表达细胞株
表达细胞株是指用于表达外源蛋白的特定细胞系或细菌株。在基因工程和蛋白表达领域,常常使用特定的细胞株来表达感兴趣的蛋白。
常见的表达细胞株包括:
大肠杆菌(Escherichia coli):大肠杆菌是最常用的原核表达宿主,其具有成熟的表达系统和相对容易的工程操作。它通常被用于表达产生大量非糖基化蛋白质。
酵母菌(Saccharomyces cerevisiae):酵母菌也是常用的表达宿主,其优点是易于生长和大规模培养。酵母菌可以表达复杂蛋白的正确折叠和糖基化。
昆虫细胞(如Sf9、Sf21细胞):昆虫细胞常常被用于表达复杂蛋白,尤其是在重组蛋白需要进行糖基化的情况下。这些细胞通常用于昆虫病毒表达系统(如杆状病毒)进行表达。
哺乳动物细胞(如CHO细胞、HEK293细胞):哺乳动物细胞往往被用于表达复杂蛋白,以确保高度的糖基化和正确的蛋白折叠。CHO细胞和HEK293细胞是常用的哺乳动物细胞株。
基因过表达细胞系 通过慢病毒感染法或核转染法将过表达载体转入细胞中,根据预先摸索的最佳药筛浓度,对细胞进行药物筛选,直到对照组细胞全部死亡,获得基因稳定表达的细胞株。选择表达细胞株时,需要考虑到蛋白的复杂性、糖基化要求、产量要求以及后续应用的目的。不同的表达细胞株具有不同的特点和适用范围,选择适合的表达宿主是成功表达和纯化目标蛋白的关键。
优秀的单克隆细胞株还要考虑到细胞生长、表达和代谢情况,以及目的蛋白的质量水平。要关注乳酸和氧的代谢,高乳酸和高耗氧可能为细胞株在反应器的培养埋下隐患。细胞株的工艺要考虑到未来反应器中培养的可重复和可放大性,同时选择可及性较强,批次稳定的培养基和补料。
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