精确制导，一击即中---人细小病毒B19血清学检测之抗原选择

人细小病毒B19（HumanParvovirus B19）是常见的病毒之一。1975年，在对无症状献血者的血液样本进行乙型肝炎病毒筛查时，首次发现了这种病毒。由于其是在B组的第19号样本中发现的，故命名为B19病毒。

B19病毒是全球性常见的人类传染病原体，可引起诸如贫血、流产、关节炎等。调查B19病毒的IgG抗体阳性率，结果发现，1-5岁的儿童为2%-15%，6-19岁的儿童为15%-60%，成人为30%-60%，老年人为85%以上。

B19病毒感染的临床表现受感染者的年龄和免疫状态等因素影响。在B19病毒的感染中，孕妇感染尤其引起重视。据统计，每年育龄妇女的血清转换率约1.5%。

当前，各国均出台B19病毒相关的诊疗指南或专家共识。包括美国妇产科医师学会、加拿大母胎医学委员会和欧洲等国家均明确：若孕妇接触了B19病毒，应检测特异性IgG和IgM，以判断是否产生危害。

中国在2020发布《TORCH实验室规范化检测与临床应用专家共识》，强调孕期应防范原发感染，推荐定量检测特异性IgG和IgM来判断感染状态。见图1。

2021年4月，国家药品监督管理局发布《人细小病毒B19 IgM/IgG抗体检测试剂注册技术指导原则》，对B19病毒的抗体检测试剂进行明确指导,推荐使用结构蛋白进行抗体检测。如图2。VP2是结构蛋白中被研究最深入的蛋白之一。

我们尝试从蛋白质组学角度理解该建议。B19病毒是一种小型无包膜的ssDNA病毒。其编码主要蛋白有衣壳蛋白VP1、衣壳蛋白VP2和非结构蛋白NS1，如图3。衣壳蛋白呈二十面体对称排列。据研究，VP2约占总衣壳蛋白95%，VP1约占5%。

通过蛋白质印迹法，用特异性抗体检测病毒衣壳蛋白的表达。发现衣壳蛋白VP2（58kDa）在感染后12h-24h内开始积累。感染后VP2蛋白积累与VP-mRNA表达量增加的时间段非常吻合。此外，没有观察到衣壳蛋白VP1（84kDa）的信号。如图4。

另有研究表明，分别使用VP2重组蛋白与B19病毒裂解物，检测临床血清（含特异性IgG和IgM），两者具有高的相关性。如图5。

有基础研究证明，结构蛋白VP2在哺乳动物或昆虫细胞中表达，在不存在病毒DNA的情况下可以自组装，形成结构与病毒粒子相似的蛋白，也就是病毒样颗粒。该研究称VP2病毒样颗粒的免疫原性和免疫反应性类似天然病毒粒子。如图6。

人细小病毒B19作为一种重要的人类病原体，在免疫力低下的患者中可引起严重疾病。随着对病毒的认识日益增强，血清学诊断的价值也被重视。诊疗指南、试剂注册指导原则、医疗收费标准等驱动因素日益完善，也从侧面证明血清学诊断在B19病毒防治中的价值。

抗原是抗体检测试剂的关键。我们推荐衣壳蛋白VP2病毒样颗粒用于特异性IgG和IgM检测。VP2占总衣壳蛋白约95%，在病毒感染12h后开始在体内表达累积，是急性感染/早期感染出现的标志物之一。此外，重组VP2蛋白可自组装成病毒样颗粒，蛋白结构与天然病毒粒子相似，可以最大保留免疫反应性。使用VP2病毒样颗粒，在技术上更符合试剂注册指导原则的要求。

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