草酸钙一水合物和二水合物定量分析阐明草酸钙肾结石的形成机理

Maruyama M, Sawada KP, Tanaka Y, Okada A, Momma K, Nakamura M, Mori R, Furukawa Y, Sugiura Y, Tajiri R, Taguchi K, Hamamoto S, Ando R, Tsukamoto K, Takano K, Imanishi M, Yoshimura M, Yasui T, Mori Y. Quantitative analysis of calcium oxalate monohydrate and dihydrate for elucidating the formation mechanism of calcium oxalate kidney stones. PLoS One. 2023 Mar 9;18(3):e0282743. doi: 10.1371/journal.pone.0282743. PMID: 36893192; PMCID: PMC9997882.

我们试图以微米为单位鉴定和定量分析草酸钙（CaOx）肾结石，重点是草酸钙一水合物（COM）和二水合物（COD）的定量鉴定。我们进行了傅里叶变换红外（FTIR）光谱，粉末X射线衍射（PXRD）和微焦点X射线计算机断层扫描测量（微焦点X射线CT）并比较了它们的结果。对FTIR光谱的扩展分析集中在780 cm-1峰上，使得对COM/COD比进行可靠的分析成为可能。我们通过对肾结石的薄切片应用显微FTIR，并将微焦点X射线CT系统应用于大块样品，成功地在50μm2区域对COM/COD进行了定量分析。基于PXRD微采样测量、薄片显微FTIR分析以及微焦点X射线CT系统对大量肾结石样本的分析结果大致一致，表明三种方法可以互补使用。这种定量分析方法评估保存的石材表面的详细CaOx成分，并提供有关结石形成过程的信息。该信息阐明了晶相成核的位置和哪个，晶体如何生长，以及从亚稳相到稳定相的过渡如何进行。相变影响肾结石的生长速度和硬度，从而为肾结石的形成过程提供重要线索。

肾结石含有~90%的矿物质化合物和10%的有机化合物。矿物质化合物包括草酸钙（CaOx）和磷酸钙等钙结石和非钙结石（如鸟粪石、尿酸、胱氨酸、蛋白质和药物结石）[1]。大约1.7%–14.8%的人群一生中受肾结石影响一次，5年复发率为40%[2，3]。尽管症状性肾结石患者的治疗已从开放手术截石术发展到微创方法，例如PCNL、输尿管镜碎石术（URSL）和冲击波碎石术（SWL），但这些方法仍然是侵入性的[4]。考虑到肾结石的高发生率和复发率，必须确定肾结石形成的发病机制，并设计新的腔内泌尿系统方法，以降低肾结石疾病的严重发生率[1，5]。

许多研究小组试图鉴定肾结石中的晶相和蛋白质，以阐明该疾病的发病机制。在大多数先前的研究中，检查的肾结石被压碎并粉末化。虽然肾结石中所含的晶相和有机物质可以使用傅里叶变换红外（FTIR）光谱，拉曼光谱，能量色散X射线光谱（SEM-EDX），质谱和其他方法进行鉴定[6，7]，但使用粉末样品进行鉴定存在局限性;例如，石头的空间信息，即石头的历史数据，就丢失了[8]。克服这个问题的有效方法是通过使用肾结石的切片和抛光薄片来识别晶体相和晶体质构分类。

70多年来，使用切片和抛光的肾结石薄切片通过光学显微镜观察肾结石的薄片已有9多年的历史[<>]。然而，在石材成形技术、微小区域的成分分析技术以及有机和无机物质的互补分析技术方面存在问题和局限性;因此，肾结石形成的基础机制尚未得到充分阐明。

例如，表面结构和蛋白质表达的恶化发生在肾结石薄片的成型过程中。最近，肾结石薄片的观察和分析再次成为研究热点，我们小组开发了一种制造薄片的新方法，而不会使表面结构或蛋白质表达严重恶化。通过使用如此薄的切片和先进的多重免疫荧光染色（多IF染色），我们能够确定三种不同蛋白质的微观分布[10]。这些蛋白质在肾结石中的空间分布对于评估蛋白质对肾结石形成的体内影响至关重要。

