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北京市肺炭疽样品采集和运送技术方案（试行）

   为科学、及时采集和运送肺炭疽病例样本和环境样本，规范肺炭疽样本的采集和运送过程，保证生物安全，为肺炭疽疫情调查处置提供指导，特制定本方案。

一、样本采集对象  

（一）肺炭疽疑似病例、临床诊断病例、确诊病例及其他需要进行肺炭疽诊断或排除诊断者。

（二）可能被炭疽芽胞杆菌污染的物品及环境

二、样本采集要求  

（一）从事样本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。在标本采集过程中，采样人员应采取生物安全二级个人防护措施进行安全防护。

（二）住院病例的标本由所在医院医护人员在属地区疾病预防控制中心专业人员指导下采集。

（三）标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。

（四）密切接触者标本由属地区疾病预防控制中心负责采集。

（五）根据实验室检测及疫情处置工作的需要，结合病程再次采样。

三、样本种类及采集方法  

疑似炭疽病例应根据临床表现采集样本。可能被炭疽芽胞杆菌污染的物品及环境，应根据现场条件，尽量多点、面采集。样本管内不做任何处理，及时送检。病例样本采集应尽可能在病人使用抗生素前进行，环境样本应在疫情发生后尽快采集。样本须放置在干燥无菌的离心管中，不可放置在病毒采样管中。

（一）病例样本

1、皮肤涂抹样本  

有皮肤炭疽表现的病例，在水泡期，使用2支无菌棉拭子采集疱疹水泡液，也可使用无菌注射器抽取疱疹内液体。结痂期则需小心提起焦痂，用无菌棉签在患处转动2-3次，采集焦痂下的分泌物或渗出液。拭子样本应直接置于干燥无菌的离心管中。或者可使用无菌生理盐水浸湿的无菌棉拭子涂抹焦痂表面和周围皮肤。

2、血液样本  

按照标准静脉血采血程序，采集疑似炭疽病例3-5mL静脉血。对于有皮肤炭疽表现的病例，采血部位应选择在远离皮损附近可能被污染的区域。使用非抗凝分离胶采血管，分别在急性期和发病后1-2周（恢复期）采集双份血清。

3、痰液样本  

疑似肺炭疽病例可采用自然咳痰法采集痰液样本。患者用力吸气后咳出1-2口痰，样本须放置在干燥无菌的离心管中。痰液收集困难时，可使用无菌棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用无菌棉拭子采集样本，放入干燥无菌的离心管中。昏迷患者可用负压吸引法采集痰液。肺炭疽患者、特别是早期肺炭疽患者痰液和咽拭子检出阳性率较低，尽量采集胸水样本。

4、支气管肺泡灌洗液样本  

疑似肺炭疽病例可采用纤维支气管镜采集样本。按照临床有关支气管肺泡灌洗液采集操作规范和严格无菌操作，利用纤维支气管镜进行灌洗，采集肺泡灌洗液，将3-5 mL灌洗液放入干燥无菌的离心管中。

5、胸腔积液样本  

疑似肺炭疽病例可采用胸腔穿刺术采集胸腔积液样本。对于有皮肤炭疽表现者，穿刺部位应尽量远离皮损附近可能被污染的区域。按照临床有关胸腔积液样本采集操作规范，经X光或超声定位确定穿刺部位，通常在患者7-9肋骨间插入穿刺针并抽取胸腔积液，将3-5mL胸腔积液放入干燥无菌的离心管中，不做抗凝处理。胸腔积液标本一般早期即可检出炭疽芽孢杆菌，应尽量采集。

6、粪便及呕吐物样本  

肺炭疽病例有肠道症状者，采用常规方法采集粪便样本和呕吐物样本。挑取5-10g样本放入干燥无菌的离心管中，粪便尽量选取有脓血等病理变化的部位。采集样本时应避免消毒剂、尿液等影响。

7、脑脊液样本  

疑似肺炭疽病例出现脑膜刺激征时，按照临床有关脑脊液采集操作规范，采集3-5mL脑脊液样本，放入干燥无菌的离心管中。穿刺部位应尽量远离皮损附近可能被污染的区域。

（二）环境及动物样本

1、可疑物品样本  

草料、皮毛等容易取样的物品怀疑被炭疽芽胞杆菌污染时，可在多个部位分别取少量样本，毛皮等可剪碎，放入干燥无菌的离心管中。

体积较大的物品怀疑被炭疽芽胞杆菌污染，可使用无菌生理盐水浸湿的无菌棉拭子进行表面涂抹，拭子放入干燥无菌的离心管中。

可疑病死畜的组织、肌肉取50g左右，剪成小块，放入干燥无菌的离心管中。

2、土壤样本

病畜死亡或宰杀地点，  用无菌铲取50g左右血液污染的土壤，放入干燥无菌的离心管中。

四、样本运送要求  

样本运送前应做到样本标识清晰准确，样本容器外表面消毒，送检单应单独放置并与样本同时运送。样本包装完整，由专人专车直接送达实验室，并与实验室接收人员交接样本。

（一）样本送检单

送检前完成样本送检单填写并与样本分开放置，保证清洁。

样本送检单上至少包括如下信息：

1、病例信息（仅限于病例样本）：姓名、性别、年龄等；

2、样本信息：样本送检编号、样本类型；

3、采集信息：采样单位、采样时间、采样地点、采样部位（仅环境样本）；

4、送检信息：送检单位、送检时间、送检人。

（二）样本标识

样本采集容器外表面显著位置应清晰准确标注样本送检编号，并与样本送检单上的信息保持一致。

（三）样本包装

炭疽芽胞杆菌属于第二类病原微生物，相关样本包装应采用国际民航组织《危险物品航空运输技术细则》中A类包装（对应联合国编号为UN2814）。

（四）样本运送要求

运输时间在1小时内，可以直接室温运送，如运输时间超过1小时，应在2～8℃运输，建议在外包装容器和辅助容器（即样本运输箱和黄桶）之间放置冰排，尽快运送。培养标本不可冷冻。

（五）样本交接  

样本送达实验室后，样本运送人员须与收样人员交接样本。

五、生物安全要求  

（一）样品采集过程

样本采集人员需采取传染病二级防护措施，即佩戴N95医用防护口罩、工作帽、护目镜或面屏、双层医用乳胶手套、医用连体防护服、工作鞋和鞋套。

（二）样本包装过程

采集的所有样本需放置在干燥无菌的离心管中，离心管外表面应清洁，外包吸水材料后放入黄桶中，黄桶清洁后和冰排一起放入转运箱内。操作过程中保证转运箱外表面不被污染。

（三）样本运送过程

按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）和《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（中华人民共和国卫生部第45号令）等有关规定执行。样本运送前需办理准运证。样本须专人专车直接送达实验室，并与实验室接收人员交接样本。运送过程中样本送检单与样本分开放置，同时运送。送样人员穿工作服，不得在中途打开运输箱。

来源：北京疾控