新技术！突变基因检测之ARMS PCR！

当今肿瘤疾病人群日趋增多，检测方法也多种多样，有传统的病理活检，核磁共振成像，有通过肿瘤标志物进行化学发光免疫筛查，还有通过分子生物学方法的PCR检测。今天小编就来给大家介绍分子生物学中常用来做肿瘤领域精准分子诊断的方法--ARMS PCR。

ARMS PCR的全称是突变扩增阻滞系统PCR（Amplification Refractory Mutation System PCR，ARMS PCR），又称为等位基因特异性PCR（Allele-Specific PCR，AS-PCR）。ARMS PCR是一项在PCR基础上发展起来的新方法，常用于检测DNA中各种点突变，应用于肿瘤领域精准分子诊断，用药指导等。

ARMS PCR通过引物3’末端引物设计控制等位基因特异性延伸，并结合Taqman探针的方法检测荧光信号值，从而判断野生型等位基因和突变型野生基因。换言之，我们应用ARMS PCR对野生型和突变型等位基因检测时，可在引物设计过程中将等位基因两条上游引物中3’端核苷酸不同，两条引物分别对野生型和突变型特异，在耐热Taq DNA聚合酶作用下，与模板不能完全匹配的上游引物将不能完全形成互补碱基对，从而形成错配，链延伸反应因3’,5’-磷酸二酯键形成障碍而受阻，不能产生PCR产物，而与模板匹配的引物体系则可以扩增出相应的PCR产品，Taqman探针上相应的荧光基团可产生荧光信号被仪器检测到，最终计算出对应的△CT值。

图1（图源于网络，侵删）

翌圣生物研发小伙伴经过不懈努力

研发出了自己的ARMS-PCR试剂（Cat#13755ES）

产品性能咋样？

小编带你一探究竟~

选择性高：可检测多种基因突变；

特异性强：采用ARMS引物和探针进行检测，有效提高检；

灵敏度高：突变型引物可检测低至10 ng/μL DNA中0.05%的突变；

判读方便：结果直观，客观判读结果，不需人工计算△CT值；

操作便捷：适用于多种PCR仪器，90分钟内完成上机检测。

实验：模板投入量5 μL，突变型引物扩增 10 ng/μL 野生型模板和等拷贝数突变型质粒

位点：KRAS G13D （38G>A）

红色：13755；蓝色：竞品

图2 野生型引物扩增野生型模板和突变型模板。根据扩增曲线发现野生型模板无起峰或野生型和突变型Ct值差异≧6-8，达到实验预期，成功区分野生型和突变型基因。

实验：自混标准品制备方法（50%）：50 μL 10 ng/μL 野生型DNA+50 μL3×10³ copies 突变型质粒。

位点：KRAS G13D(38G>A)

图3 根据扩增曲线发现，产品在0.05%的浓度时仍有较好的表现。

实验：购买的5% 的标准品（50 ng/μL ) 用文库稀释液稀释成10 ng/μL ，进一步用10 ng/μL 293 gDNA 稀释成0.1% 和0.05%。

位点：L858R

红色：13755；绿色：竞品

图4 根据扩增曲线，位点在10 ng/μL 的野生型gDNA 背景下检出率可高达0.05% ，并经过商业化标准品进一步验证，说明我司产品检出率良好。

实验：红色：-20℃；绿色：真实反复冻融5次；蓝色：真实反复冻融8次；紫色：真实反复冻融10次。

位点：L858R

图5：13755 试剂真实反复冻融10次不影响其扩增以及阻滞效果。

实验：红色：-20℃；绿色&紫色：37℃ 7天

位点：L858R

图6:13755 试剂37℃，7天不影响其扩增以及阻滞效果。