免疫荧光抗体蛋白

免疫荧光抗体蛋白（Immunofluorescent Antibody Protein，IF）是一种常用的实验方法和抗体类型。它基于抗原与抗体的特异性结合，利用荧光信号来检测目标分子的存在和定位。IF技术在免疫学、细胞生物学和生物医学研究中被广泛应用，用于检测和定位细胞内的蛋白质、核酸、细胞器和细胞结构等。通常，荧光抗体蛋白与目标分子结合后，使用荧光显微镜观察、拍摄和分析荧光信号。这种技术可以提供高分辨率的细胞结构、亚细胞定位和定量分析，帮助科学家深入研究细胞功能和疾病发生机制。 

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。

基本实验步骤：

（1）细胞准备。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。

（2）固定。根据需要选择适当的固定剂固定细胞。固定完毕后的细胞可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。PBS洗涤3×5 min.

（3）通透。使用交联剂（如多聚甲醛）固定后的细胞，一般需要在加入抗体孵育前，对细胞进行通透处理，以保证抗体能够到达抗原部位。选择通透剂应充分考虑抗原蛋白的性质。通透的时间一般在5-15min.通透后用PBS洗涤3×5 min.

（4）封闭。使用封闭液对细胞进行封闭，时间一般为30min.

（5）一抗结合。室温孵育1h或者4℃过夜。PBST漂洗3次，每次冲洗5min.

（6）二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次，每次冲洗5min后，再用蒸馏水漂洗一次。

（7）封片及检测。滴加封片剂一滴，封片，荧光显微镜检查。

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