大肠杆菌蛋白表达

大肠杆菌蛋白表达是一种常用的蛋白质表达系统，它利用大肠杆菌作为宿主细胞来表达目标蛋白。以下是大肠杆菌蛋白表达的一般步骤：

1. 克隆：将目标基因插入到适当的表达载体中，通常是质粒。这个载体通常包含启动子、转录终止子和选择标记等元件。

2. 转化：将质粒导入大肠杆菌细胞中，通常使用化学方法（如热激冷冻法）或电转化方法。

3. 选择：通过添加适当的抗生素或其他选择标记，筛选出带有目标基因的细胞。

4. 培养：将筛选出的细胞培养在含有适当培养基的培养条件下，以促进蛋白表达。

5. 诱导表达：在培养过程中，添加适当的诱导剂（如IPTG）来激活启动子，从而促进目标蛋白的表达。

6. 细胞破碎：培养细胞达到一定密度后，通过超声波破碎或其他方法破碎细胞，释放目标蛋白。

7. 纯化：使用各种蛋白纯化技术，如亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤等，纯化目标蛋白。

需要注意的是，大肠杆菌蛋白表达系统虽然简单易用，但也存在一些问题，如蛋白质的不溶性、毒性和结构不完整等。因此，在进行大肠杆菌蛋白表达时，需要根据具体情况选择适当的表达载体、培养条件和纯化方法，以获得高质量的目标蛋白。

大肠杆菌表达系统简介

1. 代谢途径和基因表达调控机制比较清楚

 1) 全基因组测序，共有4405个开放性阅读框架；

 2) 基因克隆表达系统成熟完善；

 3) 繁殖迅速，培养简单，操作方便，遗传稳定。

2. 培养周期短

 1) 大肠杆菌繁殖能力强，在营养条件充足时，20~30mins即可繁殖一代；

 2) 大规模发酵成本低，具有巨大的生存潜力。

3. 目标基因表达水平高

　表达水平较一般真核表达系统高，某些外源基因在大肠杆菌中的表达量可达总蛋白的5%~30%。

4. 遗传背景清楚

 1) 对大肠杆菌的遗传背景和生理特性研究相当清楚，已有多种不同的抗药性、不同营养缺陷型和不同校正突变型的菌株供选择使用；

 2) 可以根据不同的载体而选择不同的菌株。

5. 抗污染能力强，下游工艺简单，易于控制。

6. 已有大量可供选择利用的表达载体，被美国FDA批准为安全的基因工程受体菌。

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