义翘神州成功开发出奥密克戎（Omicron）突变假病毒！

       自奥密克戎（Omicron）序列公布以来，Spike蛋白上的大量突变引起全球的高度关注。12月8日非洲健康研究所团队公布了奥密克戎突变株的第一份血清学调查数据，结果显示接种疫苗者的血清对Omicron的中和活性下降了41倍，推测Omicron可能存在显著的免疫逃逸，但仍需更多研究来明确Omicron的传染性、致病性。

       义翘神州迅速投入研发力量，开发出Omicron假病毒（Pseudorirus），具有无致病性、安全性高、可操作性强的特点，可用于高通量中和抗体和抗病毒药物筛选，以及在细胞水平上研究中和抗体和疫苗对奥密克戎突变株的有效性，并第一时间提供给广大新冠病毒科研人员，助力全球科技抗疫。

奥密克戎假病毒特点

• 以HIV-1慢病毒为基础载体，在293T细胞中包装成奥密克戎（Omicron）假病毒(Cat: PSV016)

• 病毒表面表达Omicron Spike全长蛋白，包含超过35个突变位点（序列GISAID号：EPI_ISL_6640917）。

• 模拟新冠病毒经细胞表面受体ACE2而侵入细胞的机制，感染目的细胞的程度与发光信号成正比，与抗体的中和活性呈负相关。

• 灵敏性高：携带荧光素酶报告基因，Luciferase发光值高，达107RLU (Relative Light Unit)。

• 安全性高：可在P2安全等级实验室（BSL-2）中进行检测。

• 高通量：可用于中和抗体、抗病毒药物筛选与大量样本的检测。

• 种类多：除Omicron假病毒外，还现货供应Alpha、Beta、Delta等VOC和VOI突变株假病毒。

• 定制服务：义翘神州同时提供新冠假病毒中和检测服务和假病毒定制服务。

奥密克戎假病毒产品应用

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中和抗体、抗病毒药物的筛选（可用于ACE2竞争和非竞争两种机制中和药物的筛选）

02

免疫有效性、疫苗保护力的评价

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可作为替代活病毒的标准品

奥密克戎假病毒产品数据

       义翘神州检测了新冠潜在广谱中和抗体对奥密克戎（Omicron）假病毒的中和能力，结果发现：部分抗体对Omicron假病毒丧失中和能力，但义翘神州自主研发的中和抗体（货号：402592-MM117）能中和Omicron假病毒（IC50=9.42 ug/mL），推测该株抗体保持中和能力的原因是由于其识别表位为相对保守的非ACE2竞争表位。根据以往抗体筛选经验，虽然非ACE2竞争表位抗体的中和能力大多不及ACE2竞争表位抗体，但可能更耐受突变，能避免免疫逃逸。

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新冠假病毒中和检测服务

义翘神州新冠假病毒中和检测平台，已成功筛选到多株中和抗体，并完成国内多个检测服务，服务咨询请联系cro-service@sinobiological.com

人源化中和抗体（货号：40150-D001）即采用Delta假病毒（货号：PSV011）验证中和活性（IC50=0.2 ug/mL），可作为新冠假病毒检测服务阳性抗体对照

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新冠假病毒产品系列表

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新冠病毒中和抗体产品

TBD：To be determined

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新冠病毒Elisa试剂盒产品

• 新冠病毒抗原蛋白检测试剂盒

• 新冠病毒抑制剂筛选试剂盒

• 新冠病毒抗体滴度检测试剂盒

• 新冠病毒RBD总IgG定量试剂盒

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新冠Spike Peptide Pool 多肽库

义翘神州开发的SARS-CoV-2抗原多肽库可用于抗原特异性T细胞刺激，可通过ELISPOT或ICS (intracellular cytokine staining)检测抗原特异性T细胞免疫反应。

新冠假病毒研究背景

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开发假病毒的意义

       病毒研究需探索病毒致病机理，后续还需制备病毒检测标准品，开发检测试剂，筛选抗病毒药物和设计疫苗，同时还需要合适的工具对诊断试剂、治疗与预防性药物进行效果评价。但病毒的传播性和致病性导致研究和开发工作面临安全风险。

