【BLOOD】探索原发性浆白的基因和转录特征，t(11:14)对预后的影响

  原发性浆细胞白血病  

浆细胞白血病(PCL)是一种罕见的侵袭性多发性骨髓瘤(MM)，其定义为外周血中浆细胞>20%和/或浆细胞计数>2*109/L（当然这一标准已有争议），PCL占多发性骨髓瘤病例的2～4%。如果是“新发”疾病，则称为原发性浆细胞白血病(pPCL)，如果是既往已知骨髓瘤的白血病转化，则称为继发性浆细胞白血病(sPCL)；pPCL占PCL的60-70%。

与MM相比，pPCL具有独特的生物学和临床特征，如诊断时年龄较小、表现更具侵袭性伴频繁的髓外疾病和较少发生溶骨性病变等。尽管MM治疗的预后已经有较大的改善，但pPCL的预后仍然较差，中位总生存期仅有18-36个月。

然而，鉴于pPCL的低发病率和高异质性，当前对其生物学知识仍高度缺乏，尤其是造成其高侵袭性的分子发展过程。

为了解决这个问题，法国图卢兹第三大学Jill CORRE教授牵头了迄今为止pPCL样本量最大的研究，利用90例pPCL患者的DNA和RNA序信息，描绘了pPCL独特的基因组和转录组特征，以及它们与生物学和临床特征的关系；还描绘了伴t(11;14) pPCL的生物学和临床特异性，以及该亚组患者基因组特征和临床结局更佳的特性。

作者分析了2014-2020年的90例pPCL患者的骨髓样本，使用CD138免疫磁性细胞分选（纯度 > 90%）从骨髓样本中分选浆细胞，然后使用NextSeq 500(Illumina)进行DNA和RNA测序，并将从pPCL样本中获得的数据分别与907例和288例新诊断MM的数据进行对比。

为了根据t(11;14)状态评估pPCL患者的总生存期，作者选择了2000-2020年间确诊的128例临床资料可用，且随访 > 18个月或死于pPCL的患者，并通过NGS或FISH检测是否存在t（11;14）（结果：NGS 53/90例患者，FISH为另外75例患者，共计128例）。

  结果

与新诊断的多发性骨髓瘤相比，90例pPCL患者具有独特的基因学特征，详见图1A。在细胞遗传学异常方面，与MM相比，pPCL患者在t(11;14)(51.1%vs 23.1%,p < 0.001)和t(14;16)(14.4%vs 3.4%,p < 0.001)的发生率更高，但t(4;14)的发生率相同(11.1%vs 9.8%,p = 0.7)，超二倍体的频率较低(20.0%vs 56.9%，p < 0.0001)，且5号染色体三体较少(7.8%vs 44.4%，p < 0.0001)。

此外，与MM相比，pPCL的继发性不良病变发生率更高，如17p缺失(30.0%vs 9.5%，p < 0.0001；包括TP53双等位基因失活12.2%vs 3.1%，p < 0.0001）和1q gain（53.3%vs 31.9%，p < 0.001；包括11.1%vs 5.3%的1q amplification，p < 0.05），以及1p32缺失(24.4%vs 9.4%，p < 0.001)。

尽管pPCL具有异质性，但它也存在特定的基因组特征，包括t(11；14)（约一半）和高危基因组特征的发生率较高。

RNA 测序结果也强调了pPCL 的特异性。事实上，非监督的分层聚类分析（unsupervised hierarchical clustering analysis）显示，pPCL(n = 80)和MM(n = 288)之间有两个不同的聚类组（图1B）。

pPCL中2835个基因上调，4070个基因下调。在上调最多的基因中，作者发现有FAM72D（1q21的增殖标志物）和TOX2（属于IFM定义的15个基因预后分类器）（图1C）。有趣的是，成骨细胞分化抑制剂DKK1和破骨细胞活化因子M-CSF也存在下调。

