一文读懂PD-L1检测与判读的质控要求（建议收藏）

随着免疫治疗 药物在国内的适应症越来越广泛，以及PD-L1抗体DAKO 22C3、DAKO 28-8和艾德E1L3N在国内的获批，PD-L1免疫组化检测在病理诊断工作中尤为重 要，但不同药物所使用的PD-L1抗体的针对不同检测平台、不同克隆号的抗体甚至不同瘤种，其判读标准都存在差异，从而也会导致判读结果的主观性。要实现PD-L1的精准检测和判读，需从多个方面进行质量控制。      

一、检测前的质量控制

推荐优先在石蜡包埋肿瘤组织标本切片中进行PD-L1免疫组织化学检测： 手术切除标本和活检标本均可用于 PD-L1 检测。 手术标本选择代表性蜡块进行PD-L1检测，应避免选择含有坏死组织、挤压细胞及固定不佳等标本块。

表1 PD-L1 IHC前处理条件推荐

PD-L1检测前需要对HE染色的切片进行评估，观察是否存在脱片、皱褶、未染色等现象，这些情况可导致切片上肿瘤细胞数量减少、非特异性染色或假阴性等结果。 评估HE切片中肿瘤细胞数量和（或）肿瘤相关免疫细胞： 22C3及28-8检测系统要求HE染色切片中至少存在100个活肿瘤细胞； SP142检测系统要求包含至少 50 个活肿瘤细胞和（或）肿瘤相关间质。 如HE染色切片不合格，无法进行下一步检测，应再次切片或重新挑选蜡块。      

二、PD-L1检测的对照选择

目前各种文献、指南均推荐使用扁桃体或胎盘组织作为PD-L1免疫组化检测的阳性对照。 一般胎盘组织PD-L1表达阳性强度要高于扁桃体，但表达强度基本一致； 而扁桃体表达呈现出强弱不等的表达。 在扁桃体中，大多数生发中心巨噬细胞呈现弱到中等强度的点状胞膜染色，大多数上皮隐窝细胞呈现中等到强的染色，而大多数淋巴细胞(外套层和生发中心B细胞)和浅表上皮细胞无染色，这种不同强度的表达方式有助于对肿瘤组织进行判读。 可以根据习惯采用适合的阳性对照组织，但原则上应采用上述2种组织，这样检测结果才能具有可比性。 图1扁桃体组织的PD-L1检测结果。(左)低倍镜下可见PD-L1在扁桃体中的着色分布;(中)隐窝上皮细胞处呈细胞膜强阳性着色;(右)生发中心内巨噬细胞呈弱阳性着色 同时，还需要设置病人自身标本的阴性对照及常规未有抗体标记的扁桃体或胎盘组织的阴性对照，以排除自身因素产生的干扰。对照切片染色失败，则该轮所有患者的PD-L1染色结果视为无效，需分析原因，并重新进行染色。 表2 对照的质控要求      

三、结果判读的质量控制

在PD-L1免疫组化检测结果的判读中，以下几个方面需要进行质量控制的。 1. 是检测组织中的肿瘤细胞数量。根据文献或指南，对于PD-L1检测至少需要计数100个活的肿瘤细胞，这样检测结果才具有可靠性。然而，并不是所有样本均符合这个要求，所以，当肿瘤细胞数量不足100时，应该在检测报告中明确注明样本中的肿瘤细胞数量，这样才能有助于临床医生的治疗决策。 2. 确定PD-L1的阳性表达必须是细胞膜阳性，而不管其强弱程度。如果出现细胞质阳性或模糊不清的阳性时，均不能判读为PD-L1表达阳性。 表3 PD-L1表达强度 3. 避免误判。肿瘤组织内会有一些巨噬细胞，这种情况在肺癌内特别明显。肺泡腔内的巨噬细胞会表达PD-L1，此时不应将其误认为肿瘤细胞阳性而判读为PD-L1阳性。还有，坏死周围及切片周围的肿瘤组织也可有PD-L1表达，这个可能为坏死组织内的抗原弥散或边缘效应而导致的假象，应避免判读为阳性。肺是开放性器官，经常会有一些碳尘颗粒等沉积，会误认为是PD-L1表达，也需要进行鉴别。最后，组织内的挤压也会导致PD-L1表达，也不能将其判读为阳性。 表4 NSCLC的TPS评分要素      

四、判读水平的质控

病理医生判读水平的质控也是一个重要的质控因素。病理医生的判读水平直接影响到PD-L1检测结果的判读准确性，这方面需要通过由专人负责PD-L1判读，不断加强培训和考核，从而不断提高判读水平，才能得到准确的 PD-L1 检测结果。 总之，PD-L1检测与判读结果的准确性涉及到多个方面，检测实验室应在临床应用前建立及优化PD-L1检测规范化操作流程，并进行必要的性能验证，建立行之有效的质量控制系统。 质量控制包括室内质控与室间质控。室内质控要求检测实验室均应设置阴、阳性对照，定期进行检测人员比对、培训及数据总结和分析。从事PD-L1检测的实验室技术人员和病理医师应定期接受培训和资质考核。实验室应定期回溯并分析PD-L1检测结果，阳性率保持相对稳定，并与国内外报道的研究结果差异无统计学意义。室间质控可以通过参加国内权威机构举办的室间质评活动来完成，也可通过与其他实验室（如已获资格认可的实验室、使用相同检测方法的实验室等）比对的方式确定检测结果的可信度。检测实验室应定期参加PD-L1检测室间质评活动，每年至少2次。室内质控是控制 PD-L1 检测成败的关键，室间质控是确保 PD-L1 检测准确性的必要保证，二者结合起来，才能准确地进行 PD-L1 检测。