高敏HBsAg 检测可提高HBsAg的检出率，促进乙肝管理

编者按：急性和慢性乙肝病毒感染的诊断一般都依赖HBsAg的检测，大多数传统HBsAg检测方法的检测下限都较低，目前HBsAg精准定量的最低检测下限约在0.05 IU/mL左右。隐匿性HBV感染 (OBI) 患者通过传统检测方法HBsAg检测不到，但是血清或肝脏活检HBV DNA可检测到。

尽管OBI被认为是静止的慢乙肝，然而OBI患者依然有肝脏相关并发症和肝癌 (HCC) 的发生风险，还可能通过输血或器官移植传播HBV，更重要的是OBI是HBV再激活的主要原因，尤其是正在接受免疫抑制治疗时。近几年，各种形式的免疫抑制剂的开发取得了很大进展，免疫抑制剂的迅速扩大使用增加了未确诊的OBI患者HBV再激活的风险。

HBsAg检测不到的OBI患者的诊断主要依赖于血清或者肝活检HBV DNA的检测。然而，OBI患者血清的HBV DNA水平通常低于检测下限，肝活检的风险也限制了肝脏HBV DNA的检测，因此HBsAg和HBV DNA检测的灵敏度都亟待提高。近来免疫分析技术的进步使HBsAg的检测更加灵敏，新一代高灵敏HBsAg检测方法已经出现，如雅培的ARCHITECT HBsAg NEXT检测法 (HBsAg NEXT)，其检测下限 (LLOD) 为0.0052 IU/mL，是传统检测方法的2-18倍。

香港大学医学系袁孟峰教授团队开展的一项研究评估比较HBsAg NEXT和其他传统检测方法的检测性能，并评估HBsAg NEXT检测OBI患者HBsAg的能力，近日该项研究结果在J Clin Microbiol上发表：HBsAg NEXT检测性能更佳，在通过传统方法检测为HBsAg阴性的献血者、健康社区人群或获得HBsAg清除的患者中仍能检测到HBsAg，使OBI患者的HBsAg检出率提高5-7%，且能比传统检测方法更早检测到HBsAg，从而有助于更早识别更多的HBV携带者，预防OBI相关的HBV传播和再激活。

受试者特征

该研究纳入1138例受试者，其中1038例为OBI患者，100例为从社区招募的HBsAg阴性受试者，从受试者档案中检索存储的样本进行分析。

这些受试者被分为4组：

第1组包括200例HBsAg阴性、HBV DNA阳性的献血者，并在2009年6月至2020年4月进行随访；

第2组包括38例HBsAg阴性、抗-HBc阳性的受试者，这些受试者接受含利妥昔单抗治疗或同种异体造血干细胞移植，并于2011年9月至2014年11月进行随访；

第3组包括800例获得HBsAg清除的受试者；

第4组是在2015-2016年进行的一项香港全范围社区监测研究中随机选择的100例健康的HBsAg阴性受试者。

研究方法

实验室检测方法：HBsAg NEXT的检测下限 (LLOD) 为0.0052 IU/mL，检测HBsAg期间，样本信号cut off值 (S/CO) ≥1的样本被认为有初始应答，有初始应答的样本一式两份重复测试，如果至少有一个重复测试结果为有应答，则进行NEXT验证性试验确认结果。

传统的HBsAg检测使用PRISM HBsAg检测方法 (LLOD 0.011 IU/mL)、Qual II HBsAg检测方法 (LLOD 0.02 IU/mL)、Elecsys II HBsAg检测方法 (LLOD 0.032 IU/mL)、MUREX HBsAg检测方法 (LLOD 0.05 IU/mL)。

在TIGRIS平台上使用Procleix Ultrio Plus Assay进行NAT测试 (LLOD 3.4 IU/mL)，HBV DNA定量检测采用COBAS HBV检测方法 (LLOD 10 IU/mL)。 抗-HBs检测采用Elecsys 抗-HBs检测方法 (LLOD 2 IU/L) 或Architect抗-HBs检测方法 (LLOD 10 IU/L)。

研究结果

1、HBsAg NEXT检测性能，包括精密度、样本携带污染情况、血清转换敏感度优于传统HBsAg检测方法

总的来说，阳性受试者样本的批内和实验室内%CVs < 6%。

HBsAg-NEXT检测方法精密度分析

在通过HBsAg NEXT对3个样本的5份副本的2次独立检测的结果中，受保护阴性样本和未受保护阴性样本间的平均S/CO差值为0.01 (约5%)，没有显著差异 (P > 0.05)。

HBsAg NEXT检测方法样本携带结果

在9个血清转换面板的115份样本中，通过HBsAg NEXT检测有60% (69份) 检测到HBsAg阳性，而通过Elecsys II HBsAg和Qual II HBsAg检测方法分别有35% (40份) 和38% (44份) 检测到HBsAg阳性。通过HBsAg NEXT检测方法首次确认HBsAg阳性的天数 (平均38.8天) 少于Elecsys II HBsAg (平均54.2天) 和Qual II HBsAg检测方法 (平均52.0天)，但高于HBV DNA的NAT检测方法 (平均29.6天)。与Elecsys II HBsAg和Qual II HBsAg检测方法相比，HBsAg NEXT检测方法将早期血清转换窗口期分别缩短了15.4天和13.2天，血清转换敏感度增加了22–25%。对于面板6272和面板11000，HBsAg NEXT检测方法在第46天和第0天 (首次抽血) 开始就可以检测到HBsAg，均比Elecsys II HBsAg和Qual II HBsAg检测方法早48天和26天。从第0天开始，面板6272和面板11000都检测到抗-HBs，这表明HBsAg NEXT检测方法能够在存在抗-HBs的情况下检测到HBsAg，且明显早于Elecsys II HBsAg和Qual II HBsAg检测方法。