GSEA分析显示存在参与细胞周期、脂肪酸代谢和剪接体的基因上调，以及参与粘附、细胞外基质、KRAS信号和B12维生素代谢的基因下调（图1D）。

上述的生物学差异可以解释pPCL和MM在临床特征的差异，如pPCL中增殖性更高和髓外部位扩散较多，但溶骨性病变较少。

以前的pPCL小规模研究也提到了剪接体相关基因上调，以及粘附分子和细胞外基质蛋白下调。

考虑到pPCL中t(11；14)的频率较高，作者还专门描述了该亚组患者的特征。

伴t(11;14)与无t(11;14)的患者相比，具有t(11;14)的pPCL TP53突变率也更高(34.0%vs 16.0%,p = 0.054)，但这一情况仅半数病例与17p缺失相关，而非t(11;14)亚组的所有TP53突变均为双等位基因失活。重要的是，伴t(11;14)与无t(11;14)的患者相比，具有t(11;14)的pPCL不良细胞遗传学异常较少，如1q gain (29.7%vs 79.1%,p < 0.0005)，包括1q amplification (2.1%vs 20.9%,p < 0.01)和1p32缺失(8.5%vs 41.9%,p < 0.001)（图2A）。

只有10%的伴t(11;14)pPCL在17p缺失、1q gain和1p32缺失中有至少2个病变，而无t(11;14)亚组为46%(p < 0.0005)。此外，根据定义，t(4；14)和t(14；16)pPCL仅存在于非t(11；14)亚组中。正如预期，伴t(11；14)pPCL患者的中位总生存期显著长于无t(11；14)患者（分别为39.2个月vs 17.9个月，p = 0.002），所有这些差异均转化为t(11;14)更好的结局（图2B）。

基因表达谱显示，伴和无t(11；14)的pPCL聚集在两个不同的聚类组中（图2 C）。伴t(11;14)的pPCL中875个基因上调，1214个基因下调；正如预期，上调最多的基因是CCND1。正如Todoerti等最近所证实，19个BCL2家族基因的几个成员在pPCL亚组之间也有显著表达差异。本研究中，作者发现PMAIP1和BCL2L15过表达，而BCL2L1和BAK1低表达；此外尽管倍数差异< 2，但与非t(11;14)亚组相比，BCL-2和BCL2-L2也过表达，而BAX为低表达。并且如最近伴t(11；14) MM那样，伴t(11；14) pPCL也存在未成熟B细胞标志物PAX5和CD79A上调（图2D），这一结论证实伴t(11；14) pPCL存在BCL2依赖性，并表明该亚组具有独特的致癌机制。

GSEA分析也证实了参与细胞周期、NRAS和KRAS通路、粘附和细胞外基质的基因下调（图2E）。值得注意的是，尽管伴t(11;14)的小簇pPCL与非t(11;14)亚组存在于同一分支中，但BCL2成员家族和CCND1表达和结果与伴t(11;14)的大簇pPCL相似。

作者认为伴t(11;14) pPCL是一个独特的存在，它可能表现为增殖较少，这与其预后较好的结果是一致的，也可能更依赖于BCL2。Venetoclax是一种BCL2抑制剂，对t(11;14)MM有疗效证据；本研究与Venetoclax在PCL患者中疗效的报道一致，并支持其在临床试验中进一步评价，尤其是针对t(11;14)患者。

  总结

总之，本研究纳入了迄今为止样本量最大的pPCL患者，并使用高通量技术进行基因排序，证实pPCL具有独特的基因组和转录组特征，这也可以解释其生物学和临床特征。

作者还描述了伴t(11;14) pPCL的生物学和临床特异性，这与MM中t(11;14)表达增加3相一致，且MM中t(11;14)与BCL2治疗敏感性有关，从而支持使用新的治疗方法，如BCL2抑制剂3（这也是有个案的，比如杜鹃、傅卫军教授等报道的2），但仍需前瞻性研究证实。

作者认为，将本研究的结果扩展至pPCL是有意义的，即使按照5%循环浆细胞的定义。

参考文献

1.Titouan Cazaubiel, Xavier Leleu, Aurore Perrot,et al.Primary Plasma Cell Leukemia displaying t(11;14) have specific genomic, transcriptional and clinical feature. Blood.2022 Feb 16;blood.2021014968.doi: 10.1182/blood.2021014968

2.强琬婷,卢静,贾雁春,等.基于维奈托克的方案治疗t（11；14）复发难治多发性骨髓瘤一例并文献复习.《白血病·淋巴瘤》2021年30卷3期 166-170页

3.Jin Liu , Xiaoxia Hu , Yanchun Jia,et al.Clinical features and survival outcomes in IgD myeloma: a study by Asia Myeloma Network (AMN).Leukemia . 2021 Jun;35(6):1797-1802. doi: 10.1038/s41375-020-01060-w.