多重耐药菌快速检测有新法

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近日，东南大学附属中大医院医学检验科主任吴国球教授课题组开发了一种制作简单、可编程的双模适配体传感器(DAPT)，实现了快速、特异及超灵敏检测多重耐药菌。目前该成果已在线发表于国际期刊《生物材料科学》（Biomaterials Science）。

该文章第一作者为东南大学附属中大医院医学检验科赵峰峰博士，通讯作者为医学检验科主任吴国球教授。

多重耐药(Multidrug-resistant, MDR)细菌持续威胁着公共卫生和人类健康。传统的细菌培养方法虽为“金标准”，但耗时、影响因素多；基于聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)的方法需要专门的技术人员，对仪器、场地也有特定的要求，不宜普及。

因此，开发一种能够快速、准确鉴别多重耐药菌的方法对于减少严重感染至关重要。

本研究构建了一种双模适配体传感器检测平台(DAPT)，主要包含捕获、分离、识别、检测四个步骤，其中识别阶段，适配体修饰的纳米金靶向结合目标细菌，由分散到聚集的状态变化，引起快速、超灵敏的动态光散射信号转导，使得DLS模式具有超高的灵敏度。与此同时，目标细菌释放出荧光探针，作为一个荧光纳米开关显示出阳性荧光信号，尤其在高浓度下是精确定量检测的有力补充。

图1. DAPT检测多重耐药菌示意图

首先，表征结果表明适配体成功修饰纳米金，且具有良好的稳定性。当存在MRSA时，荧光纳米开关成功实现OFF到ON的转变。同时，对适配体修饰浓度，捕获时间等条件进行优化。随后，对DLS模式及Flu模式的检测性能进行评估，包括灵敏度、特异性、重复性实验，以及标准添加实验，回收率等。

图2. AptGNPs(A)TEM、(B)粒径分布图、(C)Zeta电位、(D)XPS、(E)FT-IR、(F)稳定性考察、(G)荧光纳米开关示意图和(H)MRSA存在时的荧光光谱。

接下来，选用10个临床样本进行DAPT可行性验证。结果表明DAPT平台在临床样本检测中同样展现出优异的性能，对临床样本检测准确率达100%。由于核酸序列具有高度的可编程性，我们对适配体及相应荧光探针序列进行重设计，研发出不同的DAPT检测系统，可分别检测不同的耐药菌。各系统均具有较高的特异性，且具有良好的线性关系。

图3. (A)DAPT通用平台检测流程、(B)Mode-DLS及(C)Mode-Flu检测四种耐药菌的特异性考察；(D)Mode-DLS及(E)Mode-Flu检测不同浓度四种细菌。 

综上，本研究成功开发了一种制作简单、可编程的双模适配体传感器(DAPT)，实现了快速、特异及超灵敏检测MRSA(LOD为4.63 CFU/mL)。DAPT平台由于其优越的可编程性，具有极大的潜力成为鉴别多重耐药菌的通用工具。 

小编团队

策划、审核 / 程守勤

编排  / 王倩

校对 / 刘敏

配合 / 医学检验科

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