科研丨西农: 血清代谢组学结合16S rRNA测序揭示枸杞多糖对宿主代谢和肠道菌群的影响(国人佳作)

编译：微科盟皮皮，编辑：微科盟居居、江舜尧。

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导读   肠道微生物和源自多糖的微生物代谢物介导与多糖消耗相关的有益作用。枸杞多糖(LBP)是枸杞果实中的主要生物活性成分，具有显著的保健作用。本研究旨在调查补充LBP是否影响健康小鼠的宿主代谢反应和肠道微生物群，并确定与观察到的有益效果相关的细菌类群。结果表明，给予小鼠200 mg/kg BW LBP可降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和肝脏TG水平。补充LBP可增强肝脏的抗氧化能力，促进乳杆菌和乳球菌的生长，并刺激短链脂肪酸(SCFAs)的产生。血清代谢组学分析显示脂肪酸降解途径丰富，RT-PCR进一步证实LBP上调了肝脏脂肪酸氧化相关基因的表达。Spearman相关分析表明，部分血清和肝脏脂质谱以及肝脏SOD活性与乳杆菌、乳球菌、瘤胃球菌、Allobaculum和AF12相关。综上，这些结果为LBP摄入对高脂血症和非酒精性脂肪肝病的潜在预防作用提供了新的证据。  

图文摘要      

论文ID

原名：Serum metabolomics combined with 16S rRNA sequencing to reveal the effects of Lycium barbarum polysaccharide on host metabolism and gut microbiota

译名：血清代谢组学结合16S rRNA测序揭示枸杞多糖对宿主代谢和肠道菌群的影响

期刊：Food Research International

IF：7.425

发表时间：2023.2.3

通讯作者：高振鹏

通讯作者单位：西北农林科技大学食品科学与工程学院

DOI号：10.1016/j.foodres.2023.112563

实验设计

结果

1 枸杞多糖对体重、血脂及肝脏TG的影响

如图1A所示，在灌胃4周期间，所有处理均增加了小鼠的体重。饲喂试验后，NC组和LBP补充组之间的体重无显著差异(P>0.05)。有趣的是，与NC组相比，高剂量LBP给药后，血清TC和TG水平显著降低(P<0.05)(图1B-C)。还检测到LDL-C降低，但未达到显著水平(图1E)。LBP对血清TC和LDL-C水平的影响与剂量相关，因为LBP-H组的TC和LDL-C水平显著低于LBP-L组(P<0.05)。此外，三组之间的HDL-C水平没有差异(图1D)。TG在肝脏中合成，肝脏脂质代谢异常导致其积聚。如图2H所示，与NC组相比，给药LBP的小鼠肝脏TG降低。这些结果表明LBP在预防高脂血症和脂肪肝方面有效。

图1 枸杞多糖(LBP)干预对小鼠体重、血脂和血清细胞因子的影响。(A)小鼠体重(n=12)；(B-E)血清中TG、TC、HDL-C和LDL-C含量(n=4)；(F-I)血清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10水平(n=4)。*P<0.05，**P<0.01(T检验)。

图2 枸杞多糖(LBP)干预对肝功能(A-B)、肝氧化应激(C-G)和肝脏TG含量(H)的影响(n=4)。*P<0.05，**P<0.01(T检验)。

2 枸杞多糖对血清细胞因子的影响

细胞因子通过介导细胞间的相互作用发挥多种生物学功能，如调节细胞生长和分化、维持有效的免疫反应、参与炎症反应等。血清细胞因子含量如图1F-I所示。与NC组相比，LBP给药对血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平无显著影响(P>0.05)。IL-6在低剂量和高剂量LBP组中表现出接近统计学意义的改善。NC组和LBP组血清IL-10水平存在显著差异，且LBP干预组IL-10水平更高。

