读谱 || 2、读谱基本原理及方法步骤

嗨，亲爱的小伙伴们，大家好！

今天咱们介绍读谱基本原理及方法步骤。

在读谱过程中，检测人员需要回答的问题是如何根据反应格局来判定血型抗体的特异性，即确定这个抗体是什么抗体和不是什么抗体。

解决这一问题的方法是以统计学为基础的排除法。排除的原则是“阴性排阳性”，即被检样本与某一红细胞呈阴性反应（无凝集无溶血的反应结果）说明被检样本中没有针对该红细胞抗原的抗体，故可以排除存在针对该红细胞阳性抗原的抗体。相反地，阳性结果反映的是样本中存在针对该谱细胞阳性抗原的抗体，但同时也可能还存在针对该谱细胞阴性抗原的抗体，此细胞不能检出，故不可采用“阳性排阴性”的方式来判定。

“阴性排阳性”的血型抗体特异性判断规则本质上是不完全归纳推理，所得结论是否可靠，需要通过假设检验来验证，以判断所得结论是随机事件还是必然事件。运用概率推理，可以判断通过血型抗体特异性判断规则所得结论正确性的几率有多大，故“阴性排阳性”的判断方式是关于机会的推断。

基于Fisher确切概率法的标准方案中规定特异性鉴定需要3组抗原阳性细胞反应结果为阳性，3组抗原阴性细胞反应结果为阴性，即3阴3阳原则；如果上述方法不可行，也可使用更宽松的方法，其允许的最低要求是p值小于<=0.05，与谱细胞2个反应5个不反应反应，即2阳5阴原则(或相反，2阴5阳）；或1个反应19个不反应，即1阳19阴原则(或相反，1阴19阳)。有兴趣的小伙伴们可以根据以下公式进行计算：

备注：n!=1×2×3……×n；0！=1

下面咱们以一个简单的小案例来进行具体的结果判读。患者自身对照及直抗均阴性，抗鉴试验原始结果如下图：

将试验结果记录到细胞谱表中，见表1 ：

表1：意外抗体鉴定谱细胞反应格局表

由表1结果可知：盐水抗鉴全阴， 暂时可排除IgM类抗体；IAT （这里是使用的微柱抗人球法） 试验阳性，有格局，说明该标本存在IgG类意外抗体。下面咱们使用“阴性排阳性”进行逐一排除。

1、标记阴性结果。将所有阴性结果所在的横行谱涂以颜色（灰色部分），得到表2。

表2：阴性反应结果标注

2、排除阳性抗原。阴性结果中出现阳性抗原时，将此阳性抗原所在纵列由上至下再涂上颜色（代表被排除的抗原），得到表3。

表中未被排除（即未被标记）的抗原即为检测样本中抗体可能的特异性，即抗-D和抗-Js a 。

表3：阳性抗原的排除

3、此时，我们需要更进一步确认是何抗体，则需使用“阳交叉”进行分析判断，即将所有阳性反应中均含有同一种抗原的结果用另一种颜色（表中蓝色）标出（即阳性结果与阳性抗原相交叉），则基本可以确定样本中含有该特异抗体，即抗-D，见表4。

表4：阳交叉

“阴性排阳性”可以起到缩小特异性抗体判读范围的作用，同时还能确保不会遗漏可能的抗体。而“阳交叉”可以明确指向样本中存在何种特异性抗体，但不能否定未确定特异性抗体的可能性。如本案例，根据表4结果，可判为：该样本中存在IgG型抗-D，但也还可能存在抗-Jsa。

4、抗体特异性判断结果的验证。 1）根据患者自身相应抗原的阴阳性进行验证，即自身抗原阴性才可能产生相应同种抗体，否则不能判为同种抗体；2）使用交叉配血进行验证，即与相应抗原阴性血液交叉结果为阴性，与相应抗原阳性血液交叉结果为阳性；3）根据当地人群血型抗原表达频率进行验证，如本案例，抗-D是常见抗体，故该抗体特异性为抗-D可能性更大。

需要特别说明的是，抗鉴结果阴性不一定意味着血清中没有抗体，可能是所选用的谱细胞不足或/和实验条件所限而造成的一些低频抗体或有剂量效应的抗体漏检。此时，需要使用抗原性更完全和特异性更强的谱细胞做试验（如，另外增加一套谱细胞），或使用敏感度更高的技术进行试验，如PEG增强、酶试剂、改良凝聚胺法等。同时结合临床医师提供的病史资料和实验室其他线索扩大筛查范围。

好啦，对于抗体鉴定结果读谱基本原理和方法步骤就简单介绍到这里啦。在后面的推文中，咱们将继续以例为鉴，跟大家一起，一步一步仔细读谱。不想错过咱们精彩推送的小伙伴们，记得文末点赞、在看哦。同时不要忘了给咱们公众号星标，这样就能第一时间看到咱们的推送啦

参考文献：

1、《红细胞血型原理与检测策略》第2版，主编：张印则、徐华、周华友

2、《输血相容性检测及疑难病例分析》，主编：桂嵘、张志昇、王勇军

3、《AABB 技术手册》第20版，主译：桂嵘、陈秉宇、黄远帅、王勇军

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