结直肠癌精准筛检新工具，中国医疗团队发表ctDNA甲基化单倍型检测研究成果！

结直肠癌（CRC）是世界上最常见的三大恶性实体肿瘤之一，仅次于乳腺癌和肺癌，但是幸运的是：结直肠癌从癌前病变（腺瘤）发展到恶性肿瘤需要经历数年乃至十余年的漫长过程，这给了人们足够的时间进行预防筛查，通过早期发现和标准治疗，结直肠癌患者的5年生存率可提到至90%。

结直肠镜检查被认为是诊断结直肠癌的金标准，但是由于其侵入性操作、肠道准备以及较为高昂的成本，结直肠镜应用并不普及，数据显示结直肠镜的依从性只有50%。因此，亟需寻找有效的、无创的检查手段以进行结直肠癌早期筛查和监测。

近期，发表在eClinicalMedicine杂志上的一项新的研究成果：来自中国的企业上海鹍远生物联合复旦大学附属肿瘤医院蔡国响、蔡三军、徐烨教授团队、南方医科大学南方医院梁莉教授团队等发表了基于ctDNA甲基化单倍型检测的研究成果，该检测模型不仅可以准确识别早期结直肠癌还可有效对结直肠癌患者进行预后预测。

该研究基于二代测序技术实现ctDNA甲基化单倍型检测，用于结直肠癌（CRC）的早期诊断和预后预测。

早期诊断：在独立盲法测试集中进展期腺瘤患者中的检测灵敏度为79.0%，在CRC患者中的检测灵敏度达到86.6%，对照人群中的检测特异度为88.1%。

预后预测：术前ctDNA甲基化水平高的CRC患者预后比低水平的患者差，在无复发生存期（RFS）和总生存期（OS）方面均存在显著差异。

该研究共纳入1138名受试者血浆标本，随机分为非盲法组和盲法测试组。

非盲法组包括748份血浆样本，被随机分成训练组和验证组，每组374个样本。

同时，一组独立的390份血样用于盲法模型测试。

另外，研究者采集了428名I-III期CRC患者的预后信息进行预后分析。

研究设计框架

研究者首先对60例CRC、20例AA和28例正常结肠组织样本进行基于PanSeer®ctDNA甲基化单倍型检测分析。通过比较CRC/AA组织与正常样本，发现了239个甲基化水平显著不同的单倍型标记，其中191个标记在使用训练集血浆样本进行标记筛选后仍然存在。随后，研究者将这191个甲基化单倍型标记用于建立血浆样本的分类模型，并命名为ColonES。

这项回顾性研究的主要结果是ColonES检测CRC和癌前病变（晚期腺瘤）的能力。次要结果是将ColonES与目前在诊所进行的粪便或血液检查进行比较，包括FIT和CEA。

ColonES检测早期结直肠肿瘤特异性为88.1%

研究在设盲的390个血浆样本中测试了ColonES的检测性能。

结果显示：ColonES检测AA的AUC（曲线下面积）为0.903，检测CRC的AUC为0.937（图A）。ColonES能够准确检出79.0%的AA患者和86.6%的CRC患者，特异性为88.1%（图B）。

图A、B:ColonES检测AA&CRC的AUC

ColonES检测AA和早期CRC的性能优于FIT及CEA

在采集的772份AA和CRC患者的不同样本中，有238个粪便样本进行了FIT检测，611个血液样本检测了甲胎蛋白（CEA）。

结果表明：ColonES检测优于FIT及CEA检测（图C和D）：检测AA（ColonES 83.2%VSCEA 2.8%；ColonES 83% VS FIT 44.7%），早期CRC（ColonES 85.3% VS CEA 12.9%；ColonES 89.3% VS FIT 72.1%）。

图C、D:ColonES与FIT、CEA的比较

ColonES检测分期越晚、肿瘤越大灵敏度越高

I期结直肠癌患者的ColonES检出率达到85.1%，从II期的79.3%上升到IV期结直肠癌患者的91.8%（p˂0.05）。

CRC检出率也随着肿瘤大小的增加而增加，从81.8%增加到96.2%（p˂0.05）。

CRC检测的灵敏度从50岁以下患者的76.5%提高到65岁以上患者的92.2%（p˂0.01）。

在CRC样本中，患者性别或肿瘤部位对检测灵敏度无显著差异。AA样本ColonES检出率随着肿瘤大小从75.7%增加到87.7%。在AA样品中，患者年龄，性别或肿瘤部位对检测灵敏度无显著差异。

各种因素对灵敏度影响

ColonES具有预测I-III期CRC患者预后的能力

在所有I-III期CRC患者中（493例），428例患者有完整的随访信息，中位（范围）随访时间为36（10-120）个月，5年无复发生存率（RFS）和总生存率（OS）分别为76.9%和72.6%。

术后复发组（72例）和非复发组（356例）：LR评分显示术前ctDNA甲基化水平存在显著差异（p=0.022）。

术后复发患者进一步分为早期复发组（12个月内）和晚期复发组（12个月后）。两组之间的ctDNA甲基化水平存在显著差异（p=0.003）。

按患者生存情况分组，也观察到类似的趋势（p˂0.001）。根据中位LR评分将术前ColonES检测阳性的I-III期CRC患者分为LR评分高/低组。LR评分低组患者的5年RFS和OS明显高于评分高组。

另外，单因素和多因素分析表明，术前ctDNA甲基化水平是I-III期CRC患者RFS和OS的独立危险因素。

预后结果

目前，肠镜检查仍是结直肠癌诊断的金标准。

随着液体活检技术的发展，像ColonES等基于ctDNA甲基化的非侵入性检测手段势必可以提高结直肠癌的检查依从性，成为结直肠癌检查新的手段。除了早期诊断，ColonES还可以预测I-III期CRC患者预后的能力，关于ColonES检测的上市值得期待！

参考资料： https://doi.org/10.1016/j.eclinm.2022.101717

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