3 枸杞多糖对肝脏抗氧化能力和肝功能的影响

肝脏中过多的ROS产生和低抗氧化机制容易导致氧化应激、细胞膜脂质过氧化、细胞器功能异常和炎症反应。肝脏氧化应激不仅是肝损伤的病理生理基础，而且参与其他疾病的发病机制。为了研究不同剂量LBP对小鼠肝脏抗氧化能力的影响，本研究测定了肝脏中的T-AOC、SOD、MDA、CAT和GSH-PX水平(图2)。结果表明，与NC组相比，200 mg/kg BW LBP组小鼠的MDA水平显著降低。与NC组相比，高剂量LBP治疗组肝脏的T-AOC和SOD水平显著升高(P<0.05)，但组间CAT和GSH-PX水平无显著差异。与NC组相比，低剂量LBP对肝脏抗氧化能力没有明显改善。肝脏中的ALT和TBA通常用于判断肝脏损伤或肝脏疾病的严重程度。如图2A和2B所示，ALT和TBA在各组之间没有表现出显著差异，这表明肝脏代谢功能相对良好，属于健康状态。 4 组织病理学分析

接下来，我们试图确定LBP治疗对肝脏和结肠组织学的影响。如图3所示，处理对肝脏的微观结构没有明显影响。在所有组中，肝细胞均呈放射状围绕中央静脉排列，肝细胞之间的边界明显。肝细胞的细胞质中没有脂滴。结肠HE染色结果显示，NC组和LBP干预组结肠各层组织结构排列整齐，粘膜上皮完整，无明显炎性细胞浸润。

图3 枸杞多糖(LBP)干预对肝脏和结肠组织结构的影响(比例尺分别为50 μm和100 μm)(n=5)。

5 枸杞多糖 对肠道菌群组成和功能的影响

大量证据表明，在人类胃肠道中定植的各种微生物群落对健康有着深远的影响。因此，我们测试了LBP干预对粪便微生物群组成的影响。通过16S rRNA基因测序对粪便样品中的细菌群落进行表征。通过QIME2(版本v.2019.4)和R软件包计算α多样性指数。选择细菌多样性(Shannon和Simpson)、丰富度(Chao1和观察到的物种)、均匀度(Pielou)、测序深度(Good’s Coverage)和Faith’s PD指标进行评估。如图4A所示，各组α-多样性指数均无明显变化，说明LBP干预可能不会影响小鼠肠道菌群的多样性和丰富度。此外，我们还通过β-多样性测试了LBP干预是否会引起整体微生物群落结构的变化。UPGMA聚类分析显示，有三个主要的样本聚类，LBP-L组和LBP-H组小鼠大部分位于第一个聚类(图4B)。还可以观察到，聚集在第一组的大多数小鼠共享一个共同的高丰度细菌属。因此，与NC组相比，添加LBP导致β-多样性发生变化。 与β-多样性的变化一致，LBP改变了不同分类水平的细菌相对丰度。在门水平上，各组的优势菌均为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和Deferribacteres，占比超过96%(图4C)。与NC组相比，LBP干预后厚壁菌门和变形菌门数量增加，拟杆菌门和放线菌门数量减少。在科水平上，高剂量LBP显著降低了S24-7、Lachnospiraceae和Ruminococcaceae的丰度(图4D)。相比之下，LBP组的乳杆菌科和肠杆菌科的相对丰度高于NC组，其中乳杆菌科的相对丰度是NC组的2.35倍。NC组、LBP-L组和LBP-H组乳杆菌科的相对丰度分别为22.54%、31.8%和52.97%。在属水平上，比较各组前20个细菌属(图4E)，将相对丰度低于0.1%的细菌属归为其他属。我们发现，高剂量LBP上调了乳杆菌属(Lactobacillus)(22.49%至52.90%)和乳球菌属(Lactococcus)(0.64% vs 6.01%)的丰度，并降低了瘤胃球菌属(Ruminococcus)和Mucispirillum的相对丰度。各组间Helicobacter、Oscillospira、拟杆菌属、Clostridiaceae_Clostridium、Pseudomonadaceae_Pseudomonas和Odoribacter无明显变化。为了可视化三组微生物群落的分布，使用热图显示了20个属的相对丰度(图4F)。一些细菌属在组间相对丰度上表现出明显差异。例如，LBP-H组中富集了不动杆菌(Acinetobacter)、乳球菌(Lactococcus)、Adlercreutzia、乳杆菌(Lactobacillus)、Odoribacter和Candidatus_Arthromitus。然而，低剂量LBP增加了普雷沃氏菌(Prevotella)、Oscillospira、Rikenella、梭菌(Clostridium)和Helicobacter的丰度。这些结果表明，LBP诱导的肠道菌群变化可能与剂量相关。简而言之，高剂量LBP诱导了潜在有益的肠道菌群反应，并提高了益生菌的相对丰度。

