【衡道丨干货】免疫组化陷阱知多少

本文转载自「医学徐琦老师」，作者：徐琦

虽然免疫组化整套流程很多同学能够完整的学下来，但好的实验结果却不是那么容易获得，若是想获得见刊的图片必须经历各种各样糟心实验结果的千锤百炼，那作为新手们该避免哪些陷阱呢？今天就带你一一揭晓！

染色失败常见情况

• 切片全部为阴性，包括阳性对照

① 染色未按步骤严格进行   

② 漏加抗体   

③复染或脱水剂使用不当     

• 切片全为阳性  

①DAB显色时间过长   

②抗体孵育时间过长   

③抗体浓度过高     

• 切片背景过深   

①内源性过氧化物酶并未完全阻断   

②漂洗不够   

③封闭时间过短     

• 阳性对照染色较好，但是阳性标本却呈阴性  

抗体问题

• 抗体千万别嫌贵，真的一分价钱一分货，建议使用特异性、纯度、效价高的单克隆抗体，一般多克隆抗体会比较容易出现非特异性染色。 • 另外要注意抗体的有效期。 • 一般应根据抗体说明书先做预实验摸索抗体的理想浓度，不能简单的按照说明书来做。

DAB染色时间

• DAB的染色时间并不是一成不变的，一旦出现浅棕色应立即终止。   • 如果棕色出现时间很短，说明抗体的浓度高。   • 如果棕色出现时间很长没说明抗体的浓度低。   • DAB应现配现用，注意避光保存。  

组织变干

• 一次染片不建议染太多，几张即可。   • 一定注意让试剂充分覆盖组织，可以提前用组化笔圈出组织，避免试剂流走。  

清洗不充分

• 清洗一定要充分，PBS溶液一定用双蒸水现配。  

内源性酶和生物素

• 在肝脏、肾脏等组织中内源性生物素含量丰富，极易出现非特异性染色。   • 对于内源性生物素，染色前将切片浸于 25 μg/ml 亲和素溶 液中15 min，PBS 清洗15min 后即可染色；也可以用 24 mg/ml 的卵白素封 片 15 min。    

本文转载自《医学徐琦老师》

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