生化反应曲线解析1（终点法）

在日常检验工作中，如果校准失败了、质控失控了、标本测值“你认为不准确”了，我们有很多途径去查找原因，其中查看反应曲线就是方法之一，而要想看懂和真正了解反应曲线，那么一定要了解生化检测所采用的分析方法。

目前，常用的分析方法主要分为两大类：终点法和速率法，其中终点法细分为一点终点法和两点终点法，速率法细分为速率法A和两点速率法，本期推送内容通过实例来讲解终点法（下期内容介绍速率法），进而认识反应曲线。

终点法定义：指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再增加(或降低)，吸光度的增加(或降低)程度与被测定物的浓度成正比，称为终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。

终点法实例1（一点终点法）

如TP（总蛋白）项目，样本与双缩尿试剂发生反应，样本中蛋白的肽键与铜离子形成蓝紫色螯合物，通过测定蓝紫色吸光度来求得样品中总蛋白的浓度。

如下图为日立7180全自动生化分析仪反应曲线，其中横坐标表示时间（以测光点表示，10min共记录34次吸光度），纵坐标为吸光度（蓝紫色吸光度），反应模式是先加入样品，再加入R1试剂，开始测光（约每18S记录一次吸光度），由于样本中的总蛋白和双缩尿试剂反应生成蓝紫色螯合物，吸光度上升，通过测定终点的吸光度（如反应曲线紫色区域显示）计算样本中总蛋白的浓度。

图为日立7180全自动生化分析仪图片

采用一点终点法项目（一般单试剂）如：

ALB、TP、CO2（单试剂）、GLU（单）等。

终点法实例2（两点终点法，一般双试剂）

如胆固醇项目，胆固醇试剂中的胆固醇氧化酶特异性分解底物胆固醇，产生过氧化氢，产生的过氧化氢在过氧化物酶的作用下与色原发生氧化反应，生成有色物质（该过程为传说中的Trinder反应），有色物质产生的吸光度大小与样本中胆固醇浓度成正比。

如下图：先加入样本，再加入R1试剂，37度温浴5min（该过程除内源性干扰，如抗坏血酸），取吸光度A1（如下图15和16点吸光度），加入R2试剂启动反应，胆固醇最终转化为有色物质，吸光度上升，取吸光度A2（如下图33和34点吸光度），通过A2-A1的吸光度差用于计算血清中胆固醇的浓度。

图为日立7180全自动生化分析仪图片

采用两点终点法项目（一般双试剂）如：

GLU、HbA1c、TC、TG、CRE、UA、HDL、LDL、比浊法项目（CYSC、B2MG、IgA、IgG等）等。

检验之声原创文章，转载注明来源。  

编辑：青翠欲滴，校审：晨晨

打赏