PICRUST分析用于预测粪便样本的宏基因组功能特征。从肠道菌群中鉴定出的代谢途径如图4G所示。我们观察到微生物功能基因主要参与代谢或遗传信息处理相关途径。代谢相关途径包括氨基酸代谢、碳水化合物代谢、能量代谢、聚糖生物合成与代谢、脂质代谢、辅因子与维生素代谢、其他氨基酸代谢、萜类和聚酮化合物代谢、核苷酸代谢、外源物质生物降解与代谢。随后，我们使用R软件(metagenomeSeq包)识别组间差异显著的代谢途径，发现与NC组和LBP-L组相比，LBP-H组花生四烯酸代谢(ko00590)富集(P<0.01)(图4H-I)。

图4 LBP干预对粪便微生物群落结构和功能的影响(n=6)。(A) α-多样性，包括细菌多样性指数(Shannon和Simpson)、丰富度指数(Chao1和观察到的物种)、均匀度指数(Pielou)、测序深度指数(Good’s Coverage)和Faith’s PD指数。(B)属水平UPGMA聚类分析，比较组间样本分布。(C-E)细菌类群相对丰度的变化。门(C)、科(D)和属(E)水平上的微生物组成。(F)各组前20个细菌属的热图。(G)肠道微生物群16S rRNA基因的PICRUSt2功能预测。(H) NC组和LBP-H组之间存在显著差异的代谢途径。(I) LBP-L组和LBP-H组之间存在显著差异的代谢途径。

6 枸杞多糖对SCFAs的影响

结肠内容物和粪便中的SCFAs浓度如图5所示。显然，各组的主要SCFAs包括乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐。在粪便样本中，NC组中乙酸、丙酸和丁酸的比例(占总SCFAs的百分比)分别为65.85%、7.78%和9.55%，LBP-L组为65.63%、7.44%和16.11%，LBP-H组为65.90%、8.33%和12.34%(图5A-F)。LBP消耗改变了总SCFAs浓度，LBP-H组的总SCFAs浓度达到52.18 μmol/g，显著高于NC组(39.69 μmol/g)。即使在低剂量LBP组中也能达到这种效果。虽然NC组和LBP补充组之间的单个SCFAs差异无统计学意义，但LBP-H组检测到较高的乙酸水平，是NC组的1.32倍。SCFAs在结肠内容物中的分布与粪便中的分布相似。如图5G-L所示，与NC组相比，LBP处理组显示出显著更高的总SCFAs水平(70.13 μmol/g vs 36.08 μmol/g)。组间比较显示，与NC组相比，无论剂量如何，LBP选择性地增加了结肠内容物中的乙酸盐浓度(P<0.05)(图5G)。NC、LBP-L和LBP-H组的平均乙酸水平分别为23.68、48.03和49.26 μmol/g。在结肠内容物中，除乙酸外，所有SCFAs在NC组和LBP-H组之间均无显著差异。此外，结肠内容物中的总SCFAs约为粪便中的1.42倍。

图5 LBP干预对粪便(A-F)和结肠内容物(G-L)中SCFAs浓度的影响。数据表示为平均值±SD(n=4)。使用单因素方差分析(Duncan检验)确定每个处理的统计显著性，P<0.05认为显著。直方图上不同的小写字母表示存在显著差异。 

7 枸杞多糖对血清代谢产物的影响

代谢产物可以作为表型的调节物。为了研究NC组和LBP-H组之间宿主代谢的变化，采用非靶向代谢组学方法鉴定小鼠血清代谢产物。电喷雾电离正离子模式(ESI+)和负离子模式(ESI-)分别检测到2054和1965种化合物，并进行多元统计分析。QC样本分布紧密且高度相关，表明整个检测过程稳定(图S1-S4)。ESI+中代谢物的主成分分析(PCA)如图6A所示。PCA图显示NC组和LBP-H组的血清样本可以很容易地分为两个不同的聚类。同样，在OPLS-DA评分散点图中观察到明显的分离(图6B)。OPLS-DA是一种监督判别分析统计方法，它比PCA更能清晰地突出样本之间的差异。以OPLS-DA模型得出的VIP评分≥1.0、Student’s t检验P<0.05、FC值≥2或≤0.5作为差异表达代谢物的标准。我们鉴定出64种代谢物(54种上调，10种下调)在NC组和LBP-H组之间显示出显著的丰度差异(图6C-D)。这些代谢物主要为甘油磷脂(78.13%)、甘油脂(7.81%)、生物碱(3.13%)、酯类(3.13%)和醛类(1.56%)。最后，基于差异代谢物进行KEGG通路富集分析，我们观察到一条通路(脂肪酸降解)富集(图7G)。

