品，双阳性频率最高可达70%。与单独的TCR相比，在没有外源刺激的情况下，TCR.mbIL15 T细胞中基础水平的磷酸化STAT3和磷酸化STAT5表达增加，证实了mbIL-15转基因的功能性。在多次刺激后，TCR.mbIL15 T细胞表现出增强的抗肿瘤活性，包括IFNγ、TNFα和穿孔素的产生增加以及对多种抗原阳性肿瘤细胞系的抗原特异性细胞毒性，与单独的TCR相比有所提高。与13次连续肿瘤细胞刺激共培养长达45天时，观察到持续的肿瘤生长控制，这与TCR.mbIL15 T细胞的持久性增加有关，归因于mbIL-15工程的抗凋亡效应。值得注意的是，即使在没有外源细胞因子或抗原刺激的情况下，TCR.mbIL15 T细胞也能显著存活更长时间，并在随后的共培养中保持抗肿瘤活性。与单独的TCR-T细胞相比，转录组数据进一步支持了TCR.mbIL15 T细胞的持久性增强，展示了与各种生物过程相关的基因差异表达，包括与凋亡途径相关的基因。非常低水平的IL-15释放和TCR.mbIL15 T细胞对多种靶标阴性的原代细胞缺乏反应性表明，mbIL-15的表达不会改变TCR-T细胞的特异性。

结论：通过mbIL-15工程增强的抗肿瘤活性为进一步评估这种下一代技术用于ACTengine TCR-T候选者的反应和对实体瘤的持久响应提供了支持。

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早期分化和记忆转录程序驱动NY-ESO-1特异性TCR-T细胞在过继细胞治疗中的长期持续存在

Princess Margaret Cancer Centre；Takara Bio, Inc.

背景：过继转移TCR-T细胞可以诱导持久的抗肿瘤反应。TBI-1301是一种新型基因疗法，通过使用携带siRNA的逆转录病毒载体沉默内源性TCR，对自体淋巴细胞进行工程改造以表达NY-ESO-1特异性TCR。本研究中，对过继转移后长期存活的TBI-1301 TCR-T细胞进行了单细胞水平的表征。

方法：签署知情同意书、具有HLA-A*02:01或A*02:06单体型以及通过IHC检测到NY-ESO-1表达的患者，PBMCs被采集并处理以生成工程化的TBI-1301 TCR-T细胞。患者在第0天接受5x10^9个细胞的输注，在此之前接受环磷酰胺(CY)单独（第-7和-6天，750mg/m^2）或与氟达拉滨(FLU)（第-7和-6天，30mg/m^2）联合淋巴耗竭。研究终点包括安全性、有效性和TCR-T细胞输注后的持久性生物标志物。通过多参数流式细胞术、单细胞RNA和TCR测序分析评估TBI-1301输注产品和持续存在的TBI-1301 TCR-T细胞。

结果：TBI-1301的临床活性此前已有描述。在仅接受CY治疗的队列中，9名患者中有5名经历1-2级CRS；而在CY/FLU联合治疗队列中，5名患者中有3名经历2级CRS。滑膜肉瘤患者的RECIST缓解率为28.6%，这些患者肿瘤高表达NY-ESO-1。在接受单独CY治疗的患者中，3名患者在超过100天后检测到低水平的持久性（CD8 T细胞的0.03-0.05%）。相比之下，在接受CY/FLU联合治疗的2名患者中观察到更高水平的持久性（CD8 T细胞的5.6-7.7%）。长期存活的TBI-1301细胞表现出幼稚/记忆表型，表达CD45RA和CCR7。单细胞RNA-seq分析使研究人员能够从第0天追踪到第125天输注的TBI-1301T细胞，包括具有相同TCR序列的克隆型细胞。UMAP可视化显示，持续存在的TCR-T细胞与输注细胞不同，外周CD8+和CD4+ TCR-T细胞中TCF7、LEF1和CCR7的表达更高。在第125天的CD8+T细胞中，使用PHATE和Slingshot pseudotime重新构建了内源性和TCR-T细胞的分化轨迹。单细胞基因特征评分显示，TCR-T细胞富含Tstem基因特征，而内源性T细胞则表现出Tpex基因特征。

