【衡道 | 干货】特殊染色在胃部疾病诊断中的应用

HE 染色即苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）染色可以清晰的显示组织和细胞的形态结构，它是一种快速、经济、且易于掌握的方法，是病理实验室常规的组织染色方法。但它不能回答病因学、组织发生及发病机制等方面的许多问题。鉴于此，人们一直寻找其它方法探讨上述问题，并将这种在特殊情况下使用的染色技术称之为特殊染色，简称特染[1]。换言之，特殊染色是用于显示标本中一些特殊的组织结构（成分）或细胞的染色，其目的是有利于在光镜下与其它组织或细胞区分，更好地了解观察对象的分布特点、数量变化以及达到鉴别和研究的作用。

特殊染色的应用十分广泛，已有较多的专著专门介绍。在过去的 30 多年里，由于免疫组织化学技术的迅速发展与广泛应用，特染的应用日趋减少，但实际上它在诊断病理学及研究中仍然有着不可忽视的作用。尤其是近 30 年来一些特殊染色方法在原来的基础上不断改良和创新，并与病理学理论、新技术方法相结合而逐渐完善，逐渐形成其他技术难以取代的染色方法[2]。特殊染色的优势在于可在同一张切片上以不同的色调显示不同的成分，可以一目了然地从整体结构上显示出各种不同的组织成分，进行对比观察可以起到相互印证的作用。

通常我们在胃部病理诊断中常用到以下 4 种类型的特殊染色技术：

胃幽门螺旋杆菌（Helicobacter Pylori，HP）WS（Warthin-Starry)染色

肠上皮化生的阿利新蓝（AB）-过碘酸雪夫（PAS）染色

弹力纤维染色

刚果红淀粉样物染色

（一）胃幽门螺旋杆菌

（Helicobacter Pylori，HP）WS 染色

幽门螺旋杆菌HP是 1982 年由澳大利亚学者 Marshall 和 Warren 通过延长培养时间从慢性活动性胃炎病人胃粘膜中分离出的一种上消化道致病菌，它们可以通过水、食物或餐具进入人体后居住在消化道，它们喜欢寄生在胃粘膜组织中，在胃部的酸性环境中存活，且能破坏表面上皮细胞分泌的中性粘蛋白，有研究表明 67%-80%的胃溃疡和 95%的十二指肠溃疡是由 HP 引起的。越来越多的证据表明 HP 与远端胃癌和胃淋巴瘤的发生有关。胃黏膜活检标本 HP 的准确鉴定，有助于指导临床规范化应用药物治疗。因此，如何在伴有炎性改变的胃活检标本中快速、正确地检出 HP 十分重要。

HP 检测常用的染色方法是 WS 染色，染色后 HP 呈黑色，细胞核深褐色，细胞质浅黄色，对比度明显。是检测胃幽门螺旋杆菌的一种方法。其全称是病理组织学切片 Warth-Starry 染色法，又称银染色法。染色的原理是，HP 具有嗜银性，可从银液中吸附银离子，经还原被处理后，其内吸附的银离子被还原为黑色的金属银而显色。（图 1& 图 2)

图 1.胃体小弯组织 HP 的 WS 染色，HP 呈杆状、黑色。

细胞核黑色，对照背景黄色。（400X）

图 2. 胃体小弯组织 HP 的 WS 染色，HP 呈杆状、黑色。

细胞核黑色，对照背景黄色。（400X）

除了上述经典的检测方法以外，HP 的染色方法还有很多种，像斯坦氏染色、吉姆萨染色、美蓝染色法、碱性品红- 孔雀绿染色等等，相较而言，WS 银染中的 HP 呈黑色，细胞质浅黄色，对比度好，阳性率高。

（二）肠上皮化生的阿利新蓝（AB）-

过碘酸雪夫（PAS）染色

肠上皮化生是指胃粘膜上皮细胞被肠型上皮细胞所代替，即胃粘膜中出现类似小肠或大肠粘膜的上皮细胞，这也是胃粘膜的常见病变，见于多种慢性胃病。肠上皮化生细胞来自胃固有腺体颈部未分化细胞，这部分细胞是增殖中心，具有向胃及肠上皮细胞分化的潜能。正常胃黏膜上皮分泌中性黏液，经 AB-PAS 染色呈红色（图 3）。小肠或大肠的黏膜除了分泌中性黏液外，还可以分泌酸性黏液，经 AB-PAS 染色呈蓝色（图 4），酸性黏液又分为硫酸和唾液酸黏液。二者混合后的中性、酸性黏液混合物呈紫色（图 4）。

当出现慢性萎缩性胃炎时，可能会伴有肠上皮化生的情况，HP 感染也是胃黏膜肠化生的主要病因之一，有实验以及调查结果表明肠化生的严重程度与 HP 感染呈正相关关系。慢性胃病组织、癌旁组织的肠上皮化生，可采用 AB-PAS 黏液组织的化学染色来诊断，而肠上皮化生细胞分泌的黏液确无法细化区分，进而采用 HID—AB 黏液组织化学染色，可区别肠上皮化生细胞分泌的硫酸黏液和唾液酸黏液，分别被染成棕黑色和蓝色。为诊断区分肠化类型，可以行 AB-PAS+HID-AB 联合染色来区分。

