快报 | 分枝杆菌RT-PCR检测多种标本快速诊断淋巴结结核的的临床应用：一项诊断准确性研究

作者：钟方明，赵戊辰，王玲华，沈怡

第一作者及单位：钟方明，浙江大学医学院附属杭州市胸科医院，浙江省结核病诊断与治疗中心

通信作者及单位：沈怡，浙江大学医学院附属杭州市胸科医院

Clinical application of Mycobacterium RT-PCR assay using various specimens for the rapid detection of lymph node tuberculosis: A diagnostic accuracy study

Zhong F, Zhao W, Wang L, Shen Y. Clinical application of Mycobacterium RT-PCR assay using various specimens for the rapid detection of lymph node tuberculosis: A diagnostic accuracy study.

Medicine(Baltimore), 2023, 102(8):e33065.

doi: 10.1097/MD.0000000000033065.

PMID: 36827006.

研究背景

结核分枝杆菌（MTB）感染引起人类结核病，这是一个严重的公共健康威胁。结核病在全球传染病死亡原因中排名前十。肺部是MTB感染最常见部位，称为肺结核（PTB）。肺部以外器官的MTB感染被称为肺外结核（EPTB）。淋巴结结核（LNTB）是EPTB的最常见类型之一。LNTB可发生在身体各部位的淋巴结，常见于周围淋巴结，如颈部淋巴结、腋窝淋巴结和腹股沟淋巴结，其中颈部LNTB最为常见。LNTB的早期诊断是早期干预的关键。LNTB的延迟诊断可导致局部脓肿形成，脓肿破裂后可形成窦道，严重影响患者的外观和生活质量。LNTB的早期诊断仍然具有挑战性，淋巴结标本的获取通常需要进行侵入性操作。淋巴结标本的抗酸杆菌（AFB）涂片和分枝杆菌培养是最常用的微生物学检查。然而，由于AFB涂片的低敏感性和分枝杆菌培养需要≥2周时间等的限制，二者均不能实现早期和快速诊断。

核酸扩增试验（NAAT）的发展使包括结核病在内的传染病的早期和快速诊断成为可能。在众多用于诊断结核病的NAAT中，第一代GeneXpert MTB/RIF（简称“Xpert”）检测是一个明星产品，已被广泛用于结核病诊断。无论是用于PTB还是EPTB，Xpert都大大改善了结核病的诊断性能，Xpert对LNTB的诊断性能也令人满意。因此，世界卫生组织推荐Xpert可作为LNTB的诊断工具。

博奥分枝杆菌实时聚合酶链反应（RT-PCR）测定（简称“博奥检测”）是一种快速诊断工具，可在一次测试中同时检测MTB和非结核分枝杆菌（NTM）感染。这种检测方法对PTB和EPTB的诊断准确率与Xpert一样好。然而，博奥检测在LNTB中的数据是有限的，这种检测对LNTB的诊断价值还有待证实。本研究的目的是评估博奥检测对LNTB的诊断准确性，并进一步比较不同类型淋巴结标本对该方法检测能力的影响，从而为临床医生提供与该方法检测价值有关的信息资源。

研究设计

这是一项在浙江大学医学院附属杭州胸科医院结核病诊治中心进行的回顾性研究。符合纳入标准的疑似外周LNTB患者被纳入研究人群。有临床症状的患者，如浅表淋巴结增大、发热、与结核病有关的免疫测定阳性（如γ-干扰素释放试验和结核菌素纯化蛋白衍生物试验）、无明确肿瘤的病理变化，或合并多个部位的结核病，都被认为是疑似LNTB。收集淋巴结相关标本，如脓液、粗针活检（CNB）标本、细针抽吸（FNA）标本或组织标本，并对同一标本进行分枝杆菌培养和博奥检测评估。未接受淋巴结相关标本评估、失访和（或）博奥检测结果不确定的患者被排除在外。相关的淋巴结标本是通过脓肿切开、淋巴结穿刺或淋巴结活检获得。所有患者均进行了人类免疫缺陷病毒（HIV）检测。本研究将最终的临床诊断作为诊断金标准，回顾性地对纳入的疑似LNTB患者医疗数据进行分析。

诊断标本的收集和处理

收集淋巴结脓液、CNB标本、FNA标本和组织标本用于相关检测。当淋巴结脓肿形成时，需通过脓肿切口或穿刺获得脓液标本。当淋巴结没有脓肿时，可根据患者意愿进行淋巴结穿刺获得FNA和CNB标本，或通过淋巴结活检获得组织标本。将获得的淋巴结标本（≥3 ml的脓液、≥3个穿刺的淋巴结FNA或CNB标本，以及≥1 cm3的组织标本）等分为3组，用于博奥检测和分枝杆菌培养。脓液直接分成3等份；FNA和CNB标本加入2 ml生理盐水后分成3等份；组织标本通过研磨分成3等份。