结论：这些数据表明输注的TBI-1301 T细胞具有持续的持久性。了解持久存在的TCR-T细胞的状态为开发增强新疗法效力的联合方法提供了宝贵的见解。

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TCR-T细胞中引入工程CD8-41BB融合受体共刺激增强在血液和实体恶性肿瘤的临床前模型中的疗效和持久性

Intellia Therapeutics Inc.；米兰圣拉斐尔科学研究所

背景：因其具有广泛的抗原可及性和靶向特定癌症新抗原的能力，采用肿瘤抗原靶向TCRs的过继细胞疗法为治疗血液癌症和实体瘤提供了一种有吸引力的方法。然而，与经过临床验证的第二代CAR-T细胞不同，后者携带内置共刺激信号（如41BB或CD28），TCR-T细胞在大多数肿瘤微环境中几乎不接受共刺激，导致细胞反应相对较弱。此外，即使具有高亲和力的HLA I限制性TCRs也仅能引发极低的CD4+ T细胞辅助活性，因此无法最大限度地动员CD8+ TCR-T细胞或宿主抗肿瘤免疫反应。

方法：为了解决这些限制，使用CRISPR/Cas9技术对人T细胞进行定点插入合成的嵌合CD8构建体，这些构建体包含胞内共刺激结构域以及针对相关共享肿瘤抗原（WT1或PRAME）的TCR。通过急性及长期连续再挑战细胞毒性试验、增殖试验和细胞因子释放试验评估了TCR-T细胞的功能。利用具有挑战性的卵巢癌和AML肿瘤异种移植模型在体内评估了T细胞的功能，并通过ddPCR监测细胞的持久性。进一步的机制研究包括细胞因子谱型分析和多参数流式细胞术表型分析。

结果：CRISPR/Cas9介导的野生型CD8αβ位点特异性整合赋予WT1靶向的TCR-T细胞强大的CD4+T辅助细胞和细胞毒性活性。然而，这不足以在具有挑战性的卵巢癌或AML小鼠模型中驱动治愈性抗肿瘤反应。系统设计和筛选CD8共刺激融合构建体确定了相对于野生型CD8αβ活性显著增加的CD8-41BB设计。共表达CD8-41BB受体的WT1-TCR-T细胞在CD4+和CD8+T细胞活性方面表现出数倍的提升，包括细胞增殖、长期杀伤能力和偏向Th1型细胞因子分泌的增加。值得注意的是，当与TGFβR2基因破坏结合时，共表达CD8-41BB受体的WT1-TCR-T细胞能够完全消退已建立的卵巢肿瘤异种移植瘤，显示出强大的体内扩增，并提供了对肿瘤再攻击的长期保护。同样，在一个侵袭性的AML细胞系衍生模型中也实现了完全的肿瘤清除。重要的是，抗原特异性和HLA-A*02:01限制性在表达CD8-41BB受体后没有改变。最后，CD8-41BB受体驱动的增强活性在另一个高亲和力TCR靶向PRAME的实验中得到了证实。

结论：基于CRISPR/Cas9的新型CD8-41BB融合受体靶向整合代表了增强TCR基础细胞疗法效力的下一代方法。

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IMA203 TCR-T细胞疗法联合BRAF/MEK抑制剂治疗2名具有活动性中枢神经系统转移的黑色素瘤患者

波恩大学医院；德累斯顿大学；Immatics

背景：采用TCR-T进行过继细胞治疗在实体瘤患者中正成为一种有吸引力的治疗方法。最近，IMA203是一种针对癌症睾丸抗原PRAME的TCR-T产品，在经过多次预处理的黑色素瘤患者中显示出疗效。由于担心免疫效应细胞相关神经毒性（ICANS）的风险增加，活动性脑转移的患者通常被排除在这些试验之外。

方法：报告了2例BRAF突变晚期黑色素瘤患者的病例，他们在接受IMA203-101试验筛查时因存在活动性中枢神经系统（CNS）转移不符合入组条件。相反，他们以同情用药的方式在德国波恩和德累斯顿大学医院接受了IMA203治疗。

