【期刊导读】疗效预测新指标TRIM38：聚乙二醇干扰素α可诱导其表达，提升抗病毒疗效

编者按

三基序蛋白（TRIM）家族是一类在抗病毒先天免疫中发挥着重要作用的蛋白质，迄今为止已发现80多个TRIM家族成员，研究显示多种TRIM家族蛋白属于干扰素刺激基因（ISGs），参与抑制HBV的复制及基因表达。既往研究已证实TRIM26可以通过介导HBx泛素化降解来抑制HBV复制，且TRIM26 rs116806878与聚乙二醇干扰素α（PEG IFNα）的治疗应答有关。TRIM38是TRIM蛋白家族的一员，在不同的细胞中广泛表达并参与多种生物学过程，如细胞增殖、先天免疫和炎症反应等。

重庆医科大学附属第一医院秦波教授团队发表的一项研究深入探讨了TRIM38在体内外对HBV复制及表达的影响，以及与PEG IFNα抗病毒治疗应答的关系，结果表明IFNα在体内外均能诱导TRIM38的表达，TRIM38高表达可抑制HBV的复制及基因表达，并通过上调抗病毒蛋白的表达从而增强IFNα的抗病毒作用，治疗过程中较高的TRIM38水平是预测PEG IFNα治疗应答的有效生物标志物。

研究方法

本研究基于2019年AASLD共识标准，分别纳入正常献血者（n = 20）、未治疗的慢乙肝患者（n = 35）以及接受PEG IFNα治疗24周的慢乙肝患者（n = 59，23例有应答，36例无应答）的血液样本。将接受PEG IFNα治疗的患者分为早期应答者和早期无应答者，早期应答者定义为PEG IFNα治疗24周后，HBV DNA下降> 2 log10 IU/mL或HBsAg迅速下降（治疗24周时HBsAg < 200 IU/mL或下降> 1 log10 IU/mL）的患者；其余患者定义为早期无应答者。从血液样本中分离出外周血单个核细胞（PBMCs）进行下一步研究。

研究结果

一、TRIM38可抑制HBV的复制及基因表达

1.未治疗慢乙肝患者的TRIM38水平较低，且与HBV DNA及ALT水平呈负相关

比较35例未治疗慢乙肝患者与20名健康志愿者PBMCs中TRIM38 mRNA的水平。与健康对照组相比，未治疗慢乙肝患者的PBMCs中TRIM38 mRNA的表达显著降低（P = 0.0234）。

健康对照组与未治疗慢乙肝组PBMCs中的TRIM38 mRNA水平

相关性分析显示，未治疗慢乙肝患者的PBMCs中的TRIM38 mRNA水平与HBV DNA水平（r = 0.1514, P = 0.0209）及 ALT水平均呈负相关 （r = 0.1171, P = 0.0442）。

未治疗慢乙肝患者的TRIM38 mRNA水平 与HBV DNA水平（C）及ALT水平的相关性分析（D）

2.过表达TRIM38可显著抑制HBV的复制及基因表达

为评估TRIM38在HBV复制和基因表达中的作用，在HepG2细胞中共转染pHBV1.3质粒和TRIM38 pcDNA3.1质粒。结果发现TRIM38过表达后HBV RNA及pgRNA水平显著降低，且HBsAg和HBeAg水平显著下降。

TRIM38过表达后HepG2细胞中HBV RNA和pgRNA的表达情况（B）;HBsAg和HBeAg的表达情况（C）

进一步用TRIM38过表达质粒或对照载体转染稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞后检测发现，TRIM38过表达后HBV RNA、pgRNA、HBsAg及HBeAg水平均显著降低。

TRIM38过表达后HepG2.2.15细胞中HBV RNA及pgRNA 的表达情况（E）；HBsAg和HBeAg的表达情况（F）

3.敲除TRIM38增强了HBV的复制及基因表达

siRNA-951和siRNA-1814表现出强烈的TRIM38敲除效应，在此基础上发现，敲除TRIM38后总HBV mRNA与pgRNA水平、HBsAg与HBeAg水平均显著升高。

敲除TRIM38后HepG2细胞中HBV RNA及pgRNA的表达水平（B）；HBsAg及HBeAg的表达水平（C）

在稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞中重复相关实验发现，沉默TRIM38后总HBV mRNA、pgRNA、HBsAg及HBeAg水平均显著增加。

敲除TRIM38后HepG2.2.15细胞中HBV RNA   及pgRNA的表达水平（E）；HBsAg和HBeAg的表达水平（F）

二、PEG IFNα治疗可提高慢乙肝患者的TRIM38 mRNA水平，24周较高的TRIM38水平提示治疗应答更佳

1.慢乙肝患者经PEG IFNα治疗后TRIM38 mRNA水平显著升高

比较未治疗慢乙肝患者与接受PEG IFNα治疗24周的慢乙肝患者PBMCs中的TRIM38 mRNA水平。与未治疗慢乙肝患者相比，接受PEG IFNα治疗的慢乙肝患者PBMCs中的TRIM38 mRNA水平显著更高（P < 0.0001）。

