mAbs发表双抗、三抗新结构——TrYbe，无Fc段延长半衰

前言

目前，正在开发中的双/多特异性抗体形式已有100多种。在临床开发中的双特异性抗体中，Fc-null IgG或无Fc形式占大多数。这是因为业界越来越多地意识到，双抗中Fc效应功能会导致临床开发的复杂性和潜在安全性风险。

首个上市的双特异性抗体之一Blinatumomab（Blincyto®）就是一种无Fc的BiTE，靶向CD3和CD19，用于治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）。

近日，UBC Biopharma UK报告了一种单价、多特异性、无Fc片段的抗体形式TrYbe®，相关成果发表于mAbs期刊。

TrYbe®分子能够单价结合至少两种不同的靶标，并且在无Fc效应功能的情况下具有较长的体内半衰期。

相比于多价抗体形式，单价的优势在于不会形成大体积且不溶的免疫复合物，不易导致细胞因子释放和增强的抗药物免疫原性等安全性问题。

01TrYbe的结构

TrYbe®分子量~ 100 kDa，含有三个靶标结合域，一个Fab，以及两个二硫键稳定scFv片段（ds-scFvs）；后者通过长的柔性连接子S(G4S)2，即serine (glycine4-serine)2 连接到Fab轻链和重链的C末端。

图. TrYbe®及其潜在应用 [参考来源1]

为了延长体内半衰期，TrYbe®的一个靶标结合结构域被设计为人血清白蛋白 （HSA） 特异性，HSA延长半衰期的主要机制和FcRn介导的HSA回收有关。

TrYbe®分子另外一个尤为关键的特征是在scFv VH44-VL100引入的二硫键，这对于其结构稳定性尤为重要。这与其它Fab-scFvs抗体形式，包括双价Fab-(scFv)2“Tribody”有所不同。

02TrYbe的功能

TrYbe®具有广泛的功能，可以靶向可溶性靶标和膜靶标。具体来说，该分子形式通过不同的设计，具有发挥不同作用机制的潜力：

1）免疫调节：TrYbes®同时与细胞上的两个不同受体共同结合，发起受体激活或受体抑制的信号。另一种方法是，TrYbe®通过受体信号传导介导新功能；或与同一受体上的两个非重叠表位结合，通过双互补位结合产生作用。

2）共受体聚集：TrYbe®与细胞上两个远端分离的受体结合。

3）配体受体共定位：TrYbe®与可溶性配体和细胞表面受体的结合。

4）免疫细胞的募集：TrYbe®通过一个ds-scFv与靶细胞表面受体结合，另一个ds-scFv与效应细胞上的受体结合。

5）背负式运输（FcRn回收）：TrYbe®与FcRn可回收配体结合，通过内吞作用进入细胞形成胞内体，再移行至细胞顶端，通过胞吐方式释放;

6）与5）类似，TrYbe®在细胞表面上与转铁蛋白TfR受体接合，实现血脑屏障BBB跨膜转运；

7）双重阻断：TrYbe®阻断可溶性配体与细胞的结合，或阻断配体与两个受体结合。

研究中展示了六种不同TrYbe®分子的数据，这些分子被开发为靶向至少八种不同的抗原，包括HSA。这些TrYbes®已被证明与其靶标具有良好的结合亲和力、有效的生物学功能，并且它们都具有良好的成药特性，适用于临床生产和开发。

例如，相比于靶向TNF-α和IL-17A的二价双特异性IgG形式——DVD-IgG抗体ABT-122和FynomAb抗体COVA322，靶向两种细胞因子TNF、IL-17A和HSA的单价、三特异性TrYbe®A分子在体外形成的抗体-抗原复合物较小。

图. （a）TrYbe® A;（b）DVD-IgG;（c）FynomAb。结合特异性标注为：抗IL-17A（蓝色），抗TNF（紫色），抗HSA（绿色） [参考来源1]

图. 抗体-抗原复合物形成（a）TrYbe® A（绿色）、（b）DVD-IgG（蓝色）和（c）FynomAb（紫色）[参考来源1]

TrYbe® E和F在食蟹猴显示出良好的耐受性、生物利用度和PK特性。推测在人体血清中的半衰期为15-18天。并且，两个分子已成功以临床相关规模（2000 L）制造和纯化。

图. TrYbe® E和F静脉给药或皮下给药在食蟹猴中的PK [参考来源1]

SUMMARY

小结

双/多特异性抗体通过实现协同作用来增强患者获益。然而，其作为治疗药物的开发仍存在挑战。

TrYbe®单价、多特异性、无Fc的分子形式，有潜力克服了双/多特异性抗体的许多挑战，包括半衰期、稳定性、效力和安全性等。此外，TrYbes®易于生产和纯化，并具有良好的药物性质，突出了TrYbe®作为广泛疾病治疗药物的潜力。

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参考资料：

1. TRYBE®: an Fc-free antibody format with three monovalent targeting arms engineered for long in vivo half-life. https://doi.org/10.1080/19420862.2022.2160229

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