结果：2位患者在接受BRAF-/MEK抑制剂（MAPKi）治疗期间均出现中枢神经系统转移病灶进展，并在使用IFNα、免疫检查点抑制剂、手术和放疗等所有其他可用的标准治疗方案后病情仍无改善，随后接受了IMA203治疗。患者1，一名31岁的女性，在淋巴细胞清除期间停用MAPKi后，于第0天接受了6.11×10^8 IMA203 TCR-T细胞。两天后，患者出现意识减退，已知的中枢神经系统转移病灶增大，被认为是由于暂停MAPKi导致的疾病进展。短期高剂量dexamethasone与重新开始使用MAPKi同时进行，迅速缓解了症状。第11天，患者出院时未见CRS或ICANS的迹象。第43天和第94天观察到显著的肿瘤缩小，直至第134天才出现进展。患者2，一名28岁的女性，在继续使用MAPKi的情况下接受了IMA203（剂量：12.9×10^8 TCR-T细胞）。第2天，患者出现1级CRS和ICANS，接受tocilizumab / dexamethasone治疗。第3天，患者出现认知功能障碍加重和脑水肿，被诊断为2级ICANS。高剂量类固醇治疗迅速改善了症状。第15天，患者出院，未再出现其他并发症，并在第42天和第90天观察到中枢神经系统转移病灶的消退。患者在接受IMA203治疗后5个月出现肿瘤进展。

结论：IMA203 TCR-T 在2名经过多次治疗且有活动性中枢神经系统转移的黑色素瘤患者中应用，与MAPKi联合使用是安全的，临床可管理的CRS和ICANS。尽管很难区分MAPKi 和IMA203对观察到的中枢神经系统反应的单独贡献，但这里认为假设IMA203具有中枢神经系统活性是合理的，因为之前在MAPKi治疗下疾病仍在进展。

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NY-ESO-1 TCR-T细胞分泌SiRP-alpha诱饵与阿维鲁单抗(avelumab)和西妥昔单抗(cetuximab)联合使用可增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用

加利福尼亚大学旧金山分校；洛桑大学（UNIL）和洛桑大学医院（CHUV）

背景：ACT对实体瘤的疗效取决于诸如①靶抗原的选择、②TCR的特性，以及③TME中的抑制屏障等参数。在此，设计了HLA-A2限制性TCR-T细胞靶向在多种癌症类型中过度表达但在健康组织中存在有限的癌/睾抗原NY-ESO-1（A2/NY）。此前，通过基于结构的计算设计，通过在β链中进行单个氨基酸替换（A97L）优化了A2/NY TCR的亲和力。进一步工程化A97L-TCR T细胞，使其分泌高亲和力的SiRP-alpha诱饵（CV1或CV1-Fc），以阻断肿瘤上通常上调以逃避吞噬作用的"别吃我"受体CD47。最后，将抗肿瘤抗体cetuximab和avelumab与SiRP-alpha诱饵结合，以增强巨噬细胞介导的吞噬作用。

方法：原代人T细胞被转导编码TCR的慢病毒和编码SiRP-alpha诱饵（单体或Fc二聚体）的逆转录病毒，以实现最大程度的共表达。通过与NY-ESO-1+肿瘤细胞+/-巨噬细胞的共培养实验，评估了TCR-T细胞、T细胞分泌的SiRP-alpha诱饵、抗肿瘤抗体及其组合的体外活性。功能检测包括流式细胞术分析、ELISA、活细胞成像等。ACT研究在同种和异种移植小鼠肿瘤模型中进行。

结果：A97L-TCR T细胞在体外表现出显著更高的效应功能和在体内更有效的肿瘤控制，与野生型TCR-T细胞相比。CV1-Fc诱饵显著增强了巨噬细胞的吞噬活性，但同时也包裹了工程化的T细胞，导致它们在体内被清除。相比之下，被设计为分泌CV1（单体）的T细胞没有被人巨噬细胞靶向吞噬。CV1与抗肿瘤抗体Cetuximab和Avelumab协同作用，增强了巨噬细胞介导的肿瘤细胞吞噬。最后，Cetuximab和Avelumab通过ACT增强了肿瘤控制并重编程了肿瘤微环境。

