【收藏】纸片扩散法---真人演示

纸片扩散法是每个医院都会配备的

但是大家很可能量取的方法会有一些小问题

今天我们就学习一些纸片法药敏的量取方法

纸片扩散法

将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

注意事项：

1.培养基：水解酪蛋白（Mueller-Hinton，M-H）琼脂，厚4mm，pH7.2.

2.抗菌药物纸片：各纸片中心距离＞24mm，纸片距平板内缘应＞15mm。

3 菌液浓度：浊度为0.5麦氏比浊标准，相当于1.5X108CFU/ml

4 受检菌液须在15min内接种完毕

步骤

1 水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度4mm，直径90mm的平板；

2 挑取孵育16 ～24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准。

3 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液；

4 然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度；最后沿平板内缘涂抹1周；

5 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm。

6 35℃孵育16～24小时量取抑菌圈直径；

7 根据抑菌环的直径，按照CLSI标准判读，报告敏感、中介、耐药。

操作注意事项：

为什么培养基一定要倒置？

1皿盖向上培养时，培养基蒸发的水分会凝结在皿盖上，并可能掉落到培养基表面，影响培养结果。而培养皿倒置，水分蒸发会在培养基表面均匀凝结，并且蒸发与凝结会形成平衡，不会影响培养结果。这是主要原因。

2其次是倒置不会在拿起时只拿起皿盖。而正置时拿培养皿，可以只把皿盖拿起来，让培养基暴露在空气中。

结果判读：

什么是透射光？什么是反射光？

这种就是反射光（既然是真人，肯定要出镜呀，哈哈哈）

这种就是透射光

总结一下

抑菌圈内菌落怎么办？

是否污染别的菌落

是，重新纯分菌落（抑菌圈内菌落非你要的菌落）

否，可能是出现耐药性菌落

则量取最里面的菌落。可能用这些耐药菌落做时，几乎不会出现抑菌圈。

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