ESI-代谢物的PCA和OPLS-DA分析也显示了NC组和LBP-H组样品之间的明显差异(图7A-B)。在VIP≥1.0、P<0.05和FC≥2或≤0.5的条件下，得到7种差异代谢产物(3种上调，4种下调)(图7C-D)。4-氯-2-甲基苯酚、PC(18:1(9Z)/18:1(9Z))和PC(18:0/16:1(9Z))的丰度显著上调，而三氯乙酸、乙酸、melampodinin、8-desoxygartanin的丰度则呈下降趋势(图7E-F)。此外，KEGG通路富集分析显示，差异代谢物与15种代谢途径密切相关(图7H)，其中丙酮酸代谢、膦酸盐和次膦酸盐代谢、糖胺聚糖生物合成-硫酸乙酰肝素/肝素、糖酵解/糖异生、胆碱能突触、化学致癌受体激活因子最高，其次为丙酸代谢、细胞色素P450代谢外源物质、C5-支链二元酸代谢、硫代谢、蛋白质消化和吸收、乙醛酸和二羧酸代谢、碳代谢、碳水化合物消化和吸收、牛磺酸和亚牛磺酸代谢。最值得注意的是，虽然这些差异代谢物在区分NC组和LBP-H组样品时表现良好，但只有三氯乙酸和乙酸参与了代谢途径的富集。

图6 采用电喷雾电离正离子模式检测NC组(n=6)和LBP-H组(n=4)血清代谢物。(A) 2054种注释代谢物的PCA评分图。(B)已鉴定代谢物的OPLS-DA分析。(C)热图分析两组64种差异代谢物的分类和表达变化。(D)代谢物火山图。横坐标表示两组中代谢物的相对含量倍数变化(Log2FC)的对数；纵坐标表示显著差异的水平(-Log10 P值)；点的大小表示VIP值。(E)显示上调代谢物离子强度的条形图。(F)显示下调代谢物离子强度的条形图。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，****P<0.0001(T检验)。

图7 采用电喷雾电离负离子模式检测NC组(n=6)和LBP-H组(n=4)血清代谢物。(A) 1965种注释代谢物的PCA评分图。(B)已鉴定代谢物的OPLS-DA分析。(C)热图分析两组7种差异代谢物的分类和表达变化。(D)代谢物火山图。(E)显示上调代谢物离子强度的条形图。(F)显示下调代谢物离子强度的条形图。在正离子检测模式(G)和负离子检测模式(H)下检测到的差异代谢物的KEGG通路富集分析。*P<0.05，**P<0.01，**P<0.001(T检验)。

8 枸杞多糖 对肝脏脂质代谢相关基因表达的影响

对血清非靶向组学数据进行KEGG通路分析显示，LBP-H组脂肪酸降解通路富集。接下来，我们进行了定量RT-PCR以分析肝脏脂质代谢相关基因的表达水平(图8)。在LBP干预组中，一些与脂肪酸氧化有关的关键基因(包括PPARɑ、ACOX1和CPT-1α)表达上调。特别是LBP组PPARɑ和ACOX1显著上调(P<0.05)。LBP-L组CD36(一种参与脂质分泌/转运的基因)上调，表明LBP可能影响脂质分泌/转运。与LBP组相比，NC组参与脂肪形成的PPARγ mRNA水平显著升高。总体而言，这些研究结果表明，枸杞多糖可能通过促进肝脏脂肪酸氧化来预防NAFLD。