结论：阻断SiRP-alpha/CD47与T细胞分泌的SiRP-alpha单体协同作用，增强抗肿瘤抗体介导的巨噬细胞对肿瘤的吞噬作用，同时保护T细胞。这种联合疗法展示了利用内源性免疫和支持ACT控制实体瘤的潜力。

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高通量鉴定癌症特异性CD4+ T细胞用于TCR-T细胞免疫治疗

华盛顿大学；约翰霍普金斯大学；加利福尼亚大学洛杉矶分校

背景：尽管在癌症治疗中使用单一克隆CD8+ T细胞取得了进展，但由于癌细胞的免疫逃逸和所给药的CD8+ T细胞的有限寿命，结果往往不尽如人意。为了解决这些挑战，越来越多的研究兴趣集中在利用癌症特异性CD4+ T细胞上。然而，CD4+ TCR的多样性和II类HLA的存在使得在不同患者中识别抗原特异性CD4+ T细胞面临挑战。为此，开发了一个高通量平台来筛选抗原特异性CD4+ T细胞，并提供关于TCR序列、HLA-抗原靶点和表型的多层次信息。

方法：设计了II类pMHC蛋白作为单链三聚体（SCTs），构建了一个包含常见传染病抗原的SCT库，用于从健康供者中识别和捕获抗原特异性CD4+ T细胞。通过tetramer结合和肽脉冲激活实验验证TCR序列。随后，构建了一个大型SCT库，编码SARS-CoV-2的RBD域，对22名COVID-19患者在7个时间点进行高通量筛选。对抗原特异性的CD4+ T细胞进行了单细胞测序，包括其TCR序列、转录组和SCT多聚体barcoded编码的抗原靶标。分析其表型，表征它们对病毒的免疫反应，并验证了TCR与其靶标的匹配。此外，将这项技术应用于发现HPV疫苗临床试验中HPV16特异性CD4+ T细胞。开发了一个针对E6和E7致癌蛋白的II类SCT库，以捕获HPV16特异性CD4+ T细胞，并分析了它们的转录组数据。

结果：II类SCT技术成功识别并捕获了抗原特异性CD4+ T细胞。该技术与单细胞多组学分析高度兼容，这一点通过SARS-CoV-2库得到了验证。鉴定出超过2000个具有不同表型的抗原特异性CD4+ T细胞，包括初始、效应记忆、耗竭、Th1、细胞毒性、Th17、Treg和Tr1。来自不同表型的一小部分TCR得到了验证。该技术还被用于发现HPV16特异性CD4+ T细胞，鉴定了超过100个具有不同表型的HPV特异性CD4+ T细胞。通过tetramer结合验证了5个HPV特异性CD4 TCR，并正在进行进一步的临床前评估以探索其治疗潜力。

结论：开发了一个高通量平台，使用工程化的II类SCTs用于筛选抗原特异性CD4+ T细胞。这项技术提供的表型信息可以指导选择具有更好治疗潜力的CD4 TCRs。通过这种方法，希望覆盖更广泛的患者，以实现现成的T细胞疗法。

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ACTengine IMA203 TCR-T靶向PRAME在重度预处理的实体瘤患者中显示出深入且持久的抗肿瘤活性

德累斯顿工业大学；MD安德森癌症中心；Immatics

背景：基于TCR的免疫疗法在治疗实体瘤方面具有巨大潜力。ACTengine IMA203 是一种自体TCR-T，旨在表达高亲和力和高特异性靶向在多种实体瘤中广泛存在的多癌症靶点PRAME的TCR。

