Guardant Reveal！

⑴ 2021年2月16日，Guardant Health（GH）正式商业化Guardant Reveal液体活检产品，用于早期结直肠癌患者的MRD检测和复发监测；

*此前此前一直以LUNAR-1的名称进行开发

⑵ 2021年4月1日，GH宣布，美国纽约州卫生部临床实验室评估计划（CLEP）已批准Guardant Reveal液体活检产品用于检测和监测早期结直肠癌患者（CRC，II和III期）的MRD；

*GH可通过其现有的CLIA认证实验室以LDT的方式为纽约州早期CRC患者提供MRD检测，费用为3,500美元，TAT为7天

⑶ Guardant Reveal获CLEP批准时，尚未披露太多技术细节，参考的7篇文献综述中，1-6篇均是其他家数据，第7篇是GH自己的，但此时数据尚未公开发表；

⑷ 2021年4月29日，《Clinical Cancer Research》在线发表了“（仅）使用血浆ctDNA检测结直肠癌患者微小残留病灶（MRD）”的文章，首次公开了Guardant Reveal的研究数据：MRD检测灵敏度达到91%，特异性达100%，这些发现支持了仅血浆ctDNA MRD检测的潜在临床应用；

*血浆ctDNA是一种很有前途的非侵入性生物标志物，可用于CRC和其他类型癌症治疗后MRD检测

⑸【技术路线】Guardant Reveal的MRD技术路线是Tumor-agnostic策略，也可以称之为Tumor-uninformed，即仅依赖于血浆ctDNA进行MRD检测（无需组织活检）；

⑹【检测信息】Guardant Reveal检测ctDNA突变（LoD为0.01％）+ctDNA甲基化，即基于血浆cfDNA的基因组和表观基因组信息，panel大小约为0.5Mb，测序系统NovaSeq 6000；

⑺【样本要求】20ml外周血（2根10ml Streck管），8-10ml血浆，中位cfDNA含量在 60ng（如果还有公司说一管血液（10ml）能稳定检出0.01%低频突变，请直接拉黑吧，因为太不靠谱了；抽提效率+质检损耗+建库效率+捕获效率+测序深度损失，不可能做到稳定检出0.01%）；

*摘自第18届肺癌高峰论坛上吴一龙教授PPT

⑻【临床研究】入组103例接受根治性手术的CRC患者，其中84例患者可评估（手术治疗39例+完成辅助治疗45例），包括I期（9.5％），II期（23.8％），III期（47.6％）和IV期（19％），首次界标采血时间（landmark timepoint）为完成最终治疗治疗后一个月（中位31.5天），并进行了1年以上的随访；

84例患者中，4例没有在最终治疗后适当的采血（被排除在外），另外10例因为治疗后样本产生的cfDNA提取量不足或未通过测序质控也被排除在主要分析之外，最终70例患者被纳入主要分析之中；

初步分析中，评估了在最终治疗完成约一个月后（平均31.5天）提取的单个首次界标血浆样本，70例可评估患者中，17/70（24%）患者在完成最终治疗后检测到ctDNA，其中15/17（88%）患者复发（特异性95.4%），由于另外2例没有复发的患者，临床随访都不到一年，所以特异性为100%（15/15），灵敏度为55.6%；

在首次界标时间点未检测到ctDNA的49例患者中，有12例（24.5％）复发，复发的灵敏度和特异性分别为55.6%和100%；

⑼ 【MRD灵敏度】Guardant Reveal的MRD检测灵敏度不是宣称可达到91%，特异性可达100%吗？为什么现在的结果却是55.6%的灵敏度和100%的特异性呢？灵敏度是虚假宣传吗？

NO，在前面写《MRD番外篇》的时候，我们其实有提到：“就目前而言，单次术后ctDNA检测的灵敏度（MRD）小于50%”，所以Guardant Reveal在首次界标采血时间（中位31.5天）的MRD灵敏度为55.6%是正常的；

⑽【纵向监测分析】MRD如何才能达到91%的灵敏度呢？先前的研究表明，纵向血浆监测（连续复发监测）可提高MRD预测复发的灵敏度，也就说在后续的时间点至少有一个可评估的纵向标本（平均每个患者3个），整合纵向标本可提高MRD灵敏度，结合监测患者的表现（临床复发4个月内），MRD灵敏度可提高到91%（55.6%→69.0%→90.9%）；

⑾【甲基化与MRD】Guardant Reveal是第一个利用ctDNA突变和ctDNA甲基化的MRD分析（另一家是BNR），ctDNA突变和ctDNA甲基化分别对MRD的灵敏度贡献有多大呢？

首次界标采血时间（中位31.5天）的ctDNA突变MRD灵敏度仅有40.7%，ctDNA甲基化MRD敏度仅有48.2%，两者结合的MRD灵敏度能达到55.6%；纵向监测分析中亦是如此，单独使用ctDNA突变的MRD灵敏度分别为55.2%和72.7%，单独使用ctDNA甲基化的MRD灵敏度分别为48.3%和63.6%，但通过整合ctDNA突变和ctDNA甲基化，MRD灵敏度分别提高到69.0%和90.9%（MRD检测灵敏度相对提高25%~36%，提示ctDNA甲基化可能是MRD检测的有效方法）；

⑿【CEA不能预测复发】作为比较的基础，该研究评估了标准治疗CRC血清肿瘤标志物CEA在同一队列中预测复发的能力，结果显示，CEA不能预测复发；

⒀ 在这项前瞻性队列研究中，报告了仅使用血浆分析MRD的初步结果，该分析设计用于基于肿瘤未知（tumor-uninformed）ctDNA的MRD检测，显示出良好的灵敏度和特异性，与先前报道的基于肿瘤知情方法（tumor-informed）相当；

⒁ GH目前正在进行多项前瞻性的干预性临床试验，如COBRA，PEGASUS等，利用Guardant Reveal的MRD检测来预测II/III期结肠癌术后患者的辅助治疗效果，这些前瞻性的试验可以告诉我们在ctDNA MRD环境中患者是否可以从辅助治疗中获益。

参考资料： 

1.https://investors.guardanthealth.com/press-releases/press-releases/2021/Guardant-Health-Launches-Guardant-Reveal-Liquid-Biopsy-Test-for-Residual-Disease-and-Recurrence-Monitoring-in-Patients-with-Early-Stage-Colorectal-Cancer/default.aspx

2.https://investors.guardanthealth.com/press-releases/press-releases/2021/Guardant-Health-Receives-New-York-State-CLEP-Approval-for-Guardant-Reveal-Blood-Test-to-Detect-and-Monitor-Residual-Disease-in-Patients-with-Early-Stage-Cancer/default.aspx

3.https://investors.guardanthealth.com/press-releases/press-releases/2021/Study-Shows-Guardant-Reveal-Blood-Only-Liquid-Biopsy-Test-Predicts-Risk-for-Colorectal-Cancer-Recurrence-with-Industry-Leading-Sensitivity/default.aspx

4.Parikh Aparna R,Van Seventer Emily E,Siravegna Giulia et al. Minimal Residual Disease Detection using a Plasma-Only Circulating Tumor DNA Assay in Colorectal Cancer Patients.[J] .Clin Cancer Res, 2021, undefined: undefined.

5.https://meetinglibrary.asco.org/record/194224/abstract

6.https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04068103

7.https://clinicaltrials.gov/ct2/show/record/NCT04259944