HBsAg NEXT与其他HBsAg检测方法的血清转换数据

2、HBsAg NEXT可以检测到隐匿性HBV感染者的HBsAg

各组受试者HBsAg检出情况：

第1组 (200例确认为OBI的献血者) 根据PRISM HBsAg方法HBsAg检测不到，但通过Procleix NAT方法可以检测到HBV DNA，并通过PCR检测确认为HBV DNA阳性，140例受试者有可用的抗-HBs数据，其中68例 (49%) 抗-HBs检测不到 (< 10 IU/L)。通过HBsAg NEXT对这200份受试者的样本进行检测和验证，5% (10份) 重复测试呈阳性，平均S/CO为3.78，这10份阳性样本采用MUREX HBsAg或Elecsys II HBsAg方法进行交叉检测，HBsAg均呈阴性；这10例受试者中，9例具有可用的抗-HBs数据，但抗-HBs均 < 10 IU/L。

第2组 (38例接受免疫抑制治疗的受试者，20例发生HBV再激活，18例未发生HBV再激活) 在开始治疗前，均未检测到HBsAg (通过Qual II HBsAg、 Elecsys II HBsAg及HBsAg NEXT检测方法)，但都检测到抗-HBc，未发生HBV再激活的受试者的中位抗-HBs水平 (56.5 IU/L) 高于发生HBV再激活的受试者 (28 IU/L；P = 0.07)。随访结束时，在18例未发生HBV再激活的受试者中，通过HBsAg NEXT未检测到HBsAg；对于发生HBV再激活的受试者，在HBV再激活前4至20周采集的20份血清样本中，有5%样本 (1份) 通过HBsAg NEXT检测到HBsAg，该样本是从在HBV再激活前4周接受了含利妥昔单抗治疗的患者采集的。

第3组 (800例获得HBsAg清除受试者) HBsAg检出率为7.3% (59/800)：在获得HBsAg清除后0.5-29.7年收集到的样本通过HBsAg NEXT进行检测，HBsAg清除后0-3年 (90例)、> 3-5年 (146例)、> 5-8年 (174例)、> 8-11年 (132例) 和 > 11年 (258例) 样本的HBsAg检出情况为：27.8%、8.2%、6.9%、3.8%和1.9%。

获得HBsAg清除患者通过HBsAg NEXT方法HBsAg的检出情况 A. HBsAg清除后不同时间点采集的800份样本的HBsAg检出率 B. HBsAg清除后从39例受试者采集的纵向样本的HBsAg检出率

第4组 (100例健康的社区受试者) 经Elecsys II HBsAg确认为HBsAg阴性。对储存的样本进行检测，29例 (29%) 抗-HBc阳性；通过HBsAg NEXT方法有7% (7例) 受试者检测到HBsAg，且这7例抗-HBc均为阳性，而在另外93例HBsAg阴性受试者中，有22名 (23.7%) 为抗-HBc阳性 (P < 0.0001)。

排除18例未发生HBV再激活的非OBI患者 (第2组)，在1020例接受检测的OBI患者中 (第1-3组)，有6.9% (70例) 通过HBsAg NEXT检测出HBsAg阳性。即使是在健康的社区受试者中，也有7%通过HBsAg NEXT检测到HBsAg，与传统检测方法相比，HBsAg检出率增加约6–7%。

通过HBsAg NEXT检测方法在4组受试者中的HBsAg检出情况

 注：在接受免疫抑制治疗后未发生HBV再激活的18例HBsAg阴性受试者不包括在本表中。

肝霖君有话说

一项技术的推陈出新必然有其存在和推广的意义，而面对疾病的发生也要有积极接受和乐观面对的心态和勇气并进一步寻求可能解决的办法。

近几年开发的这种具有更高性能的HBsAg检测方法——HBsAg NEXT已被证实对各种HBV基因型和常见突变均具有一致的敏感性，分析精密度、样本携带污染情况也令人满意，且有可能提早对急性乙肝感染的诊断。OBI患者对社会的危险主要体现在未被诊断前通过献血或亲密接触造成的HBV传播而引发的社会影响，但由于传统的HBsAg检测的灵敏度限制以及HBV DNA检测普及程度不够，这部分HBV感染者常常被忽略。对于社会而言，HBsAg NEXT检测方法的推广应用也许有助于减轻乙肝疾病负担，进一步阻断HBV的传播，加快“消除乙肝”目标的实现；对于个人而言，该技术的开发可以更精确地识别出个体是否是HBV感染者，如果不是，那么对乙肝这个疾病可以就此放心 (通过乙肝疫苗接种产生保护性抗体)，因为此后大概率不再有感染乙肝或者成为乙肝传播者的风险，如果是，则可以通过积极的抗病毒治疗策略实现乙肝临床治愈。目前临床治愈的是采用常规的HBsAg精准定量来判断，如果能采用更高灵敏度的HBsAg检测方法，如HBsAg NEXT，临床治愈的持久性可能会更佳，是否就更接近完全治愈呢？

肝霖君认为，个体和社会对乙肝目前的检测、诊断、治疗情况和治疗成本效益形成一个科学的认知对实现“消除乙肝”这个伟大的目标至关重要，而HBsAg NEXT检测方法的推广能起到促进作用。

参考文献：

Wong D, Chen C, Mak L, et al. Detection of the Hepatitis B Surface Antigen in Patients with Occult Hepatitis B by Use of an Assay with Enhanced Sensitivity[J]. Journal of clinical microbiology, 2022, 60(2): e0220421.