方法：符合条件的患者可以参加这项正在进行的1b期试验（NCT03686124）：复发/难治性实体瘤，≥18岁，ECOG-PS 0-1，HLA-A*02:01/PRAME+，已用尽所有标准治疗。在白细胞分离后，T细胞被改造以表达针对PRAME的TCR，并在体外扩增。在接受Cy/Flu（500 mg/m²和30 mg/m² ×4天）淋巴清除后，输注IMA203，随后给予低剂量IL-2（每天1mio IU ×5天，每天两次×5天）。

结果：截至2024年5月24日，在试验的1b期剂量扩展部分，共有38名实体瘤患者接受了IMA203治疗，推荐的2期剂量为1-10×10^9总TCR-T细胞。患者接受过多次预处理，中位数为3次先前的系统治疗。基线时，肿瘤负荷（靶病灶直径之和的中位数）为103.5mm，63%的患者乳酸脱氢酶水平高于正常上限。治疗相关不良事件（TEAEs）可管理，最常见的事件是化疗相关的血细胞减少症（100%）和主要为轻至中度CRS（1-2级：76.3%），少数严重CRS（3级：18.4%）。观察到较少的ICANS（1级：5.3%，3级：7.9%），未观察到5级事件。根据RECIST1.1标准，37名患者中有21名（客观缓解率57%）观察到初步反应，并在35名患者中18名（确认客观缓解率51%）得到确认。黑色素瘤患者（包括皮肤、葡萄膜、黏膜和原发不明黑色素瘤）的确认客观缓解率为58%（14/24）。多种肿瘤类型中，大多数患者（33/37，89%）记录了肿瘤缩小，包括皮肤、葡萄膜和黏膜黑色素瘤、卵巢癌、滑膜肉瘤、乳腺血管肉瘤、乳腺癌和小细胞肺癌。中位缓解持续时间为10.5个月，18名确认缓解的患者中有11名在数据截止日期时仍在持续缓解，最长的缓解持续时间超过22个月。无进展生存期和转化数据将在会议上公布。

结论：IMA203 TCR-T耐受性良好，并在经过多次预处理的实体瘤患者中表现出深度且持久的客观反应，突显了IMA203作为黑色素瘤和其他实体瘤的新颖且有前景的治疗选择。

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下一代IMA203CD8 TCR-T单药治疗PRAME的增强药理学数据

MD安德森癌症中心；Immatics

背景：在黑色素瘤及其他疾病中，ACTengine IMA203 TCR-T靶向HLA结合的PRAME肽，剂量高达100亿TCR-T细胞时表现出深度且持久的反应。下一代IMA203CD8旨在通过以下方式增强抗肿瘤活性：①通过共转导CD8αβ和PRAME TCR增加功能性的CD4+T细胞；②通过CD4+T细胞反应增强CD8+T细胞的细胞毒性活性。

方法：符合条件的患者可参加这项正在进行的1期试验（NCT03686124）：复发/难治性实体瘤，≥18岁，ECOG-PS 0-1，HLA-A*02:01/PRAME+，已用尽所有标准治疗。自体T细胞经PRAME靶向TCR和CD8αβ转导，并在体外扩增。在接受Cy/Flu（500mg/m²和30mg/m² ×4天）淋巴耗竭后，输注IMA203CD8，随后给予低剂量IL-2（每天1mio IU ×5天，每天两次×5天）。