了解肾结石中矿物质分布的确切细节对于阐明肾结石的发病机制（包括结石形成过程）是必要的。最近引入了高分辨率FTIR，拉曼光谱等来观察薄片。卡斯蒂廖内等.使用共聚焦拉曼显微分光光度计检查了肾结石的化学成像，他们成功地鉴定了肾结石成分，包括CaOx和磷酸钙的晶体多晶型[11]。他们的方法有助于确定宝石内成分的组织，但它有几个局限性;由于肾结石具有强烈的自发荧光背景，很难识别含有高浓度蛋白质的肾结石，并且每种成分的定量仍然是一个挑战[11]。

已经描述了通过FTIR定量CaOx相的方法，并提出了一种可靠的肾结石批量分析方法[12，13]。CaOx有四种伪多晶型：无水草酸钙、草酸钙一水合物（COM）、草酸钙二水合物（COD）和草酸钙三水合物（COT）[14，15]。COM和COD常见于肾结石，偶尔存在COT[16]。在尿液中，COM处于热力学稳定期，COD处于亚稳期（比COM更易溶）[17]。溴化钾（KBr）颗粒技术和衰减全反射（ATR）方法能够测量少量粉末样品，但需要侵入性样品制备;例如，将肾结石的一部分粉末化。布兰科等.报道了使用肾结石薄片通过FTIR光谱法绘制COM、COD和碳酸盐磷灰石（CAP）的图谱[18]。他们专注于COM和COD的特定峰值（1630厘米）−1和 1680 厘米−1峰）用于COM和COD的定量，但峰受到磷酸和有机分子等其他组分的影响，因此基于这两个峰的晶相映射可能会导致不正确的结果。

吉田等.介绍了一种更可靠的COM和COD相识别方法。该方法侧重于 780 cm−1峰，其相对不受其他晶体成分的影响，和吉田等人。计算了COM和COD的红外（IR）吸收[19]。然而，这种分析方法是为粉末样品测量而开发的，尚未扩展到显微镜FTIR测量。

在本研究中，我们试图以微米为单位鉴定和定量分析CaOx肾结石。我们首先针对最常见的草酸钙结石，然后对COM和COD进行了区域定量分析。从名古屋市立大学的患者身上收集肾结石，并制备了几个薄片和抛光的散装样品。采用偏振光显微镜和FTIR进行局部点的晶体结构分析和相鉴定。如前所述对FTIR光谱进行了分析[19]。此外，还对从薄片中收集的少量粉末样品进行了粉末X射线衍射（PXRD）测量。我们比较了PXRD和FTIR结果以建立可靠的测量程序，并且我们还通过使用微焦点X射线CT系统来量化COM和COD来分析肾结石的切片大块样本。这三种分析方法获得的肾结石样品的定量结果一致。开发的CaOx多晶型定量测量程序使我们能够更详细地研究肾结石。阐明体内CaOx的多态性对于理解肾结石形成过程至关重要，未来使用CaOx的定量测量结合人肾结石中多种蛋白质的可视化[10]进行的研究有望进一步阐明肾结石形成过程。

材料和方法

石材收集和石材剖面的准备

CaOx肾结石是从日本名古屋市立大学肾泌尿外科收集的数千份人肾结石样本中选出的。肾结石的样本编号为#1004。样品#1004被部分粉碎并粉末化以进行散装FTIR分析。使用树脂包埋法制备薄片。肾结石完全嵌入CaldoFix环氧树脂中（Struers，Ballerup，丹麦）。我们使用氧化铝（Al2O3） 磨料。在每个研磨和抛光步骤之后，对切片进行清洗以去除磨料。

为微焦点X射线CT系统（inspeXio SMX-2CT Plus，岛津，京都，日本）制备了100毫米厚的样品。其余部分使用Bond-E环氧粘合剂（日本大阪小西公司）固定在载玻片上，抛光表面朝下。然后，我们平行于载玻片进行第二次切割，厚度约为1毫米，并将样品研磨并抛光至20-30μm的厚度。由于需要获得更光滑的表面进行化学分析，例如FTIR反射法，因此我们使用金刚石浆料再次抛光样品。我们以这种方式制备了两片薄薄的肾结石[20]。

偏振光显微镜观察

我们使用偏振光显微镜（Optiphot2-Pol，尼康，东京）观察肾结石薄切片中晶体的大小，着色和消光，在开放尼科尔和交叉尼科尔模式之间切换。

通过傅里叶变换红外显微镜进行测量

我们使用FTIR分光光度计（FT / IR-1004，JASCO，东京）分析了样品#6100薄片。使用反射法进行测量。设置如下：累积数，256;测量范围，600–4000 cm−1， 测量区域， 50-μm2.由于得到的镜面反射光谱受到折射率异常色散的影响，我们在去除H2O 和 CO2在大气中[21]。

