新型隐球菌的检测方法汇总

新型隐球菌是隐球菌属家族中主要致病病原菌，含5个血清型,包括A、B、C、D和AD型。它在免疫抑制患者中的感染发病率约为5％-10％，在免疫功能正常的人群中感染率约为十万分之一，可以感染人体的任何组织和脏器，最常见的部位是中枢神经系统，其次为肺部和皮肤。 墨汁涂片、真菌培养、隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验是常用的真菌学检测方法。墨汁涂片可以早期、快速诊断隐球菌感染。真菌培养是确诊隐球菌病的“金标准”。隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验对隐球菌中枢神经系统感染的诊断具有非常好的敏感性和特异性。

1、 墨汁染色 

脑脊液等标本离心取沉淀物或者挑取菌液1环涂于洁净玻片上，然后加印度墨汁1环，覆盖玻片后镜检。阳性结果应为：有厚荚膜和有细胞核的出芽（圆形或卵圆形芽生孢子，孢子外有一宽厚的荚膜包裹，菌体透亮，荚膜可比菌体大1-3倍，菌体内有一个至几个反光颗粒，即脂质颗粒）。 该法是诊断隐球菌感染直接而快速的检测方法，但在发病的初期，墨汁染色镜检1～3次往往常呈阴性，需要反复多次检查。据文献报道，有病例在第6次脑脊液墨汁染色镜检才找到隐球菌。出现假阴性的原因，一方面可能是发病早期病原学检出率低；另一方面，隐球菌主要集中在脑膜或脑室脉络丛肉芽肿细胞内，导致穿刺取样的困难；同时培养时间的长短也影响阳性的检出率，大多实验室隐球菌培养一般是5天左右发报告，但有的隐球菌培养第10天左右才出现阳性，故易造成漏诊。

2、真菌培养 

新型隐球菌于25-37°C环境下均可生长，在SDA斜面琼脂上，呈奶油色酵母菌落；SDA固体培养基（不能含会抑制隐球菌生长的放线酮）上菌落图片呈球形或椭圆形，不同于念珠菌的卵圆形，很少见到菌丝。 

3、隐球菌荚膜多糖抗原乳胶凝集试验 

利用免疫学方法，在乳胶颗粒上吸附隐球菌抗体，待检样本存在隐球菌荚膜多糖抗原时可发生特异性凝集反应。 该方法具有较高的敏感性和特异性，在早期快速诊断中明显优于传统的培养法和镜检，但不可避免假阳性和假阴性的存在。有文献报道，系统性红斑狼疮、结节病、类风湿因子、巨球蛋白以及毛孢子菌属、二氧化碳噬纤维菌属和抗酸杆菌，均与新生隐球菌荚膜多糖抗原存在交叉抗原，引起假阳性；另一方面，操作过程中乳胶手套中的滑石粉、洗涤反应板中的清洁剂污染脑脊液标本，也可引起假阳性。而高浓度隐球菌抗原所致的钩状现象和体内未知非特异性蛋白对隐球菌抗原的掩盖效应，却能够引起假阴性。

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