结果：截至2024年5月24日，30名具有多种适应症的患者接受了IMA203CD8治疗，剂量分别为DL3（0.200-0.481×10^9 TCR-T/m² BSA）、DL4a（0.481-0.800×10^9 TCR-T/m² BSA）和DL4b（0.801-1.200×10^9 TCR-T/m² BSA）。患者之前接受过大量预处理，中位数为3种系统性治疗。基线时，中位肿瘤负荷为88.6mm（范围：12.4mm；434.4mm），43.3%的患者血清LDH水平升高。与临床前研究一致，这些研究表明CD8αβ TCR-T细胞通过功能性的CD4 T细胞介导持续抑制肿瘤生长，从而增强抗肿瘤活性。数据显示，与IMA203细胞相比，IMA203CD8在较低的T细胞剂量下表现出更强的药理学效应，更高的峰值扩增和更高的初始激活水平，且不会随着时间的推移而耗竭。IMA203CD8在剂量高达0.800×10^9 TCR-T/m² BSA时显示出可管理的治疗相关不良事件（TEAEs），最常见的事件是化疗相关的细胞减少和CRS。在DL4b的2名患者中观察到DLTs，导致剂量调整至DL4a。根据RECIST 1.1标准，在所有剂量水平上均观察到PR，ORR为46%（10/22）。91%（21/23）具有可评估靶病变的患者（包括黑色素瘤、滑膜肉瘤和鳞状非小细胞肺癌）出现肿瘤缩小（中位数：-42.2%），其中3名患者的肿瘤缩小超过-85%。中位缓解持续时间（mDOR）为6个月（最小3.5个月，最大19.3+个月），中位随访时间为9.6个月。在DL4a的18名患者中观察到的抗肿瘤活性的有希望迹象和可管理的耐受性，结合对入组标准的修改和IL-2方案的轻微调整，为进一步探索更高剂量提供了可能，旨在研究IMA203CD8在难治性实体瘤中的全部临床潜力。

结论：下一代TCR-T IMA203CD8在剂量高达0.800x10^9 TCR-T/m2 BSA时显示出有希望的抗肿瘤活性，并且不良事件可管理。更新的转化和临床数据将重点关注黑色素瘤和滑膜肉瘤。

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一项关于自体工程化CD4+和CD8+T细胞的I期研究：HLA-A*11:01限制性KRAS-G12V TCR + CD8α/β共受体和FAS41BB开关受体在实体瘤患者中的应用

Affini-T Therapeutics

背景：KRAS突变（包括KRAS G12V）是实体瘤中已知的致癌驱动因素。携带KRAS驱动突变的患者预后不良，大多数KRAS突变的癌症缺乏有效的治疗方法。针对突变KRAS的TCR-T细胞疗法在临床上已经证明了概念，但反应持续时间仍然是一个挑战。AFNT-211代表了一种新的策略，旨在解决免疫抑制的肿瘤微环境，提高实体瘤的反应率和持续时间。

方法：这项正在进行的I期、首次人体、多中心、开放标签研究评估了AFNT-211的①安全性/耐受性，②确定最佳生物剂量（OBD）和推荐的II期剂量（RP2D），以及③初步抗肿瘤活性。该研究分为两个部分：剂量递增和剂量扩展。剂量递增由贝叶斯最优区间I/II期（BOIN12）设计指导，以确定OBD。BOIN12设计通过毒性和疗效之间的权衡来量化剂量的可取性，并适应性地将患者分配到估计最可取的剂量。RP2D将基于BOIN12设计和整体效益/风险评估选择。参加剂量扩展的患者将在特定疾病队列中接受OBD/RP2D治疗。本研究针对年龄≥18岁、HLA-A*11:01阳性的晚期/转移性实体瘤患者，且携带KRAS G12V突变，对至少一种先前的系统治疗不耐受或进展。患者将进行白细胞分离以收集用于制造AFNT-211 T细胞，并在AFNT-211输注前接受淋巴耗竭化疗。随后将进行28天的剂量限制毒性观察期（仅限剂量递增阶段）和24个月/直至疾病进展的治疗后随访期。该研究在美国开放招募（NCT06105021）。

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设计具有结构增强的蛋白质语言模型的高效抗肿瘤TCRs

Vcreate Inc.

背景：TCRs是一种有前景的治疗模式，可以通过细胞疗法（工程T细胞）或生物制剂（基于TCR的T细胞衔接器）来靶向治疗癌症的细胞内靶标。有效的TCR治疗方法通常需要比天然TCR更高的靶标特异性亲和力或亲合力（PMID: 37891435）。为了开发这样的治疗方法，TCR通常需要通过多轮文库生成和筛选进行突变和选择，以获得所需的亲和力，这是一个耗时且劳动密集的过程。这里开发了一种完全计算的TCR优化过程，基于结构增强的蛋白质语言模型，无需文库生成或筛选。将该算法应用于显著增强一种靶向由HLA-A2呈递的验证性癌睾抗原PRAME的中等亲和力的抗肿瘤TCR。

