刘敏教授：特发性炎性肌病相关间质性肺疾病的实验诊断技术临床应用进展

临床实验室

本文刊载于《临床实验室》杂志2022年12月刊“自身免疫性疾病实验诊断”   

专题-「专家论坛」版块 作者：李柳冰  刘敏 单位：中山大学附属第一医院医学检验科，广州510080

01 IIM-ILD相关血清生物标志物

1.1 抗合成酶抗体

抗合成酶（aminoacyl-transfer RNA synthetase，ARS）抗体是以胞浆氨基酰tRNA合成酶为靶抗原，主要包括抗Jo-1、抗PL7、抗PL12、抗EJ、抗OJ、抗KS、抗Zo和抗Ha自身抗体。抗ARS自身抗体与IIM、ILD、发热、技工手、多关节炎和雷诺现象临床症状的出现密切相关，称为抗合成酶综合征（anti-synthetase syndrome，ASS）。随访225例抗JO-1自身抗体阳性患者，发现在随访结束时，ILD发生率可高达84%，而在随访基线时，ILD发生率约为50%。与抗JO-1自身抗体相比，其他抗ARS自身抗体的患者更常伴发ILD。在IIM患者中，抗ARS自身抗体阳性患者合并ILD通常表现为慢性进行性肺功能障碍，对糖皮质激素治疗的反应更好，预后也更好。

1.2 抗黑色素瘤分化相关蛋白5抗体

抗黑色素瘤分化相关蛋白5（melanoma differentiation-associated gene 5，MDA5）抗体在亚洲国家皮肌炎患者中的流行率远远高于美国和欧洲国家， 46%的抗MDA5自身抗体阳性患者在发病6个月内死于呼吸衰竭，是IIM预后不良的重要标记物。抗MDA5自身抗体阳性患者伴发皮肤溃疡可增加发生ILD的风险。在抗MDA5自身抗体阳性的皮肌炎患者中，与抗体效价较低的患者相比，效价高的患者对治疗的反应更差，死亡率更高。

1.3 抗Ro52抗体

我国对1979例抗Ro52自身抗体阳性的结缔组织病患者进行分析，发现IIM是最常见的疾病类型，ILD的发生与抗Ro52自身抗体相关，且在不同结缔组织病中，ILD的发病率差异较大，抗Ro52自身抗体阳性而不是抗Ro60自身抗体阳性，更可能提示ILD的发生。

1.4 抗PM-Scl抗体

抗PM-Scl抗体主要分为抗PM/Scl-75和抗PM/Scl-100两种自身抗体。抗PM-Scl自身抗体是一种IIM相关性自身抗体，常见于IIM-系统性硬化症重叠综合征患者中。在抗PM-Scl自身抗体阳性的IIM患者中，ILD是主要突出的临床并发症，尤其是合并抗Ro-52自身抗体的患者，且部分抗PM-Scl自身抗体阳性的IIM患者可单独合并ILD，无肺外表现。大多数抗PM-Scl自身抗体阳性的IIM患者对免疫治疗反应良好，但也有一些患者容易复发。

1.5 抗Ku抗体

抗Ku抗体的靶抗原通过非同源末端链接途径参与双链 DNA 修复，与DNA依赖性蛋白激酶催化亚基（DNA-PKcs）结合，调节核蛋白的磷酸化。除了可见于IIM患者中，亦常见于系统性红斑狼疮、系统性硬化症、类风湿关节炎等结缔组织病患者中。研究表明，抗Ku自身抗体阳性IIM患者在基线时，有19%合并ILD，最终有56%发展为ILD。IIM患者中，抗Ku自身抗体阳性患者是以远端无力、ILD高风险、罕见皮疹和无钙质沉着为主要特征。

1.6 涎液化糖链抗原

涎液化糖链抗原-6（Krebs Von den Lungen-6，KL-6）在Ⅱ型肺泡上皮细胞膜和细支气管上皮细胞膜上表达，细胞损伤和/或再生后会升高。现有研究表明，在IIM中，合并ILD患者的KL-6浓度显著高于不合并ILD患者，且KL-6水平升高与IIM-ILD的复发相关，是IIM肺纤维化和疾病严重程度的重要生物标志物。我国一项该研究招募了1084名受试者，包括373例ILD、584例非ILD肺疾病患者和127名健康个体，检测KL-6指标，结果指出，在中国患者中KL-6以500U/mL作为诊断cut-off值时，对ILD的敏感性和特异性分别为77.75%和94.51%。

1.7 表面活性蛋白

表面活性蛋白A（surfactant protein A，SP-A）和表面活性蛋白D（surfactant protein D，SP-D）具有高活性。研究指出，与健康对照相比，ILD组SP-A和SP-D水平均显著升高，SP-D（77%）对ILD的灵敏度高于SP-A（33%），而SP-A（100%）对ILD的特异性高于SP-D（83%）。血清SP-A、SP-D与肺损伤程度和疾病临床过程密切相关。

02   检测方法  

目前用于IIM-ILD相关自身抗体检测的方法包括免疫沉淀法（immunoprecipitation，IP）、酶联免疫分析法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、线性印迹免疫分析法（line immunoassay，LIA）和斑点印迹免疫分析法（dot immunoassay，DIA）等。IP法是检测IIM自身抗体的金标准，但IP法的操作程序复杂且耗时，需要使用放射性同位素，对操作人员有一定的风险，故IP法的实际使用范围较少。临床上较常用ELISA法和LIA法检测IIM自身抗体。ELISA法能在短时间内同时处理大量样本，且能提供抗体定量的结果，能有效监测疾病活动。LIA的一大优势是一个样本可以同时检测多个自身抗体。但LIA主要是一种非定量分析，虽然条带的强度与抗体滴度相关，但在结果呈现时价值不大，且LIA法和IP法之间的一致性比ELISA法和IP法之间的一致性要低。

我课题组比对了ELISA法和LIA法检测抗MDA5和抗TIF1γ自身抗体的一致性。结果发现，两种方法检测结果的一致性一般。此外，LIA法对抗Ku自身抗体的测定具有高假阳性率，只有23%的LIA法阳性样本被ELISA法确认为阳性。重要的是，通过ELISA验证的大多数（65%）样品的LIA cut-off值超过150，而不是厂家所定义的超过15。此外，采用LIA法检测IIM自身抗体，还需充分评估该方法在操作实验室中的敏感性和特异性，避免周围环境因素对实验结果所造成的不良影响，尽最大可能保证结果的准确性。

03   结语  

总而言之，人们对IIM-ILD的认识在近几十年中取得了巨大的进步，但目前对IIM-ILD的诊断和治疗监测仍然是一个挑战。已有的IIM-ILD血清生物标志物的敏感性和特异性有限，在临床实践中可联合使用这些生物标志物，以提高其临床价值。

-End-

题图 | veer.com

排版 | 张宁

审校 | 方研

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