使用 FTIR 光谱对 COM 和 COD 进行定量分析

我们已经描述了我们应用FTIR定量分析粉末COM和COD的方法[19]。在本研究中，我们试图将这种方法扩展到肾结石的分析。我们用上面提到的FT / IR-1分光光度计测量了制备的粉末样品（如S6100图所述）。测量使用了透射方法。设置如下：累积数，256;测量范围，600–4000 cm−1， 测量区域， 50-μm2.H的吸收2O 和 CO2从获得的光谱中去除以消除大气影响。测量范围包括 3200–3550 cm 处的 O-H 拉伸粘合−1，C = O拉伸键在1700厘米左右−1，C-O拉伸键约1300厘米。−1，以及 675–900 cm 处的 C-H 弯曲粘结−1 (图1A) [22，23]。

图1（a） 草酸钙 （CaOx） 肾结石的红外光谱。（b） 红外光谱集中在780厘米处的峰值上−1.P点：780厘米处的峰值点−1.点 R'：800 cm 处的测量值−1.段OQ：连接山峰两个山谷底部的线。段 R'R：与段 OQ 的平行线。段 PR 显示 COM 贡献的吸收量，段 RC 表示 COD 贡献的吸收量。

我们专注于 700–900 厘米的范围−1.虽然COM的红外吸收在780厘米处有峰值−1而COD的峰值也为780厘米。−1，COD的红外吸收与COM相比具有更大的半最大宽度。因此，COD的780 cm-1吸收峰与COM的吸收峰在约800 cm处可以完全区分−1.在这里，我们提供了参考[19]的分析方法的摘要。首先，我们计算了780厘米的基值−1峰值（C点）通过绘制一条连接峰（峰（图1B).然后，我们从 800 cm 处的测量值中绘制了一条平行线（段 R'R），带有段 OQ−1（R'点）。线OQ和PC的顶点定义为点R。线PR与线PC的比率对应于COM在780厘米处的吸收贡献−1峰值，线RC与线PC的比率对应于COD在780厘米处的吸收贡献−1峰。

我们将COM与总草酸钙的吸收比定义为M，将COD的吸收比定义为D。我们将草酸钙样品的COM比例描述为m，COD的比例描述为d。m 和 d 的值可以通过以下线性方程近似，其中 a、b、a' 和 b' 取决于所使用的设备：

为了确定FT / IR-6100分光光度计的a，b，a'和b'，我们使用准备好的标准样品绘制了校准曲线。COM和COD以任意摩尔比混合（见S1图）。每个收集的标准样品都测量了六次以上。我们测量了肾结石样品的红外吸收，并使用该校准曲线计算了COM和COD的含量比。

通过粉末X射线衍射测量

我们通过使用PXRD进行局部分析来鉴定肾结石中的晶体成分。经过光学观察，我们刮掉了部分薄片，并通过PXRD测量了样品。刮擦区域（约 50 μm2） 显示在图2A.PXRD数据在室温下在粉末衍射仪（45 kV，200mA，旋转阳极;理学智能实验室，东京）在德拜-谢勒几何中与Cu Kα1辐射由约翰逊锗晶体单色化，并由多层镜聚焦。区域 B 在图2B用莫·1辐射。使用VESTA软件根据参考文献计算了COM和COD的PXRD模式[24，25]。

图2图（a，b）显示了使用偏振显微镜观察的样品#1004的开放尼科尔图像和交叉尼科尔图像。面板（c，d）是通过偏振光显微镜观察到的区域A和B的放大图像（在面板b的虚线正方形内）。

微焦点 X 射线 CT 测量

我们使用微焦点X射线CT系统（inspeXio SMX-100CT Plus;岛津）。测量参数为X射线管：90 kV，44 mA和体素大小：0.005 mm/体素。我们测量了一个2毫米厚的肾结石样本，并获得了一系列X射线断层扫描图像。CaOx肾结石的主要成分，即COM和COD，表现出不同量的X射线吸收[26]。根据这些吸收值的差异进行近似的局部相鉴定。材料的量也会影响X射线的吸收。因此，对于晶体小于光学显微镜可区分的样品（几微米或更小），仅通过微焦点X射线CT系统很难确定COM/COD的比例。但是，如果晶体尺寸大到可以用光学显微镜区分，则COM和COD之间的密度差异可以通过CT值来确定。因此，我们通过将其与偏振光显微镜获得的照片进行比较，仔细评估了该边界条件的充分性。用于微焦点X射线CT系统的样品和用于偏振光显微镜观察的样品是从同一肾结石中处理的。使用获得的X射线断层扫描图像的分析过程如图2所示。