研究结果

一、患者及标本一般情况

纳入研究的364例患者中，平均年龄为（36.7±17.3）岁，男性155例（42.6%），1例HIV检测阳性。所有周边淋巴结增大的患者均被纳入本研究，病变淋巴结主要包括颈部淋巴结、腋窝淋巴结和腹股沟淋巴结，其标本分别为339、19、6份；其中，脓液、CNB、FNA和组织标本分别有120、151、22和71份。131例患者合并PTB，12例患者合并结核性胸膜炎。本研究只有39份标本进行了AFB涂片检测，其中7份为阳性，32份为阴性。

最终，364份标本中，LNTB 320份，非LNTB 44份，分枝杆菌培养和博奥检测的阳性数分别为80和238份，且博奥检测和分枝杆菌培养有68份均为阳性、12份仅分枝杆菌培养阳性、170份仅博奥检测阳性。

在320份LNTB组中，分枝杆菌培养和博奥检测呈阳性的标本数分别为80和238份； 而在44份非LNTB组中，这些检测的结果均为阴性。 44例非LNTB患者最终被诊断为15例淋巴瘤、14例转移性肿瘤和15例淋巴结炎，所有淋巴结标本的MTB相关检测结果均为阴性。 没有患者被诊断为NTM感染。

在120份脓液标本中，117份为LNTB，3份为非LNTB； 在LNTB标本中，脓液标本分枝杆菌培养和博奥检测阳性的数量分别为32和109份。 在151份CNB标本中，129份为LNTB，22份为非LNTB； 分枝杆菌培养和博奥检测呈阳性的标本分别为38和85份。 在22份FNA标本中，15份为LNTB，7份为非LNTB； 分枝杆菌培养和博奥检测结果呈阳性的数量分别为5和9份。 在71份组织标本中，LNTB和非LNTB分别为59和12份； 在组织标本的LNTB组中，分枝杆菌培养和博奥检测报告的阳性标本数分别为5和35份。

二、博奥检测、Xpert和平行检测的诊断准确性

以最终临床诊断为参照标准，博奥检测诊断LNTB的总体敏感度、特异度、阳性预测值（PPV）、阳性预测值（NPV）和曲线下面积（AUC）分别为74.4%（69.2%~79.1%）、100.0%（92.0%~100.0%）、100.0%（98.5%~100.0%）、34.9%（26.7%~43.9%）和0.87（0.83~0.90）。

对于脓液标本，博奥检测的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为93.2%（87.0%~97.0%）、100.0%（29.2%~100.0%）、100.0%（96.7%~100.0%）、27.3%（6.0%~61.0%）和0.97（0.92~0.99）。

对于CNB标本，博奥检测的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为65.9%（57.0%~74.0%）、100.0%（84.6%~100.0%）、100.0%（95.8%~100.0%）、33.3%（22.2%~46.0%）和0.83（0.76~0.89）。

对于FNA标本，博奥测定的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为60.0%（32.3%~83.7%）、100.0%（59.0%~100.0%）、100.0%（66.4%~100.0%）、53.9%（25.1%~80.8%）和0.80（0.58~0.94）。

对于组织标本，博奥检测的敏感度、特异度、PPV、NPV和AUC分别为59.3%（45.8%~71.9%）、100.0%（73.5%~100.0%）、100.0%（90.0%~100.0%）、33.3%（18.6%~51.0%）和0.80（0.68~0.88）。具体见表2。

三、博奥检测对不同类型标本诊断准确性的比较

我们比较了博奥检测对不同类型标本诊断LNTB的诊断准确性的差异。与CNB、FNA和组织标本相比，博奥检测对脓液标本的诊断准确性最高（P<0.05）；但博奥检测对CNB、FNA和组织标本的诊断准确性均相似，差异均无统计学意义（P值均>0.05）。

研究结论

博奥检测对LNTB的快速诊断具有良好的准确性。与CNB、FNA和组织标本相比，脓液标本更适合进行该检测，诊断效果最好。结果表明，博奥检测对LNTB的诊断是有效的，这为临床医生选择结核病的诊断工具提供了宝贵的资源。

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供稿：钟方明

编辑：孟莉

审校：范永德

发布时间：2023-03-13

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