核酸提取干货 - MedChemExpress

著有 “玄学” 之称的分子生物学，师兄师姐说小 M 要做的都是 “升级打怪入门级” 的实验，然而，实验记录本上清晰地罗列着自己整理的堪称完美的 (假装看懂的 Steps) 实验流程，可是完美的流程下，总是充斥着不丝滑的操作——提 DNA，PCR，电泳，纯化回收，构载体；提 RNA，反转录，文库构建，qPCR……如何快速完成一套绝美的逆袭！！！

完美操作第一步

打好科研“地基”，从核酸提取开始

核酸是遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础，是分子生物学研究的主要对象。如果要对核酸的结构和功能进行研究，首先就要对核酸进行提取和纯化。

核酸提取是个啥？字面意思，就是把核酸从样本中提取出来呗！

那一般常见的提取方法有哪些呢？

表 1.核酸提取的常见方法

提取步骤

核酸提取主要包括细胞裂解、核酸吸附、杂质漂洗和核酸洗脱四步。那具体到实验中，我们该选择哪种提取方法呢？这就要看个人的实验设计方案及实验组的经费情况啦！

磁珠法提取效果当然很好，但贵是真的贵，而且还得购买配套的磁力架，批量提取的话，还是不太建议的！自配试剂的优缺点是显而易见的，若后续实验对核酸要求不高 (如常规的 DNA 提取，后续用做普通 PCR 扩增)，这种提取方法也可选择。

但如果对核酸的质量要求比较高 (如定量或文库构建等。尤其不能忽略的是 RNA 提取中的降解和纯度问题)，小 M 还是比较推荐受众度较高的离心柱法；至于质粒提取，考虑到纯度与浓度，肯定也选择这种性价比较高的离心柱法啦！  

图 1. 离心柱法核酸提取流程图

来来来，排队队，顺带开启 Kits 介绍模式……MCE 新推出三款核酸提取纯化试剂盒，均利用硅胶膜离心柱对核酸进行特异性吸附，改良的裂解液可以促进细胞充分裂解、蛋白变性、核酸释放；改良的吸附缓冲液能有效地促进核酸结合到硅胶膜上；最后经过洗脱即可获得高纯度核酸。

Kit one (基因组 DNA 小量抽提试剂盒)：我适用于从动物组织/细胞、酵母、大肠杆菌等样本中有效提取并纯化基因组 DNA，内含 蛋白酶 K 可去除蛋白污染，经纯化的基因组 DNA 后续可用于 PCR、qPCR、酶切、Southern Blot 等实验。Kit two (病毒 DNA/RNA 抽提试剂盒)：我适用于从血浆、血清、全血、组织匀浆液、痰液、动物细胞上清等中提取病毒 DNA/RNA。我不仅包含蛋白酶 K，更有核酸助沉剂助力，提取的核酸那可不团团来嘛！纯化的病毒 DNA/RNA 可用于 PCR、RT-PCR、qPCR 等实验。Kit three (质粒大量抽提试剂盒)：我适用于从 ≤500 mL LB 培养基培养的大肠杆菌细胞中高效的提取质粒 DNA。RNase A可对 RNA 进行清除，柱上去除内毒素，Very good!MCE 新上线核酸提取试剂盒 (离心柱型)，尝鲜试用装，抓紧时间领取吧！

完美操作第二步

避开操作“雷区”，拿到高纯度核酸

小M：Protocol 很完美，实际操作过程中，也难免会遇到各种小问题。

下面小 M 对 RNA 提取过程中常见问题进行了一一盘点。

(此处主要针对 RNA 提取，文末彩蛋有 DNA 和质粒提取注意事项汇总哦)。RNA 提取后续试验主要包括 PCR、RT-PCR、qPCR、cDNA 文库构建等，RNA 没提好，后面的实验问题也是连贯性的，一个不小心可就都 game over 了。这个 RNA 提取，真的是……脑壳疼！

来来来，这道题，我们重点讲一下。

影响 RNA 得率低的因素很多？抽提 RNA，当然要做到 “三从四德”。一从：外源酶污染？NO！二从：内源酶活性？NO！三从：抽提目的性？YES！一德：使用无 RNase 耗材，选择合适的操作环境。二德：确定样本后选择合适的裂解液，样本与裂解程度不匹配，抽提结果也会大打折扣。三德：裂解、匀浆、抽提、洗脱——快！准！狠！四德：衡量抽提性价比的标准是后续实验的结果，得率不是唯一标准。即我们需要明确下一步的实验，如果是 PCR，其实验本身对 RNA 的质量要求没有那么高，而 qPCR 对 RNA 的要求相对又高点，但如果要做 cDNA 文库构建，其对 RNA 的要求就很高了，因此 RNA 质量便是 “经济基础” 了，颇有 “一损俱损” 的感觉了。

小白:“三从四德” 我也懂，但 RNA 得率这么低具体是为什么呢？

小M：还不是因为 RNA 太娇贵，放太久会降解，环境不干净会降解，吹口气也能降解~



彩蛋时间到！！!(含 DNA 和质粒提取注意事项）





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