图8 脂质代谢相关基因的mRNA水平。数据表示为平均值±SD(n=9)。*P<0.05，**P<0.01(T检验)。

9 肠道菌群与代谢表型的相关性分析

为了确定LBP诱导的生化指标变化是否与肠道微生物群的影响相关，我们进行了Spearman相关分析(图9)。LBP诱导的乳杆菌变化与肝脏SOD活性呈正相关，与血清LDL-C水平呈负相关。补充LBP的小鼠体内富集的乳球菌与血清LDL-C和肝脏TBA水平呈负相关。瘤胃球菌是LBP-H组中丰度较低的一个属，与血清LDL-C呈正相关。此外，我们发现肝脏TG与Allobaculum呈正相关，与AF12呈负相关。

图9 肠道微生物群与代谢表型之间的Spearman相关性。*p<0.05，**p<0.01。

讨论

枸杞多糖(LBP)被认为是枸杞中的主要生物活性成分。越来越多的研究报告称，粗的或纯化的LBP可以改变代谢综合征相关的氧化和炎症状态，并调节血糖水平稳态和脂质代谢。这些研究大多集中于LBP对亚健康或疾病状态的个体的干预效果，但很少有关于LBP对健康个体的影响的信息。本研究比较了摄入不同剂量LBP的动物的代谢表型、血清代谢产物、粪便微生物群组成和SCFA谱，并探讨了宿主代谢与肠道微生物群之间的关系。特别是，我们发现，与NC组相比，给予200 mg/kg BW LBP的小鼠显示出较低的血清TC和TG水平，并降低了肝脏TG。高脂血症是一种脂质代谢紊乱，表现为血液中TC、TG和LDL-C过高或HDL-C过低，容易诱发动脉粥样硬化。此外，血脂异常经常与糖尿病和高血压等心血管风险因素相互作用。一致地，在先前的体内研究中，粗LBP显示出联合降糖和降血脂活性。在四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠中观察到LBP(250和500 mg×kg−1×d−1)的明显降血脂作用，反映为血清TC和TG浓度降低，HDL-C水平升高，呈剂量和时间依赖性。在当前的研究中，LBP给药对血清中TNF-α、IL-1β和IL-6水平没有显著影响。这与其他研究人员发现的证据不一致，这些证据表明LBP增强了血清IL-6和TNF-α水平，从而在免疫反应中发挥重要的调节功能。事实上，LBP的免疫调节作用已被广泛认识，可能的机制包括增强肠粘膜免疫屏障的完整性、调节肠道微生物群及其代谢产物、增强巨噬细胞的吞噬能力和促进树突状细胞的增殖。在整个研究过程中，LBP化学结构和干预时间的差异可能解释了血清细胞因子的争议结果。如其他研究所述，与具有不同分子量的LBP相比，LBP3(40-350 kDa)可显著诱导树突细胞表面共刺激因子CD80、CD86和MHC-II的表达，从而促进树突状细胞成熟。肝脏处于一个独特的位置，在大量小分子和精细调控的系统环境之间发挥着关键作用。肝脏中的多种信号通路，如胆汁酸生物合成、尿素循环和胆碱代谢，已被证明对肠道微生物群的变化敏感。我们观察到，补充LBP增强了肝脏的抗氧化能力，降低了MDA水平，增加了肝脏T-AOC和SOD水平。这一结果支持了我们从肠道微生物群得出的结论，即高剂量LBP可上调乳杆菌和乳球菌的丰度。肠道内的乳杆菌通过激活Nrf2抗氧化反应途径来保护肝脏免受氧化损伤。大量文献描述了人类共生鼠李糖乳杆菌GG对氧化性肝损伤的保护作用，提出的保护机制包括增强屏障功能和改变胆汁酸信号转导。通过H&E评估，LBP治疗对整个肝脏组织学没有明显影响，表明LBP维持了肝细胞的正常功能；NC组和LBP组之间的肝脏ALT和TBA水平(最常用的反映肝功能的指标)没有发现差异。 肠道微生物群对肠道环境有着深远的影响，进而影响外周组织的功能和代谢。肠道微生物群的稳态对宿主健康至关重要。