方法：一百万个TCR通过随机突变已知的抗PRAME TCR的alpha和beta CDR3区域计算设计而成。使用改进版的TCR语言模型TAPIR（基于结构数据微调）对候选TCR序列进行评分（图2）。选择了得分最高的20个TCR候选进行测试。野生型和突变型TCR候选被转导到报告T细胞系中以测量亲和力和亲合力。工程化的TCR-T细胞与A2+ PRAME+髓系癌细胞（图1A）或用不同浓度PRAME肽脉冲的T2细胞（EC50，图1B）混合。通过NFAT水平量化TCR亲合力。通过pMHC tetramer染色量化TCR结合亲和力。

结果：在与A2+PRAME+髓系癌细胞系混合时，20个TCR候选者中有8个表现出比野生型TCR高2-9倍的NFAT激活信号（图1A）。对于排名top5的TCR候选者，观察到其EC50相比野生型提高了31-140倍（图1B，0.33nM-47nM）。20个TCR候选者中有6个在使用pMHC tetramer染色测试时显示出显著更高的PRAME特异性结合亲和力。在高浓度（1μM）下，没有TCR候选者对5种对照抗原表现出脱靶NFAT激活。

结论：展示了如何通过计算算法在不进行任何文库生成和筛选的情况下提高TCR的靶标特异性亲和力和亲和性。仅测试了算法选择的20个TCR，并发现了一个EC50值提高了140倍且没有脱靶效应的TCR。该算法广泛应用有望实现快速TCR优化，推动治疗开发。

图1 针对HLA-A2呈递的PRAME肽，计算设计的TCR在与A2+ PRAME+癌细胞（A）或不同浓度的肽脉冲T2细胞（B）测试时的亲和力

图2 TAPIR

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一种将起始材料与过继T细胞疗法中T细胞持久性监测相连接的方法

美国Immatics US, Inc.；德国Immatics Biotechnologies GmbH

背景：在TCR-T试验中，进行药代动力学（PK）分析以监测输注后产品候选物的扩增和持久性。目前，PK分析主要采用两种方法（即qPCR和流式细胞术），以及两种主要样本类型（即PBMC和全血）。虽然分离PBMC是常见做法，但它需要较长的处理时间和较高的样本量，因此在临床试验中，全血成为一种有吸引力的选择。在这项研究中，探讨了将PBMC作为起始材料转换为全血在基于qPCR的PK分析中的可行性。

方法：使用健康供体血液与代表性TCR-T药物产品细胞混合，创建了匹配的样本类型。为了模拟临床样本，全血样本与TCR-T药物产品细胞以1:1到1:0.01的不同比例混合，总细胞浓度范围从10^6至10^3个细胞/mL。样本要么以200μL、1mL或2mL的全血分装冷冻，要么进行PBMC分离，从而创建匹配的样本类型。提取基因组DNA（gDNA），并通过吸光度评估质量和通过荧光计评估数量。通过qPCR定量整合的转基因（载体）拷贝数，并通过变异系数（%CV）评估匹配样本类型之间的可比性。

结果：可行性评估的数据表明，使用少量全血样本（200μL）提取的gDNA质量与匹配的PBMC样本相当。然而，观察到的DNA量显著低于匹配的PBMC样本，这与全血中较低的细胞输入量相符。然而，将全血输入体积增加到2mL进行提取后，不同样本类型的gDNA量和质量相似。在评估载体拷贝数时，无论全血输入体积、总细胞浓度、药物产品候选百分比或不同的分离试剂盒如何变化，匹配样本类型之间的%CV均不超过20%。同样，对全血进行多达两次的冻融循环评估，结果也具有可比性，表明样本稳定性良好。综合来看，这些结果表明全血和PBMC样本之间具有可比性，并支持了使用患者样本进行的桥接研究。

结论：虽然在细胞治疗领域中，PBMC和全血都已被用于PK测定，但本研究有效证明了将PBMC的应用扩展到全血的可行性。未来的工作将集中在评估临床样本，以确认本研究中观察到的可比性结果。

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