NGS小知识 ‖ 历时16年追捕的神秘杀手--海尔布隆幽灵

案件的开端始于1993年5月，一位居住在伊达尔-奥伯施泰因、广受邻里喜爱的老人--莉泽洛特·施伦格尔被凶手残忍地用一根金属丝勒死。警方仅在一个茶杯上取到了一个陌生人的DNA样本，其他一无所获。通过对DNA样本进行分析，并结合犯罪现场的情况推断，杀死施伦格尔的凶手是一名很可能与老人相识的年轻女人。然而对所有符合犯罪嫌疑的对象进行DNA比对后，竟无一人匹配，案件一度陷入僵局。

直到8年后2001年3月，第二名受害者出现在德国西南城市弗莱堡。一个名叫约瑟夫·沃尔岑巴赫的古董商人被凶手用一根尼龙绳残忍的杀害。警方在犯罪现场提取的嫌疑人DNA样本，通过比对，竟然与8年前杀害施伦格尔的凶手是同一个人--那个年轻的女人。经过大量排查，和8年前一样，没有找到任何有关联的嫌疑人或者目击证人，调查再次陷入僵局。

辗转到2007年5月，德国海尔布隆市发生了一起令人震惊的袭警案。凶手袭击了两名正在警车中休息的警察，致一死一伤。对现场采集的样本进行DNA鉴定后，发现与德国、法国、奥地利等各地发生的多起重大抢劫案、杀人案的嫌犯--那个年轻女人的基因相吻合。此时，媒体将那个年轻的女人称为“海尔布隆幽灵”。然而，那名昏迷后苏醒的警官却指认凶手是一名男性，并非女性。此证词一出，所有关注这个案子的人都蒙圈了，完全摸不着头脑。

真相大白日子的到来---2009年3月，一名少年闯入学校企图偷窃，警方将其留在现场的饮料罐送检，竟然检测出海尔布隆幽灵的DNA。由于提取检测DNA样本都要用棉签，此时有人提出会不会是棉签有问题？结果发现，所谓“海尔布隆幽灵”的DNA，竟然来源于制造样本采集棉签的工厂工人（与案件无关）。带有她DNA的棉签在各地案件调查中被广泛使用，致使许多案件即使实际上凶手不同，却能检出同一个人的DNA。警方认定了一个不存在的犯罪嫌疑人，互不相干的案件也被视为连环案件，导致所有调查进入僵局，这就是DNA样本污染带来的严重问题。‍

对于犯罪案件而言，样本污染不仅会误导案件侦查，甚至可能产生冤假错案。同样，通过高通量测序（NGS）检测指导患者个体化精准诊疗的过程中，样本污染问题同样不能忽视。污染的样本可能导致检出患者本来不存在的变异（出现假阳性突变），对患者的精准用药，预测预后等临床决策造成严重影响。

在NGS检测实验的全流程中，任何一个环节都可能发生污染，从样本采集、核酸提取、文库构建到上机测序，其中囊括了样本的交叉污染、PCR扩增错误、接头污染、测序错误等。因此，NGS的质量控制尤为重要，主要的质控点有三个方面：

(1) 肿瘤样本的质控，需要注意肿瘤类型、肿瘤细胞总体数量和占比。癌细胞数量太少或者占比很小，都会影响检测灵敏度，可能造成假阴性的结果；

(2) 文库构建的质控，主要涉及浓度和片段大小是否符合要求。一般用Qubit检测溶度，用Agilent 2100检测片段大小；

(3) 测序后下机数据是否符合要求，涉及到测序仪本身运行是否正常、平均测序深度、覆盖均一性、碱基质量Q30占比等。

NGS样本主要质控参数示例

参考文献

《肿瘤二代测序临床报告解读共识》，循证医学2022年，第22卷，第2期。