道德声明

本文介绍的研究项目已获得名古屋市立大学研究生院医学研究科机构审查委员会的批准。所有方法均按照相关指南和规定进行。鉴于该研究的回顾性和匿名样本的使用，免除了对患者书面知情同意的要求。

结果

图2提供偏振显微镜观察到的样品#1004薄片的图像;（a） 是开放的尼科尔图像，（b） 是交叉尼科尔图像。构成肾结石的晶体的颜色从浅棕色到棕色不等。颜色分布在石头中同心可见。样品的薄度（约20-30μm）和表面光滑度使得可以通过光学方法清楚地观察肾结石样品，并通过FTIR反射方法进行分析。我们将薄片分为两个区域（区域 A 和 B），如图 2A 和 2B，因为结构和晶体尺寸不同。使用各种方法分别观察和分析这些区域。此过程的详细信息如下。

小组（c）和（d）图2分别显示区域 A 和 B 中晶体的放大交叉尼科尔图像。A区主要由尺寸为100μm的晶体组成，颜色从蓝色到厚度为20-30μm的洋红色不等。随着观察台的旋转，色调逐渐消失，然后在~45°的消光角处完全消失。随着进一步旋转，晶体的亮度从~45°减弱，并在旋转角为~90°时显示出最大强度。光学行为表明，大晶体（100μm尺寸）几乎是单晶。B区由尺寸约为10μm的晶体组成，由于内部干扰，颜色为20-30μm的虹彩。由于虹彩的颜色，确定每个晶体的消光角很困难。

我们使用PXRD对同一样品的薄片进行局部采样，以鉴定小区域的相位。图3显示了区域 A 和 B 的 PXRD 模式。区域 A 的 PXRD 模式 （图3A）显示COD有特定的峰（~14.3°、20.1°和32.2°的峰），没有COM的特异性峰（~14.9°、24.4°和30.1°处的峰）。区域 B 的 PXRD 模式 （图3B） 显示 COM 的特定峰值;未检测到COD的特定峰。这些结果表明，A区主要由COD晶体组成，B区主要由COM晶体组成。

图3PXRD对肾结石样本#1004的测量结果。

（a） 区域A的结果。（b） 区域B（如图2） 结果。上图：本研究获得的COM或COD结果。下图：参考文献[27]中描述的COM或COD结果。

图4A显示了样品 #1004 薄片的开放式尼科尔图像。请注意，薄片是来自同一样本#1004肾结石的第二形状。虽然形状与图2，第二个薄切片也根据偏振光显微镜的观察分为两个区域（A和B）。图像中的FTIR测量点由带有数字（从1到4）的实心方块表示。图4B显示了每个测量点的一组红外光谱。CaOx的峰值，如图1，也在每个光谱中被鉴定出来。从O-H波段（3200-3550厘米）得出的吸收特征−1）和对较低波数的吸收（C = O拉伸键约为1700 cm−1，C-O拉伸键约1300厘米。−1，以及 C-H 在 675–900 cm 处的弯曲粘结−1）表示测量点1和2的主相是COD，测量点3和4的主相是COM [23]。

图4（a） 样本 #1004 第二部分的开放式尼科尔图像。红色标记和数字：FTIR 测量点。（b） 通过FTIR显微镜获得的每个测量点的测量结果。内部图表是780厘米处山峰的放大视图−1在每个图中，图上部的COM与COD的比率显示了通过本研究中得出的分析方法计算的比率。

为了获得有关COM与COD比率的更多详细信息，我们分析了光谱，重点是780 cm附近的峰值。−1（分析1）。我们确认测量点 100 和 10 的 COD 比率为 1±2 wt%。这确定了A区的主要CaOx相是COD。相比之下，测量点4处的COM比为100±10 wt%，表明B区的主要CaOx相是COM。在区域A和B之间的边界，类似于测量点3，在区域A和B中观察到的晶相是混合的。根据我们的计算，COM的估计比率为70±10重量%，COD的估计比率为30±10重量%。为了进行比较，我们使用参考文献[28]（分析2）和参考文献[12]（分析3）中描述的方法分析了FTIR光谱。马丁等.（参考文献[28]）专注于910厘米处的吸收带−1和 780 厘米−1.Mauric-Estepa（参考文献[12]）专注于1324厘米处吸收的峰值偏移−1.使用这三种方法计算的结果总结在表1.

