如何利用细胞培养瓶进行细胞传代操作

     细胞传代是指需要将分割成小的部分，重新接种到另外的培养容器内，再进行培养的过程。细胞培养瓶是传代过程中的一种常用耗材，那么细胞传代的步骤具体是怎样的呢？

T75细胞培养瓶

1、从培养箱取出细胞培养瓶，用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒并转移到超净台。

2、打开盖子，轻轻吸出旧的培养液，用巴氏吸管加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次，弃去PBS缓冲液。

3、可用移液器加入1-2ml胰酶，“十字”晃动，使胰酶充分接触细胞。

4、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台，镜下观察细胞消化情况，当细胞变圆且大量脱落时，准备终止消化，用75%的酒精喷洒瓶子表面，转移到超净台。

5、用移液器（或巴氏吸管）加入等量含血清培养基，终止消化。移液器充分吹打，使细胞能够完全脱落。

6、将瓶中混合液体转移至离心管中，配平，离心5分钟左右。

7、离心好后，用酒精喷壶喷洒离心管表面，转移进超净台，打开盖子，将上清液倒入废液缸。

8、加入适量体积含血清培养基，用移液器或巴氏吸管轻轻吹打，制成细胞悬液。

500mlPETG血清培养基瓶

9、将细胞悬液分装进2个（或多个）洁净灭菌培养瓶，加入适量培养基，盖好盖子。

10、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台，观察细胞情况，细胞应保证一定数量，数量太少会影响生长情况。

11、在瓶子上做标记，注明传代时间、细胞种类、操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶体表面，整理操作台，用75%酒精擦拭超净台台面，清理废液和垃圾。

40层细胞工厂

以上是利用细胞培养瓶进行细胞传代的具体过程，注意在操作时应该穿好灭菌服，戴好灭菌手套和口罩，全程注意无菌操作，避免细胞受到污染。

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