图 3.胃贲门活检组织 AB/PAS 染色。（400X）

图 4.肠活检组织 AB/PAS 染色。（400X）

（三）弹力纤维染色

弹力纤维成细丝状，有分支，富有弹性，容易伸展。其化学成分为弹性蛋白，是一种极难溶解的硬蛋白，屈光力强，在新鲜标本上呈黄色发亮的细线条状。HE 染色时，弹力纤维呈亮粉色。但如因病变而乱断裂或异常增生，就不易判别。弹力纤维是血管的重要成分之一（图 5），很多疾病都可引起弹力纤维的显著变化，如动脉硬化，慢性支气管炎等均可引起弹力纤维纵行破裂、散乱、断裂成碎片或颗粒等。因此，弹力纤维的特殊染色对于研究许多组织、脏器病变时弹力纤维的破坏及增生情况很有价值。

弹力纤维染色在胃癌中识别率比较高，可以帮助判断胃肿瘤的浸润深度，进而评估肿瘤与浆膜的位置关系(图 6)；另外，突破浆膜弹力纤维层是影响胃癌患者预后的不良因素，突破弹力纤维层的患者更易发生淋巴结转移淋巴脉管侵犯，弹力纤维染色可用于划分胃癌高危人群，因此，当肿瘤浸润深度超过固有肌层时，为了增加病理报告的规范性、准确性及对临床医师的提示性，弹力纤维染色有必要作为常规染色方法检测，肿瘤与浆膜弹力纤维层的位置关系也需做出说明。

图 5.远端胃组织内部血管壁弹力纤维染色内对照。（400X）

图 6.远端胃组织弹力纤维染色，未累及浆膜面。（400X）

常用的弹力纤维的染色方法有：铁苏木素法、Weigert 氏雷锁辛品红法、Gomori’s 醛品红法、地衣红染色法、维多利亚蓝染色法等。

（四）刚果红淀粉样物染色

刚果红淀粉样物染色主要应用于显示组织中淀粉样物质。淀粉样物质是一种嗜伊红性物质，其性质一般认为属于糖蛋白成分。组织中出现此种物质称淀粉样变性，应用于诊断系统性或局限性淀粉样物质沉着症，诊断、鉴别某些肿瘤（如甲状腺髓样癌、胰岛细胞癌、肺小细胞鳞癌、钙化上皮瘤等）。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。（图 7）

淀粉样变性是由于“淀粉样”物质在皮肤、心脏、肾脏、消化道、神经系统等脏器浸润引起一系列临床综合征，消化系统淀粉样变性发病率低，文献以肝脏受累多见［3］，累及胃肠道淀粉样变者可能无症状或出现各种非特异性临床表现，包括呕吐、腹泻、便秘、假性梗阻、胃肠道出血和穿孔。内镜表现也各不相同，包括细颗粒外观、黏膜脆性、糜烂、浅溃疡、瓣膜连接增厚和多发性息肉样突起[4]。淀粉样物质主要沉积在黏膜下组织的血管壁，因此，内镜下活检时应有一定的深度，同一部位深挖活检，同时也要多点取材。及时行刚果红染色可提高确诊率。

图 7.刚果红染色，胃小弯侧粘膜固有层显著淀粉样物质沉积。(100×)

通过介绍以上这几种胃部常用到的特殊染色，我们可以看到特殊染色是化学染色技术当中核心而又基础的内容，此种技术经长时间的改进与发展，现已日臻完善，成为其它技术较难替代的染色方法。本次我们讨论的四种特殊染色在胃部肿瘤检查诊断中的应用，在病理诊断中起到了决定性的作用，在诊断中也起到了不可替代的作用。由此可见，在病理学诊断中，特殊染色具有举足轻重的作用，能够帮助我们将相关病理学问题予以有效解决。

自动化特殊染色平台配合即用型试剂对于特染技术的应用具有重要的意义，它可以解决长期以来手工特染操作所面临的技术要求高、操作步骤繁琐、染色稳定性不佳等问题，能够在减少手工操作的同时保证染色结果的高质量和稳定性，使得更多实验室能够有效的应用特染这项技术做出更准确的疾病诊断。

参考文献：

［1］王伯沄主编.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社,2000.

［2］梁英杰主编.临床病理学技术[M].北京:人民卫生出版社,2012.

［3］中国系统性淀粉样变性协作组，国家肾脏疾病临床医学研究中心.系统性轻链型淀粉样变性诊断和治疗指南［J］.中华医学杂志，2016.

［4］CHOI J, RHA SE, KIM JS, et al. An unusual cause of hematochezia and aneurysmal small bowel dilatation [J]. Gastroenterology, 2016,

本文作者：山东省立医院 苏贞辉  

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