表1通过三种不同分析计算出的COM和COD的比率。

与分析2的结果相比，分析1的结果往往表明COD量较低。分析3的结果表明，在第1至4点中，COM与COD的比例约为一半。PXRD结果表明，区域A（包含测量点1和2）主要由COD组成，而区域B（包含测量点4）主要由COM组成。分析2的结果表明，测量区域1和2含有50%–57%的COM，分析3也显示50%–63%的COM，但这些值与PXRD结果不一致。分析 1 的结果与 PXRD 数据集非常吻合。

图5提供使用微焦点 X 射线 CT 系统获得的样品 #1004 的一系列断层扫描图像。为了获得有关COM与COD比率的更多详细信息，我们分析了11个测量点，如图5.每个测量点为50μm2并显示为红色实心方块。我们的计算表明，A区（10，11）测量点的COD比率为>90%。除第1点和第4点外，B区（6-8和10-90）测量点的COD百分比为<7%（换句话说，COM的比例为>8%）。第7点和第8点的COM和COD百分比在第80点分别为20%和7%，在第88点分别为12%和8%。位于区域A和区域B之间的第5点和第9点的COM和COD比率分别为第83点的17%和5%，第85点分别为15%和9%。第7和第8点也位于A区和B区的边界附近，因此COD率相对较高。

图5微焦点 X 射线 CT 图像。

50个分析点用红色实心方块和数字表示。分析结果（<>-mm中COM和COD的比例2正方形）也显示出来。红色数字：COM比率。蓝色数字：每个区域的 COD 比率。

微焦点X射线CT系统的观察和分析结果与PXRD和显微FTIR获得的结果几乎相同（分析1）。值得注意的是，我们能够在微焦点X射线CT系统的测量中获得一系列相似的CT图像。因此，通过对序列的每个图像执行相同的分析，还可以计算未受损肾结石样品中包含的COM和COD的总比率。据报道，肾结石成分分析的结果因FTIR设备和/或参考光谱而异[29]。因此，在该研究领域，通过不同的方法评估参考光谱的有效性至关重要，这样做有望在未来的临床实践中提高分析的准确性。

讨论

如上所述，我们成功地在50μm中对COM/COD进行了定量分析2使用FTIR显微镜对肾结石的薄片进行治疗，并使用微聚焦X射线CT系统对肾结石的大量样品进行治疗。通过（i）使用微量采样进行PXRD测量，（ii）对薄片进行FTIR显微镜分析，以及（iii）对肾结石大块样本的微焦点X射线CT系统观察，获得了大致一致的结果，表明所有三种方法都可以互补使用。通过考虑样品形状和/或样品处理的适当应用这些方法，可以比以前的研究更准确地研究肾结石。

我们根据上述结果考虑了样品#1004的形成机制。与交叉尼科尔图像显示在图2B，我们观察到区域B有许多空隙。石头的中心部分（区域B）主要由COM组成，外部（区域A）主要由COD组成。一般来说，肾结石的中心部分是最古老的，外部是最新的，类似于树木的年轮。我们最初假设肾结石的B区较旧，而A区较新;但是，必须考虑相变。西瓦古鲁等.据报道，COD在人体内溶解并转化为COM，当发生从COD到COM的相变时，由于水的排出而发生体积变化[30]。如果COM晶体在结石形成早期成核并聚集在一起，由于COM和COD之间的溶解度和过饱和度差异，COD晶体很难在COM晶体表面成核。

在人体内部环境中，COD的溶解度高于COM;这意味着COM的过饱和度始终高于COD [17]。因此，关于肾结石形成的一个更可接受的假设如下。在结石形成的早期阶段，COD晶体成核生长，然后COD从COD结石的中心部分逐渐转变为COM。COD先前的成核是一种自然现象，因为当稳定相和亚稳相的过饱和度都足够高时，由于该相的界面能量较低（奥斯特瓦尔德阶跃规则），亚稳相中的晶体可以优先成核[31]。类似的现象经常发生在其他材料中[32，33]。