鉴于LBP在上消化道是不可消化的，并且在我们之前的研究中可以被肠道微生物利用，我们强烈认为LBP可以通过调节肠道微生物组来影响宿主的代谢功能。在本研究中，LBP干预可以调节整个微生物群落结构。在此过程中，LBP-H组中明显增加的细菌包括乳杆菌和乳球菌。这些数据与最新报告一致，即补充LBP可以提高小鼠肠道中乳杆菌的相对丰度。但低剂量LBP引起的细菌属丰度变化似乎较弱。先前的一项研究指出，多糖的剂量与其反应成正比，较高的剂量更有可能刺激生物体的内在反应。炎症性肠病期间乳杆菌的流行率降低。乳杆菌在增强肠上皮屏障功能、刺激肠上皮增殖和抑制先天炎症信号通路方面非常有效。肠道微生物群通过调节营养供应和产生大量代谢产物影响宿主代谢，其中许多代谢产物进入体循环。肠道微生物群产生的SCFA和乳酸具有多种健康益处，包括维持肠道屏障功能、肠道能量供应、免疫调节、抗炎和抗肿瘤等。我们观察到，与NC组相比，LBP提高了总SCFAs浓度，并选择性地增加了结肠内容物和粪便中的乙酸盐水平。乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐是结肠中的主要SCFA，它们分别以约60:20:20的摩尔比存在于结肠中。SCFA可以通过作用于肠内分泌细胞表达的GPCRs影响宿主代谢，并直接调节免疫细胞活性以维持体内稳态。此外，乳杆菌产生的乳酸可以通过减少中性粒细胞浸润和细胞因子表达来调节炎症。 人体血液中的代谢产物提供了有关个体生理状态的丰富信息。本研究通过非靶向代谢组学检测LBP干预后小鼠体内代谢产物的变化。PCA和OPLS-DA分析中，在ESI+和ESI−中观察到NC组和LBP-H组之间的明显分离，表明补充LBP对小鼠的代谢有很大影响。在ESI+中，磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、二酰甘油和生物碱是主要的差异代谢产物。甘油磷脂在生物学中发挥着重要作用，包括在细胞膜上形成脂质双分子层，并通过释放信号分子调节各种生物途径，例如参与细胞增殖、氧化应激、炎症和神经传递。肠道微生物降解多糖产生的乙酸盐通过门静脉到达肝脏，在那里它可以作为肝脏脂质合成的前体。因此，肠道微生物群可能通过乙酸盐的产生来调节脂质代谢过程。KEGG通路分析表明，LBP干预的小鼠脂肪酸降解通路丰富。脂肪酸代谢主要分为脂肪酸合成代谢和分解代谢。脂肪酸代谢改变是肥胖、2型糖尿病或肿瘤发生或缓解的潜在机制之一。β-氧化循环是大多数生物体中脂肪酸降解的主要途径，可以提供机体所需的大量能量。β-氧化途径的阻断可能导致肝脏中TG的升高，从而导致脂肪肝。在现有的报道中，间歇性使用模拟禁食的饮食可以通过促进脂肪酸氧化来改善肝脏脂肪变性。PPAR家族中的某些基因在调节肝脏脂质代谢和脂肪细胞分化中起着重要作用。PPARα是一种核受体，进入细胞核后可以促进参与脂肪酸氧化的下游基因的表达，从而确保机体的正常能量需求，并维持肝脏脂质代谢的稳态。在本研究中，LBP处理诱导PPARα通路的激活，并促进PPARα下游部分基因的表达。这些数据支持了肝脏TG的研究结果，给予LBP的小鼠肝脏TG水平降低。总之，这些数据表明补充LBP可以通过激活PPARα信号通路来预防NAFLD。

结论

本研究分析了LBP摄入对健康小鼠宿主代谢和粪便微生物群的影响。LBP治疗降低了血清TC和TG水平，促进了IL-10的分泌，并改善了肝脏的氧化应激。LBP干预改变了肠道微生物群分布，增加了有益细菌的相对丰度，并促进了SCFAs的产生。血清代谢组学结果表明，补充LBP对小鼠代谢有显著影响。此外，本研究发现LBP干预小鼠中脂肪酸降解途径丰富。RT-PCR证实LBP可上调肝脏脂肪酸氧化相关基因的表达。综上，本研究清楚地表明，LBP通过调节肠道微生物群，在预防小鼠NAFLD和相关代谢紊乱方面非常有效。