电针通过上调MTA1表达促进小鼠脑缺血再灌注后血管发生改善神经功能

夏莹1 王世全2 高子军3

1空军军医大学第一附属医院消化内科，西安 710032；2空军军医大学第一附属医院麻醉与围术期医学科，西安 710032；3西安市红会医院麻醉科，西安 710054

国际麻醉学与复苏杂志,2023,43(05):449-455.

DOI：10.3760/cma.j.cn321761-20220824‑00790

基金项目

陕西省自然科学基金（2019JQ‑979，2023‑JC‑YB‑652）；

西安市Ⅰ类项目（2019091005）；

西安市科技计划项目［20YXYJ0004（6）］

ORIGINAL ARTICLES

【论著】

本研究拟验证肿瘤转移相关蛋白1（MTA1）在电针（EA）促进脑缺血后血管再生中的作用，为EA治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据。 

1材料与方法

80只8~10周龄C57小鼠采用随机数字表法分为5组（每组16只）：假手术组（Sham组）、脑缺血再灌注损伤组［大脑中动脉栓塞（MCAO）组］、EA治疗组（EA组）、对照干扰小RNA（siRNA）组（Control siRNA组）、MTA1 siRNA组。Sham组不做任何处理；MCAO组行MCAO，在建模后第3天仅接受麻醉及针刺，不给予EA刺激，连续5 d；EA组MCAO建模后第3天，在“百会”穴进行EA治疗，连续5 d；Control siRNA组MCAO建模后在缺血半暗带区注射对照siRNA，后续处理同EA组；MTA1 siRNA组MCAO建模后在半暗带区注射MTA1 siRNA，后续处理同EA组。

采用神经功能学评分、2，3，5‑氯化三苯基四氮唑（TTC）和TUNEL染色法分别测定神经功能、脑梗死面积和神经元凋亡数量，同时采用Western blot法检测MTA1、裂解的胱天蛋白酶‑3（cleaved caspase‑3）和血管性血友病因子（vWF）蛋白水平；RT‑PCR法测定MTA1 mRNA水平；免疫荧光法标记血管内皮并计算血管密度；比较各组小鼠MCAO术前、术中及术后PaO2、PaCO2、pH、脑血流量及肛温变化情况。

2结果

2.1、4组小鼠神经功能学评分及脑梗死面积比较

与MCAO组比较，EA组和Control siRNA组神经功能学评分升高（P<0.05），脑梗死面积降低（P<0.05）；与Control siRNA组比较，MTA1 siRNA组神经功能评分降低（P<0.05），脑梗死面积增加（P<0.05）。EA组与Control siRNA组神经功能评分及脑梗死面积差异无统计学意义（P>0.05）。见图1。

2.2、4组小鼠凋亡神经元数量及cleaved caspase‑3相对表达量比较

与MCAO组比较，EA组和Control siRNA组神经元凋亡数量减少（P<0.05），cleaved caspase‑3蛋白水平降低（P<0.05）；与Control siRNA组比较，MTA1 siRNA组神经元凋亡数量增加（P<0.05），cleaved caspase‑3蛋白水平增加（P<0.05）；EA组与Control siRNA组神经元凋亡数量及cleaved caspase‑3蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。见图2。

2.3、4组小鼠微血管密度及vWF相对表达量比较

与MCAO组比较，EA组和Control siRNA组微血管密度增加（P<0.05），vWF蛋白水平升高（P<0.05）；与Control siRNA组比较，MTA1 siRNA组微血管密度减小（P<0.05），vWF蛋白水平降低（P<0.05）。EA组与Control siRNA组微血管数量及vWF蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。见图3。

2.4、3组小鼠MAT1蛋白及MAT1 mRNA水平比较

与Sham组比较，MCAO组和EA组MTA1蛋白水平及MTA1 mRNA水平增加（P<0.05）；与MCAO组比较，EA组MTA1蛋白水平及MAT1 mRNA表达水平增加（P<0.05）。见图4。

2.5、5组小鼠MCAO术前、术中及术后PaO2、PaCO2、pH、脑血流量及肛温比较

5组小鼠MCAO术前、术中及术后PaO2、PaCO2、pH及肛温比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与Sham组比较，其余4组小鼠术中脑血流量明显减少（P<0.05）。见表1。

3讨 论

本研究在缺血再灌注损伤后第3天给予EA治疗，连续5 d，发现在脑缺血损伤第7天可以减少脑梗死面积，减少神经元凋亡数量，同时增加vWF标记的阳性微血管密度，上调vWF蛋白水平；说明缺血再灌注损伤亚急性期给予EA治疗可以促进脑缺血再灌注损伤后血管发生，改善脑功能修复。

课题组前期实验证实脑缺血再灌注损伤后MTA1可以抑制一氧化氮合酶发挥神经保护作用。本研究证实在脑缺血再灌注损伤后MTA1表达增高，给予EA治疗可以进一步增加MTA1蛋白水平及其mRNA水平；利用siRNA下调半暗带区MTA1可以部分逆转EA促进血管生成、减少脑梗死面积以及改善神经功能的作用。

综上所述，EA可以通过上调MTA1促进脑缺血再灌注损伤后血管发生，减少脑梗死面积及神经元凋亡数量，从而发挥神经保护作用。

国际麻醉学与复苏杂志

International Journal of Anesthesiology and Resuscitation

主管：中华人民共和国国家卫生健康委员会

主办：中华医学会   徐州医科大学

ISSN：1673-4378

CN: 32-1761/R

打赏