未治疗与接受PEG IFNα治疗慢乙肝患者的PBMCs中的TRIM38 mRNA水平比较 2.PEG IFNα治疗24周时 TRIM38显著升高与治疗应答更佳相关

为研究早期抗病毒治疗过程中PBMCs中的TRIM38的动态变化与早期治疗应答之间的关系，对59例接受PEG IFNα治疗24周的慢乙肝患者（包括23例早期应答者和36例早期无应答者）展开了前瞻性纵向随访研究。

与早期无应答组相比，治疗结束时早期应答组的HBV DNA和HBsAg水平更低，且治疗过程中下降速度更快。且在治疗12周时早期应答组的ALT水平明显升高。

早期应答组和早期无应答组HBV DNA、HBsAg及ALT水平的动态变化

所有接受治疗的慢乙肝患者在治疗12周（P = 0.0311）和24周（P = 0.0028）时TRIM38 mRNA水平均显著升高。

接受PEG IFNα治疗的慢乙肝患者在治疗期间TRIM38 mRNA表达的动态变化

进一步研究发现，与基线相比，早期应答组和早期无应答组中TRIM38的表达水平均有所增加，但早期应答组在治疗24周时TRIM38的增加幅度具有统计学意义（P = 0.0098）。与早期无应答组相比，治疗12周和24周时早期应答组的TRIM38表达水平均更高，且在24周时差异有统计学意义（P = 0.0427）。

早期应答组与早期无应答组在各时间点的TRIM38 mRNA水平比较

三、IFNα可诱导TRIM38的表达，从而上调抗病毒蛋白的表达来增强其抗病毒作用

1.IFNα可上调TRIM38的表达

既往研究发现Ⅰ型IFNs诱导了TRIM38的表达，为进一步证实该结论，用不同浓度的IFNα（0、10、100、1000和10000 U/mL）处理HepG2细胞并检测发现，TRIM38在HepG2细胞中呈剂量依赖性上调，检测相关蛋白也证实IFNα能在体外诱导TRIM38蛋白表达。表明TRIM38的表达受IFNα的诱导，并增强IFNα的抗病毒疗效。

采用qRT-PCR检测TRIM38的基因表达（A）； 用TRIM38抗体测定TRIM38蛋白表达水平（B）

2.PEG IFNα治疗24周时 TRIM38显著升高与治疗应答更佳相关

为探究TRIM38对IFNα抗病毒作用的影响，将TRIM38过表达的质粒或空载体转染HepG2.2.15细胞，24 h后用IFNα（1000 U/mL）处理，并检测抗病毒蛋白Mx1，IFIT1和STAT1水平。Western blot结果显示，与仅用IFNα处理的HepG2.2.15细胞相比，IFNα和TRIM38共处理的HepG2.2.15细胞中的抗病毒蛋白Mx1、IFIT1和STAT1均显著上调，提示TRIM38蛋白增强了IFNα的抗病毒作用。

Western blot检测经不同方案处理的HepG2.2.15细胞中的抗病毒蛋白MX1、IFIT1及STAT1的表达水平

肝霖君有话说

IFNα先天免疫应答能抑制HBV感染，而TRIM38在多种细胞中广泛表达，且与Ⅰ型IFN应答和病毒感染相关，在先天免疫中发挥重要作用。本研究发现，未治疗慢乙肝患者PBMCs中的TRIM38表达水平显著低于健康对照组，且与HBV DNA和ALT水平呈负相关。而IFNα可以增强TRIM38的表达，TRIM38可促进下游抗病毒蛋白MX1和IFIT1的表达，从而显著抑制HBV的复制和表达，提示TRIM38是IFNα发挥抗HBV作用的一种重要ISG。

此外，本研究还发现PEG IFNα治疗第12周及24周时所有慢乙肝患者的TRIM38表达均有所增加，而早期应答者PBMCs中的TRIM38表达水平高于早期无应答者，特别是在治疗24周时。这一发现提示PEG IFNα诱导的TRIM38高表达水平可能与更好的预后有关，即治疗早期外周血中较高的TRIM38水平可能预示着PEG IFNα治疗应答更佳。

END

参考文献： 

Luo H, Hu X, Li Y, et al. The antiviral activity of tripartite motif protein 38 in hepatitis B virus replication and gene expression and its association with treatment responses during PEG-IFN-α antiviral therapy[J]. Virology. 2023; 579: 84-93.

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