HMGB1促进RSV感染的THP‑1单核细胞中NLRP3炎症小体的活化

钮明杨1,2 辛鑫2 朱俊岭2 刘开勋2 许铁1 燕宪亮1,3　

1徐州医科大学附属医院急诊医学科，徐州 221002；2徐州医科大学附属徐州儿童医院儿内科，徐州 221002；3睢宁县人民医院急诊医学科，徐州 221200

国际麻醉学与复苏杂志,2023,43(02):118-121.

DOI：10.3760/cma.j.cn321761-20220906-00725

基金项目 

国家重点研发计划（2020YFC1512704）；江苏高校“青蓝工程”优秀教学团队；徐州市国家临床重点专科培育项目（2018ZK004）；江苏卫生健康委“六个一”工程科研项目（LGY2019085）；徐医附院优秀中青年人才项目（2019128009）；徐州市科技计划项目（重点研发计划）（KC19170）

ORIGINAL ARTICLES

【论著】

本研究采用体外细胞培养方法观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对呼吸道合胞病毒（RSV）感染的THP‑1单核细胞中NLRP3炎症小体是否有活化作用，为了解HMGB1是否通过单核细胞NLRP3炎症小体活化促进RSV支气管炎的发生、发展提供理论基础。   

1 材料与方法      

常规培养THP⁃1细胞用于RSV病毒的感染实验，将培养的THP‑1单核细胞分为4组：未感染RSV组、RSV感染组、RSV感染+rHMGB1组、RSV感染+甘草素组，RSV感染6 h后继续培养48 h，提取4组细胞总蛋白，Western blot法检测4组THP‑1单核细胞的NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶‑1（caspase‑1）、IL‑1β水平。

2 结果     

RSV感染组NLRP3、ASC、caspase‑1、IL‑1β水平高于未感染RSV组（P<0.05）；RSV感染+rHMGB1组THP‑1单核细胞NLRP3、ASC、caspase‑1、IL‑1β水平高于RSV感染组（P<0.05）；RSV感染+甘草素组NLRP3、AS、caspase‑1、IL‑1β水平低于RSV感染+rHMGB1组（P<0.05）。见图1。

3 讨论

本团队前期的研究证实HMGB1在RSV支气管炎患儿血清中高表达，这与RSV支气管炎动物模型研究的结果一致。进一步研究发现，HMGB1可以活化RSV感染的THP‑1单核细胞NLRP3炎症小体，而NLRP3炎症小体的活化可增加下游蛋白表达并进一步促进炎症因子IL‑1β的升高。

本研究选用的THP‑1单核细胞，于1980年建立，类似人原代单核细胞的形态和功能特征，但更易在实验室中培养和扩增。在众多炎症体中，NLRP3炎症小体最广为熟知，其包含NLRP3、ASC、caspase‑1。NLRP3炎症小体的组装能够导致效应蛋白caspase‑1活化，进而促进IL‑1β成熟和分泌并启动炎症过程。

为了验证HMGB1对NLRP3炎症小体表达的影响，我们分别在RSV感染的THP‑1单核细胞中加入外源性rHMGB1和HMGB1抑制剂甘草素，共培养后检测NLRP3炎症小体表达情况，结果显示，rHMGB1可显著增加NLRP3、ASC、caspase‑1的蛋白水平；加入甘草素，NLRP3、ASC、caspase‑1蛋白水平增加的趋势被逆转。进一步研究发现，NLRP3炎症小体的活化促进了IL‑1β的升高。病原体感染引起的炎症反应能够促进急性或慢性的疾病发生，IL‑1β作为一种炎症因子，在支气管炎的发生过程中显著升高并参与其中早已被证实。

虽然我们观察到RSV感染THP1细胞后导致NLRP3炎症小体的活化，外源性加入rHMGB1后能进一步活化NLRP3炎症小体，活化后的NLRP3炎症小体促进了IL‑1β的升高从而促进支气管炎的发生，但是NLRP3炎症小体的下游信号分子是如何激活炎症因子（如IL‑1β）表达升高的，还需要进一步研究。

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