干酪乳杆菌Zhang可明显促进小鼠肠道免疫功能

黏膜免疫系统是机体免疫系统的重要组成部分。其主要功能是作为机体的防御屏障，清除和排斥外来分子，保护机体不受损害。是人体抵御感染的第一道防线。

近年来，黏膜免疫越来越受到重视。主要由单个或多个淋巴滤泡聚集成滤泡结节，如Payer’Spatches节、盲肠扁桃体，并有大量外分泌腺形成粘膜相关淋巴组织。

在肠黏膜免疫系统中，派伊尔氏结和黏膜相关淋巴细胞等黏膜相关淋巴组织直接参与肠黏膜抗原的识别、呈递和免疫效应，其功能和状态直接反映肠黏膜免疫反应的功能和状态[1].

益生菌包括乳酸杆菌、双歧杆菌等，它们具有调节肠黏膜屏障功能的作用，有的能调节肠黏膜免疫反应，有的能抑制肠道致病菌对肠上皮细胞的粘附，保护肠道免受致病菌的损害[2-3]。

乳酸杆菌、双歧杆菌的代谢产物和全细胞等抗原物质可通过M细胞进入PP，激活Th2细胞，产生大量IL—5。IL-5是一种有效的IgA产生因子，可激活PP生发中心的B细胞，使其转化为浆细胞，在产生Ig的过程中转化为IgA。肠粘膜上皮细胞也可产生分泌体，与双体IgA分子结合形成sIgA，排列在肠内皮上。SIg A能阻止肠道蛋白酶的分解，并在粘膜上形成抗体。

由于益生菌一般含有其他细菌的共同抗原，sIgA可与肠道细菌和病毒发生反应，阻断这些细菌和病毒对肠道上皮的粘附和渗透，中和毒素，缓解腹泻、胃炎、过敏、皮炎等症状[4].

本研究从内蒙古传统酸马奶酒中分离到一株具有潜在益生特性的乳酸杆菌，通过耐酸试验和在人工胃肠消化液中的存活试验进行筛选的具有潜在益生特性的干酪乳杆菌Zhang[5]，前期的研究证明这个菌株具有明显的降血脂、免疫调节作用[6-8]。

将干酪乳杆菌 Zhang 以活菌制剂的形式分高、中、低三个剂量灌服小鼠11天后，对小鼠局部肠粘膜免疫组织派伊尔氏结进行计数计分，采用免疫组化法检测小肠粘膜CD3+、IgA+细胞数量，并通过图像分析软件分析其阳性信号平均光密度值，以了解其表达情况，观察干酪乳杆菌 Zhang 对小鼠肠膜免疫功能的影响，为传统乳制品中益生菌的开发应用及进步阐明其益生作用机理提供参考依据。

1、方法

将冻干的干酪乳杆菌（Lc Zhang）接种于TPY培养基中，37℃培养18小时，按日剂量包装，以备后用。大白鼠喂养4天后，随机分为4组通过小鼠肠道派伊尔氏结观察，小肠粘膜 CD3+IgA+细胞免疫组化检测，观察肠黏膜中CD3+和IgA+细胞的数量和表达强度。并分析软件检测阳性信号的平均光密度，以反映CD3+和IgA表达的强弱，分别与对照组比较。

2、结果与分析

2.1小肠的Peyer氏计数和评分。

2.2 小鼠小肠黏膜CD3+和IgA+细胞的数量和表达强度。

免疫组化染色结果显示，CD3+和IgA阳性染色特异性好，胞浆和胞膜表达清晰。上皮内淋巴细胞90%为CD3+T细胞，主要分布于小肠黏膜绒毛上皮细胞之间。IgA+浆细胞主要位于小肠粘膜上皮层下面的固有层。

小肠免疫组化染色结果如图2。结果表明，CD3+阳性细胞主要分布于小肠黏膜绒毛上皮细胞之间，位于上皮基底部；IgA+阳性细胞主要分布于黏膜固有层，且阳性颗粒定位于细胞膜和细胞浆内，呈棕黄色星状。小肠膜CD3+、IgA+细胞计数及图像分析平均光密度值结果见表2。

从以上结果可以看出，与对照组相比，三个剂量组的小鼠十二指肠、空肠和回肠中的CD3+和IA阳性细胞的平均数均显著增加。高剂量组CD3+阳性信号的平均光密度值Lc Zhang为020±0.03，显著高于对照组012±0.03（P0.01）,IgA阳性信号的平均光密度值Lc Zhang为019±0.04（P0.05）中剂量组0.26±0.07高剂量组显著高于对照组015±0.03(P<0.05)。

本次研究讨论

黏膜免疫系统广泛存在于人和动物机体中，在机体抗感染中起着极其重要的作用。粘膜表面与外界抗原直接接触，这是机体抵御感染的第一道防线[9]。粘膜免疫已成为免疫学研究的新热点，因为机体内95%以上的感染发生在粘膜或从粘膜侵入机体。此外，粘膜中既有局部免疫，也有共同粘膜免疫系统（CMIS）。动物的先天性或非特异性免疫反应，即机体免疫系统对各种外来物质的识别和清除，主要依靠机体黏膜的屏障功能。

益生菌的细胞壁成分、代谢产物和细菌细胞可刺激动物的肠粘膜免疫系统[10]，益生菌可作为非特异性免疫调节剂，通过细菌本身或细胞壁成分刺激宿主免疫细胞，使其活化，产生促分裂因子，促进吞噬细胞活力或作为佐剂发挥作用。

同时，益生菌还能发挥特异性免疫功能，增强B细胞产生抗体的能力，促进机体免疫器官和组织的成熟，使这些器官和组织处于高度反应准备状态，增加T、B淋巴细胞的数量，并诱导其产生细胞因子，特别是腹腔巨噬细胞产生的IL—1.IL—6、IL—12等[11]。

在肠黏膜免疫系统中，派伊尔氏结和黏膜相关淋巴细胞（包括上皮间淋巴细胞和固有层淋巴细胞）直接参与肠黏膜抗原的识别和呈递及免疫效应，其功能和状态直接反映了肠黏膜免疫系统的功能和状态。派伊尔氏结的大小间接反映了派伊尔氏结内T淋巴细胞、B淋巴细胞和浆细胞的数量和大小。

动物实验中观察到，无菌动物的肠壁集合淋巴结很小，在肠道内定植正常菌群后，肠壁集合淋巴结可明显增大。胎儿出生后，肠壁集合淋巴结的大小和数量急剧增加，从怀孕24周时的50个左右增加到成年后的250个左右，说明环境中的抗原，如微生物的刺激可以促进其发育。同时还发现全肠外营养会引起派伊尔氏结数量减少，而口服PSK可改善这种情况[1]。

本研究的结果表明，经过11天的Lc Zhang活菌液后，派伊尔氏结的数量和大小增加。本文用CD3+和IgA+细胞分别反映小肠上皮内淋巴细胞（IEL）和浆细胞的情况。研究表明，小鼠灌胃后小肠膜T细胞、浆细胞数量增加，免疫功能增强。T细胞和B细胞对于维持肠黏膜的完整性，顺利发挥其屏障功能具有重要意义。提示Lc Zhang对小鼠肠黏膜免疫功能有明显的促进作用。

参考文献

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