NGS技术发现老年弥漫性大B细胞淋巴瘤新型预后标志物

弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）是最常见的侵袭性淋巴瘤，可发生于任何年龄，但在老年人中更常见，诊断时中位年龄为66岁，1/3的患者诊断时年龄大于75岁。由于老年DLBCL患者可能对常规剂量免疫化疗不耐受，临床治疗策略常常有所调整。目前关于老年患者的分子图谱及预后基因特征的相关研究还很有限。

近日，新疆维吾尔自治区人民医院李燕教授团队对148例初治DLBCL患者（80例老年+68例青年）肿瘤组织样本进行检测，并结合临床和病理报告进行回顾性分析，全面比较了老年和青年DLBCL人群的基因和通路水平突变差异，并首次揭示FAT4基因是一个有利的预后生物标志物。相关研究成果近日发表于Clinical and Experimental Medicine(IF=5.057)[1]。

研究亮点

1、首次揭示FAT4基因突变在DLBCL中是一个有利的预后生物标志物，尤其对于老年患者。

2、基于NGS检测和临床信息，综合对比分析了老年和青年DLBCL患者的临床和分子特征差异。

研究内容

148例初治DLBCL患者均采用了标准/减低剂量R-CHOP方案或R-COP方案进行一线治疗，其中23例进行了自体干细胞移植。80例（诊断时年龄超过60岁）为老年组，其余68例为青年组。老年组IPI（≥3）和ECOG评分（≥2）显著更高，MYC/BCL2双表达患者也较多，而在血清LDH水平、Ann Arbor分期、原发肿瘤部位、结外肿瘤数量、COO分型等方面两组间无明显差异。本研究采用血默胜™大Panel对所有患者石蜡包埋切片（FFPE）样本进行NGS测序，并将整个队列中突变频率超过10%的基因定义为“高频突变”。

研究结果

老年和青年DLBCL患者的分子特征

148例初治DLBCL最常见的突变基因为PIM1（43.9%）和KMT2D（31.8%），其次是MYD88（29.7%）和CD79B（27.0%）。对比老年和青年组的突变差异，其中ATM（p=0.008）、DNMT3A（p=0.016）突变仅在老年组中检出，而B2M（p=0.020)、CD70（p=0.035）、NFKBIA（p=0.024）和STAT6（p=0.024）突变则在青年组中显著更常见（图1A）。进一步通路分析发现，免疫逃逸通路（包含B2M和CD70）在青年组中显著富集（p=0.032），而老年组中表观遗传调控相关基因突变比例显著更高（p=0.03，图1B）。

图1. 老年和青年DLBCL之间基因水平和通路水平比较

FAT4突变是DLBCL的预后良好因素

为了探索DLBCL中潜在的预后生物标志物，研究者首先基于基线临床特征和12个最常见突变基因（突变频率≥20%）对无进展生存时间（PFS）进行单因素分析，结果如表1所示，COO分型、Ann Arbor分期、IPI评分、TP53和FAT4突变（校正后p<0.1）与PFS显著相关。由于Ann Arbor分期是IPI评分的因素之一，故在多因素分析时将其排除，而COO分型、IPI评分、TP53和FAT4突变仍然是预测PFS的独立预后因素，且FAT4突变患者PFS更长。

表1. PFS单因素和多因素分析结果

TP53突变已被多次证明是预后不良的指标，并与疾病进展相关，而血液肿瘤中FAT4突变的预后作用从未被报道，因此研究者深入分析本队列中FAT4的突变情况。FAT4是FAT家族的一员，该家族编码具有Cadherin重复序列、EGF样结构域和Laminin G样结构域的大型跨膜蛋白。本队列中大多数FAT4突变是跨越整个蛋白结构的错义突变，除一个复发突变P136Q外没有热点（图2A）。基因互作分析发现，除了与CREBBP有互斥趋势（p<0.1）外，FAT4突变与其他基因突变没有明显的互斥或共突变。然而，TP53突变与PIM1、CD79B、BTG2和CDKN2A突变互斥，而PIM1常与MYD88、CD79B、BTG1/2和ETV6共突变（p<0.05）（图2B）。

图2. FAT4突变位点和基因互作分析

FAT4突变是PFS的有利因素，那是否会进一步影响到OS呢？多因素分析显示，PFS中的4个预后因素在预测OS时保持独立的预后价值（图3A）。接下来，研究者分别对这4个因素在老年和青年亚组中的预后作用进行了探究，由于老年组中IPI评分<3的患者未发生死亡事件，因此Cox回归模型不适用于OS分析，但IPI评分≥3的患者OS显著较差（图3B）。在老年组中，多因素分析显示IPI评分、TP53和FAT4突变仍是PFS的独立预后因素，而FAT4突变在青年组中不再与更好的PFS或OS相关（图3A），这表明老年和青年DLBCL患者之间存在遗传特征的差异。

此外，携带FAT4突变的TP53野生型老年患者（TP53wt/FAT4mut）的生存最好，OS显著长于TP53/FAT4双野生型或双突变的老年患者（图3C）。以上结果共同表明，FAT4基因是老年DLBCL患者新的预后因素，但仍无法逆转TP53突变的不良预后影响。

图3. COO分期、IPI评分、TP53突变、FAT4突变和预后的相关性

结语

NGS技术加速了对DLBCL的分子特征研究，能够辅助发现新的预后生物标志物，指导预后分层和疾病监测，但尚未在传统临床环境中得到充分应用。本研究基于真实世界DLBCL治疗随访数据，首次证明了老年DLBCL患者中FAT4突变提示预后更佳，携带FAT4突变且TP53野生型老年患者(TP53wt/FAT4mut)生存最好。研究成果促进了对DLBCL复杂分子机制的理解，并为精准预后判断及临床治疗提供了新的思路。

参考文献

[1] Lv, Liyang et al. “Identification of FAT4 as a positive prognostic biomarker in DLBCL by comprehensive genomic analysis.” Clinical and experimental medicine, 10.1007/s10238-023-01018-z. 22 Feb. 2023, doi:10.1007/s10238-023-01018-z

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