【AASLD2022速递】小鼠模型：干扰素α治疗显著降低HBV DNA和pgRNA水平，能激活多种免疫细胞

编者按：第73届美国肝病研究学会年会（AASLD 2022）于当地时间2022年11月4日 - 8日在美国召开。

为了实现HBV的临床治愈，激活耗竭的免疫系统将是治疗慢乙肝患者的可行治疗策略。因此，再现慢乙肝免疫特性的动物模型也在不断研究中。在AASLD 2022摘要中发表的一项日本研究建立了慢乙肝免疫活性小鼠模型，实验表明：干扰素α（IFNα）治疗可显著降低慢乙肝小鼠血清HBV DNA水平和肝内pgRNA水平；其抗病毒作用可能涉及激活包括NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞在内的多种免疫细胞。

研究方法

将富马酰乙酰乙酸水解酶（FAH）cDNA单独或与HBV基因组共同克隆到SB转座子载体上（SB-FAH和SB-HBV-FAH）。通过水动力尾静脉注射（HTVi），将SB-HBV-FAH和SB转位酶表达载体引入FAH敲除（KO）小鼠的肝细胞中，使其在不服用尼替西农的情况下无法避免致死性肝损伤。

在停止HTVi和服用尼替西农后，只有肝内基因组整合的SB-HBV-FAH表达的HBV和FAH可以补偿FAH的缺失，并促使肝细胞再生，导致HBV的持续表达（CHB小鼠）。在FAH KO小鼠中注射SB-FAH载体建立对照小鼠。对这些小鼠的病毒和免疫动力学进行评估。注射后8 - 9周，给CHB小鼠注射重组IFNα（10,000 单位/小鼠每日，腹腔注射）。

患者结果

在慢乙肝小鼠中，血清HBV DNA水平维持在3.5 log IU/ml左右，持续到32周，并且HBsAg和FAH在整个肝脏中表达。慢乙肝小鼠血清ALT水平、caspase-3/7活性和肝内TUNEL阳性细胞数量均显著高于对照组，提示慢乙肝小鼠肝脏存在慢性炎症。

CHB小鼠肝脏中PD-1和Tim-3阳性的CD8+ T细胞（CTL）升高，且CTL耗竭的速度与血清HBV DNA水平呈正相关。IFNα治疗可显著降低血清HBV DNA水平和肝内pgRNA水平，并伴有轻度ALT升高。流式细胞术显示，在IFNα处理的CHB小鼠的肝脏和脾脏中，NK细胞及其颗粒酶B产生的频率升高。肝内单核细胞的单细胞RNA测序显示，在包括NK细胞、巨噬细胞和树突状细胞在内的广泛免疫细胞中，ISG15表达较高。

研究结论

建立了一个新的慢乙肝小鼠模型，具有持续性病毒血症和慢性肝脏炎症，可用于分析免疫应答。IFNα的抗病毒作用可能涉及多种免疫细胞的激活。

   肝霖君有话说

多项临床研究显示，基于聚乙二醇干扰素α的联合治疗方案能极大提高临床治愈率，优势患者可达30% - 80%（相关链接）。为了进一步提高临床治愈率，使更多患者获益，近年来，关于慢乙肝患者接受基于IFNα治疗的免疫机制研究越来越多，涉及多种免疫细胞和趋化因子，包括T细胞、B细胞、NK细胞和DC细胞等等（相关链接一、二、三、四、五）。该研究也验证了IFNα的抗病毒作用可能涉及多种免疫细胞的激活。期望未来免疫机制的逐步清晰可以推进临床治愈率的进一步提升。

参考文献： 

Shigeno S, Kodama T, Murai K, et al. Anti-viral and immune modulating effects of IFNa in a novel immunocompetent mouse model of chronic hepatitis B. AASLD2022, Abstracts (1115).

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