从COD到COM的转换主要是解决方案介导的转换[30];需要溶解COD晶体。然而，尿液中COM和COD的过饱和度总是足以使CaOx晶体生长。COD在哪里可以溶解在尿液中？答案是：肾结石的内部。肾结石的表面经常暴露在尿液中，这是一个高度过饱和的环境;因此，没有溶解COD和COM的机会。在COD肾结石的情况下，许多COD晶体聚集在一起，结石在晶体之间有许多间隙。石头的中心变成了一个半封闭的系统。晶体之间的许多间隙使尿液进入结石内部，COD晶体可以使用Ca继续生长2+， C2O42−等溶质。由于晶体之间的狭窄通道，肾结石内部的流动停滞不前;因此，溶质的供应有时会变得不足。如果只有COD晶体，当COD的过饱和度接近平衡点时，晶体生长停止。

然而，在大多数情况下，COM是CaOx在人体内部环境中的稳定相，随着COD晶体的成核和生长而成核。如果COD的过饱和度接近平衡并且COM晶体共存，COM仍然可以生长并且Ca可以2+和 C2O42−被消耗，然后最终溶液将达到COD晶体的不饱和状态。在这样的区域，COD将部分溶解，并且Ca2+和 C2O42−将被释放。释放的溶质将立即被溶解COD附近的COM消耗。通过这个周期，从COD到COM的转换将逐渐进行。溶液介导的从亚稳相到稳定相的转化通常发生在其他材料中[34-36]。

最后，由不规则取向的COM晶体组成的马赛克纹理从肾结石的中心部分出现（图2D).在尿液溶质供应和COM生长溶质消耗平衡的部位，转化停止或显着减慢。在我们的样本中，区域A和B之间的边界可能是这样的区域（图）2A， 2B和和 5）。5).COD和COM的溶质供应在边界之外足够大;因此，我们经常观察到肾结石具有COM核心区和COD边缘区[23]。

肾结石中的CaOx部分溶解在人体内[30]，但溶解过程之后是从COD（CaOx的亚稳相）到COM（CaOx的稳定相）的相转化。通过这种转变，肾结石变得更加耐用，其结构可能会变得紧密和僵硬。这是肾结石发病机制的严重过程，需要进一步的研究来确定肾结石形成机制的所有细节。肾结石的最终结构和/或从结构估计的相变速度表明肾结石生长的历史和身体尿液环境的变化。结合本文描述的方法和我们最近开发的分析技术，即人肾结石中钙结合蛋白的多色成像[10]，可以评估各种肾结石样品，并且获得的有关结石的信息将揭示结石形成过程和与有机分子相互作用的因素。

结论

我们对CaOx肾结石进行了微米级的相鉴定和定量分析，以保持其空间信息。使用肾结石的薄切片进行偏振光显微镜FTIR和PXRD测量，以进行晶体结构分析和局部点的相位鉴定。我们还使用微焦点X射线CT系统对肾结石切片散装样品中的CaOx进行了定量分析。FTIR 光谱的扩展分析，重点关注 780 cm−1峰，使得对COM/COD比率进行可靠的分析成为可能。使用偏振光显微镜，我们绘制了具有可靠COM/COD比的晶相的二维分布图。来自微焦点X射线CT系统的数据也为我们提供了使用肾结石大样本的可靠定量COM/COD比率。

我们的分析方案可最大限度地减少测量含有各种晶相和蛋白质的精密宝石样品时的损坏。由于通过FTIR显微镜，微焦点X射线CT和PXRD获得的定量结果大致一致，因此每种方法都显示出轻微的样品损伤（特别是晶体的相变和有机物质的变性）。结果表明，各分析的定量可靠性是可靠的。这种方法使我们能够更详细地讨论晶体成核和相变发生的位置，这些过程如何推进以及过程中的环境变化。体内CaOx的多态性对于理解肾结石形成过程至关重要。使用CaOx的定量测量方案结合人肾结石中多种蛋白质的可视化[10]进行进一步研究，将阐明肾结石的形成过程。我们相信，这种新方法，检查晶相和量化CaOx，将有助于揭示肾结石形成的时间过程以及加速该过程的环境变化。

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