【衡道丨笔记】「三甲病理现场」课程学习笔记（十六）：黑色素瘤的BRAF分子检测

「白求恩·肿瘤病理学社」之「三甲病理现场」，旨在促进国内恶性黑色素瘤病理诊断的规范化、增强相关分子检测意识，提高恶黑精准诊断水平。

衡道病理特邀撰稿老师根据「白求恩·肿瘤病理学社」之「三甲病理现场」第九场直播会议中天津市肿瘤医院赵纲教授的分享主题 《黑色素瘤的BRAF分子检测》梳理 配套学习笔记。

BRAF基因突变分类依据

分类依据：  

• RAS依赖状态

• 二聚体状态

• 激酶活性

BRAF基因分类: I类突变（位于激酶活化片段）

代表位点：V600D/E/K/R/M

功能：

1. 强活化的激酶活性，结构性活化MAPK通路；

2. MAPK持续活化反馈抑制RAS，阻止BRAF二聚化，保持单体构象（对BRAF抑制剂是关键）。

V600E的突变发生率最高，占V600突变中的91.9%

BRAF抑制剂单药会导致迅速耐药   MAPK 通路再激活是BRAF 抑制剂单药治疗耐药的主要机制，包括：  

• 突变C121S激活MEK1

• 激活突变(Q61K/R)上调NRAS

• 增加MAP3K8基因座拷贝数过度表达COT/Tp12

• 选择性BRAF剪接或BRAF V600E基因扩增

• 通过受体酪氨酸激酶(RTK)信号激活PI3K-AKT和RAS-CRAF-MEK通路(血小板源性生长因子β(PDGFβ)过表达和IGF1R的激活)

临床治疗: V600少见突变从双药治疗获益显著   双药比单药治疗呈现显著优势：  

BRAF基因分类: II类突变（位于激酶活化片段和p-LOOP）

代表位点：K601, L597, G464, and G469

功能：

1. 1. 中-强活化的激酶活性（ 突变使活化区与p-LOOP交互作用解除，解除激酶的自身抑制状态），中度活化MAPK通路；

2. 2. 依赖BRAF二聚化，持续二聚体构象（   对BRAF抑制剂是关键   ）。

治疗策略：

1. 新型的BRAF抑制剂（二聚体有效）；   2. MEK抑制（有效率较低）。  

BRAF基因分类: III类突变（位于p-LOOP、催化环）

代表位点 ： G466, N581, D594, and D596   

功能：   

1. 1. 低、无激酶活性（   突变使活化区与p-LOOP处于无功能状态   ），与CRAF及野生型BRAF形成异源二聚体，与RAS-GTP高亲和力，活化MAPK通路；

2. 2. 常伴有上游原癌基因突变导致活化，如RAS、NF1及EGFR；

3. 3. 依赖BRAF二聚化，持续二聚体构象（对BRAF抑制剂是关键）。 

治疗策略：   

1. 1. III类突变属于无活性突变，BRAF抑制剂无效；  

2. 2. III类突变常伴有上游基因的变异，黑色素瘤中NF1、RAS突变（暂无RTK），推荐MEK抑制剂；  

3. 3. 可根据测序结果，对于非NF1/RAS突变肿瘤，选择相对应的RTK抑制剂联合MEK抑制剂。  

4. 
   

BRAF突变检测方法学及检测规范

BRAF V600常用检测方法  

1.ARMS-PCR技术原理

Amplification Refractory Mutation System (ARMS, 扩增阻滞突变系统)。  

设计扩增引物的同时，加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。  

特点：   

1. 1.  ARMS 方法普及度较高；

2. 2. 对已知突变（点突变、短的插入和缺失）进行检测；

3. 3. 检测灵敏度较高，能够达到1%左右的最低检出率；

4. 4. 操作比较简单，报告周期短（2-3天）；  

5. 5. 收费较低。    

6. 
   

2.免疫组化（VE1抗体)

BRAF VE1抗体是目前国内唯一有注册证的用于BRAF V600蛋白检测抗体。

3.一代测序（Sanger测序法）

用不同的荧光素标记四种碱基，采用双脱氧末端终止测序法，通过采集 荧光信号来检测DNA序列，进而对DNA的点突变、插入、缺失进行检测。  

特点：   

1. 1. 可以检测V600突变以及部分罕见突变；  

2. 2. 检测灵敏度较低；  

3. 3. 标本中肿瘤组织含量要求相对较高（＞20%），检测时间较长；  

4. 4. 手工操作，检测时间长，报告周期1周以上；

5. 5. 通量低，一次只能检测少数几个基因。    

6. 
   

4.二代测序技术（NGS）

能同时对上百万甚至数十亿个DNA分子进行测序，实现大规模、高通量测序的目标。  

特点：

1. 1. 敏感性和特异性较高；  

2. 2. 实现多种基因同时检测;

3. 3. 可广泛检测多种突变;

4. 4. 需要生物信息学分析；

5. 5. 报告时间一般10-14天。 

5.BRAF检测方法比较

6.BRAF突变病理检测流程

检测的各个环节都会影响最终结果  

本公众号发布所有原创内容，版权均属衡道医学病理诊断中心及相关版权方所有。纯属学术交流，如涉及版权疑议，请联系我们删除！

欢迎个人形式转发，如需转载请提前联系本公众号，并在文首注明「来源：衡道病理」。未经授权的转载是侵权行为，版权方保留追究法律责任的权利。

打赏