       新冠病毒是高致病性呼吸道病毒，感染性极强，尤其是Omicron突变位点之多，其在部分区域的迅速流行更引起了全球的密切关注。然而，活病毒的研究对实验室安全级别要求极高，需要达到P3以上。目前国内能满足条件的实验室只有40多家，完全不能满足常规科学研究。因此，需开发一种能够在较低安全级别实验室进行研究的活病毒替代品。

       假病毒（Pseudovirus）正是基于此需求而开发，可在二级安全实验室使用。假病毒模拟病毒入侵细胞的过程，且只能感染一次细胞，不能复制，安全性高。而且相比传统的通量低、耗时长的蚀斑形成实验，可实现高通量快速检测。目前，假病毒已广泛用于病毒感染机制研究、中和抗体及抗病毒药物筛选和评价、血清中和抗体检测以及疫苗效价评估等领域。

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新冠假病毒的应用

       新冠Spike蛋白（S蛋白，刺突糖蛋白），包含S1和S2两个亚基。S1亚基的受体结合区RBD通过与人ACE2蛋白结合，介导病毒与宿主细胞膜融合并进入细胞。对于新冠潜在药物筛选，早期研究大多集中在阻断“钥匙”与“锁”的结合，即RBD与ACE2的结合，从而达到阻断病毒进入细胞的作用。然而随着新冠病毒发生持续突变，疫苗保护力下降和中和抗体药物失效的风险增大。义翘神州采用自主研发的多种表位的中和抗体检测时，也发现多株抗体对Beta、Gamma突变株的中和能力明显下降（竞争ELISA试验）。Omicron Spike蛋白上有超过35个突变，RBD区域更高达15个突变，提示现有中和抗体药物和疫苗对Omicron的有效性有下降风险。

       从现有数据来看，靶向保守表位的设计中和抗体，是避免中和抗体药物失效较为可靠的一种方法。近期的研究已发现多个保守表位的新冠中和抗体，这些抗体大多不能直接竞争性封闭RBD与ACE2结合的关键表位，而是靶向非ACE2竞争的表位，其中部分抗体的识别表位，是当Spike蛋白构象发生变化时才暴露的隐藏表位，例如贺勤森癌症研究中心生化学家史达尔(Tyler Starr) 研究团队发现的S2H97，以及复旦大学应天雷团队发现的CR3022。12月8日获批的我国首个自主知识产权新冠病毒中和抗体联合治疗药物，安巴韦单抗和罗米司韦单抗就是一对非竞争性保守表位抗体。

       常用的ELISA竞争法中和抗体试剂盒，只能用于筛选封闭ACE2竞争表位的中和抗体或药物。而假病毒模拟活病毒结构与入侵机制，表面表达全长Spike蛋白，可用于ACE2竞争和非竞争两种机制中和物的筛选，是筛选保守表位新冠中和抗体的有效工具。

       义翘神州自主研发的新冠Spike系列假病毒，高度模拟新冠病毒通过Spike-ACE2入侵目的细胞的过程，安全性高，能有效代替活病毒进行细胞水平中和活性检测，可用于高通量中和抗体/抑制物的筛选，以及疫苗保护力评估。

新冠假病毒中和检测原理示意图

中和原理1：抗体直接封闭Spike RBD和ACE2的结合，导致假病毒无法进入细胞；

中和原理2：抗体不直接封闭Spike RBD和ACE2的结合，但抗体与Spike结合后产生的空间位阻妨碍了RBD与ACE2的结合，或者抗体的结合阻止了S1和S2亚基的切割，从而干扰膜融合，导致假病毒无法进入细胞。

参考文献：

1. Tyler N. Starr, et al. SARS-CoV-2 RBD antibodies that maximize breadth and resistance to escape. Nature. 2021 Sep;597(7874):97-102.

2. Meng Yuan, et al. A highly conserved cryptic epitope in the receptor binding domains of SARS-CoV-2 and SARS-CoV. Science . 2020 May 8;368(6491):630-633.

3. Tingting Li, et al. Cross-neutralizing antibodies bind a SARS-CoV-2 cryptic site and resist circulating variants. Nat Commun. 2021 Sep 27;12(1):5652.

4. https://www.bloomberg.com/news/articles/2021-12-07/omicron-doesn-t-escape-pfizer-vaccine-completely-lab-head-says

5. https://www.ahri.org/wp-content/uploads/2021/12/MEDRXIV-2021-267417v1-Sigal.pdf

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