端点汇创意 如何研究组织学和细胞学

       这期小编和大家了解一下组织学和细胞学其他的研究技术，可以利用显微镜技术与其他的组织学技术相结合，其他的组织学技术包含免疫组织化学与免疫细胞化学技术、原位杂交技术、体外培养技术、组织和细胞的定量技术等，理解和掌握这些技术才能更好探究组织学与细胞。

       首先我们要了解的是组织化学技术与细胞化学技术。

       一、组织化学与细胞化学技术

       组织化学与细胞化学技术是利用化学试剂与组织、细胞内某种待检测物质发生化学反应通过显微镜的镜下观察，对其形态、颜色、数量的变化进行分析和研究，了解机体不同状态下组织、细胞的变化。

图1端点医药原创

       1、糖类显示法：原理是利用强氧化剂，将多糖分子中的乙二醇氧化，氧化后形成乙二醛与Schiff试剂中的亚硫酸品结合，形成不容易火的紫红色沉淀，即多糖和糖蛋白存在的位置呈现紫红色。其中，基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性、淀粉样物质等显示阳性反应便呈现紫红色，如图2：

图2-PAS反应显示大鼠小肠绒毛杯状细胞黏蛋白-来源于组织学与胚胎学（第二版）

       2、酶类显示法：利用最终产物显示的深浅来判断酶活性的有无和强弱。不同的酶显示方法不同，例如酸性磷酸酶催化底物β-甘油磷酸钠水解产生磷酸根，然后以Pb2+捕获磷酸根，生成无色、电子致密的磷酸铅沉淀，在电镜下观察，再用硫化铵与磷酸铅反应，形成黑色硫化铅沉淀，可在光镜下观察。

       3、脂类显示法：组织块可以用甲醛固定，冷冻切片。常用染料如图3：

图3端点医药原创

       4、核酸显示法：显示DNA，切片须经稀盐酸处理，使DNA水解，醛基暴露采用Schiff试剂处理后形成紫红色反应物；同时显示DNA和RNA，甲基绿-派若宁反应，甲基绿与细胞核内的DNA结合呈蓝绿色，派若宁与核仁以及胞质内的RNA结合呈红色。

       二、免疫组织化学与免疫细胞化学技术

       免疫组织化学与免疫细胞化学技术是指已经标记的特异性抗体与组织、细胞内的特异性抗原结合，检测组织、细胞中抗原性物质存在和分布的一种技术。特点是特异性强，敏感度高。

       此技术的原理是利用抗原与抗体特异性结合。抗体是指机体由于抗原的刺激而产生的具有保护作用的蛋白质，是一种由浆细胞（效应B细胞）分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质。可以识别特定外来物的一个独特的特征，该外来物称为抗原。抗原是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并与免疫应答产物抗体和至敏淋巴细胞结合，发生免疫效应的物质，具有免疫原性和抗原性，如图4。

图4端点医药原创

       免疫组织化学与免疫细胞化学技术是利用标记抗体处理样品（组织切片或培养细胞）后，抗体与相应的抗原特异性结合，通过在显微镜下观察标志物而了解待检测肽或蛋白质的存在与发布。免疫细胞染色方法分为直接法和间接法如图5。

图5端点医药原创

       目前间接法应用广泛，组织或细胞中有相应抗原存在时，抗原+第一抗体+标记的第二抗体复合物（如图6）便会形成并呈现染色的状态。

图6免疫组织化学间接法-来源于组织学与胚胎学（第二版）

       其中常用的标记物有辣根过氧化酶（如图7）、碱性磷酸酶和荧光素等。

图7免疫组化学显示胃壁Bax阳性细胞-来源于组织学与胚胎学（第二版）

       免疫荧光细胞化学技术即用荧光素标记抗体处理样品，在荧光显微镜下观察；免疫电镜技术指用胶体金、铁蛋白等标记抗体处理标本后，在电镜下观察。

       三、原位杂交技术

       原位杂交技术即核酸分子杂交组织化学技术。可分为基因组原位杂交技术、荧光原位杂交技术、多彩色荧光原位杂交技术和原位PCR。基本原理是根据核酸分子单链之间互补的碱基序列，将有放射性或非放射性的探针与组织、细胞内待测的DNA片段或者mRNA互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，通过标志物的显示，在光镜和电镜下观察待测核酸的存在和分布。

       四、体外培养技术：

       目前最常用的为细胞培养技术，要求培养条件适宜，例如养分及温湿度符合条件，防止污染。

       通过分离组织首次培养的细胞称为原代培养，细胞增值到一定程度需要传代继续进行培养称为传代培养。经过长期培养而形成的细胞群称为细胞系；细胞株指用细胞克隆或单细胞培养出对纯种细胞。细胞系和细胞株都可置于液氮内长期冻存。

       利用细胞培养技术在体外模拟构建机体组织或器官的技术称为组织工程，基本方法如图8：

图8端点医药原创

       组织和细胞的定量技术；主要有显微分光光度术、图像分析术以及流式细胞术。显微分光速术应用显微分光光度计依据各种物质分子对光的选择性吸收，在显微镜下定量分析。图像分析术即形态计量术，对组织和细胞进行二维和三维的形态学测量方法。流式细胞术是一种细胞分类和定量技术。作用如图9：

图9端点医药原创

       随着小编了解组织学与细胞学的研究工具与技术已经过两期，通过这两期的介绍，我们对组织学与细胞学的研究工具与技术有了一个初步的了解，由此我们是不是也认识到要想探究组织学与细胞学的奥秘，研究工具与研究技术是必不可少的呢！它们是我们与微观世界连通的桥梁，是非常重要的存在！继续跟着小编认识组织学与细胞学中奇奇怪怪的微观世界吧！

       内容来源于组织学与胚胎学（第二版）