浅谈PCR工作中的试剂耗材质检

作者 | 叶溪

前  言  

近年来，由于新冠疫情，临床基因扩增实验室（俗称：PCR室）的建设进入了前所未有的快速发展时期，新建实验室犹如雨后春笋，配置也不断升级。常言道“打江山不易，守江山更难”，实验室建成后的日常管理和运行能否坚持规范操作更显功力，更需要下足“绣花功夫”。

在PCR室相关的管理规范中，其中有一项是要求“实验室使用的试剂/耗材的选购、验收、储存和质检要有相应的程序和记录”。也许有些人对这条规定有疑问，相关的试剂和耗材出厂时不是都有合格证了吗，为什么实验室在使用前还要进行一系列的检查和记录，是不是多此一举？

问题的答案，我们通过4个真实的案例来体会一下。

案例一   案例经过  

某日在检测HPV分型时发现该批次的阴性质控结果异常，竟检出“HPV 11 +”。阴性质控的成分为水，不含HPV病毒，这就奇怪了。

案例分析  

这个结果是怎么来的？难道是实验室污染？查看当批次的所有检测结果，不存在“HPV 11+”的标本，阳性质控是HPV 16/18+,也不含HPV 11。由此推断污染不是当批造成的。继续破案，回看之前的实验记录，发现上一检测批有一个“HPV 11+”的临床标本。难道是这次的实验发生产物污染？

通常造成产物污染的原因有：①人为操作不当；②耗材破裂或者密闭性差。于是先从耗材质量入手，对实验用到的带盖PCR八连管进行密闭性检查。在八连管内加入等量的生理盐水，盖好盖子，放入PCR仪中选择一个程序进行扩增，扩增结束后观察管内液面情况。结果显示，当时在用的某批号八连管，扩增结束后液面出现明显不齐平的现象（如图）。由此发现该批号的八连管密封性不好。也由此推断实验室发生了产物泄露，以致生理盐水检出“HPV 11 +” 。于是立即进行实验室的全面清洁和消毒，更换八连管。

案例一分析流程图  

案例二   案例经过  

某日检测HBV DNA时发现该批次的弱阳性质控结果为阴性（目标靶值允许范围为：1.89 x10 3~1.89 x10 4IU/ml），而强阳性质控却正常检出。而在这之前两个水平的质控结果都是稳定的。

案例分析  

于是从人员、操作、环境、试剂、耗材和仪器等方面排查当天的实验情况，试图查找失控原因。调查发现，那天因原来使用的A品牌PCR八连管用完了，于是临时使用了B品牌PCR八连管，除此之外无其他异常。

为排除该结果异常是人为操作误差所致，我们对同一批号的弱阳性质控进行重新提取和扩增，还是用B品牌PCR八连管，结果仍然是阴性。难道是B品牌PCR八连管搞得鬼？为求证这个推测，我们使用紧急调来的C品牌PCR八连管进行复测，结果弱阳性质控恢复检出，结果在控。

案例二分析流程图  

案例三   案例经过  

某日检测HSV DNA项目时发现HSV阳性质控检测失败，结果阴性。

案例分析  

这盒试剂是新开封的，整批检测都是配套使用新试剂盒组分。难道这个批号试剂质量有问题？查看试剂盒里的组分，包括提取液、扩增反应液、酶和阴阳质控品，外观无异常。如果说试剂盒质量出现问题，最有可能是酶。那么更换酶，结果会不会得到纠正？于是我们使用了在用的同品牌的HBV DNA试剂盒的酶作为替代，重新扩增。结果HSV阳性质控呈典型的S型扩增，结果在控。

案例三分析流程图  

案例四   案例经过  

某日检测禽流感病毒H7N9时发现自带阳性质控的N9基因扩增曲线线型奇怪，呈倒V形。

案例分析  

排除了反应液严重蒸发，出现这种线型可能与反应液各成分浓度比例不当、酶活性不稳定等有关。于是联系厂家更换其它批号的试剂，新试剂通过验证，结果合格。

案例四分析流程图  

总  结  

通过上述的四个案例，我们从中可以体会到PCR工作中试剂和耗材质检的重要性和必要性。PCR工作处处彰显细节，小到一个吸头、一条八连管，大到一盒试剂、一台仪器，都可能对结果造成“差之毫厘，谬之千里”的严重影响。“工欲善其事，必先利其器”，因此我们在PCR日常工作中，应当重视试剂和耗材的质检工作，把它落到实处，一以贯之，以保证结果的准确性。

参考文献：  

[1]李金明. 实时荧光 PCR 技术. 第 2 版. 北京：科学出版社，2016

[2]李金明　张瑞　新型冠状病毒感染临床检测技术. 北京：科学出版社，2020

[3]化工仪器网

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